一种新型冠状病毒SARS-CoV-2核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术属于生物核酸检测
，具体涉及一种新型冠状病毒SARS
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CoV
‑
2核酸检测试剂盒。

技术介绍

[0002]针对新型冠状病毒SARS
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CoV
‑
2的核酸检测，实时荧光逆转录聚合酶链反应(qRT
‑
PCR)检测方法仍为SARS
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CoV
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2核酸检测首选方法，但qRT
‑
qPCR需要多个步骤、高成本的试剂和昂贵的实验室仪器，并且不适合现场即时核酸检测(POCT)或家庭自测使用。
[0003]环介导等温扩增(LAMP)技术可以不依赖专门的仪器，可以实现现场的快速检测，反应温度60
‑
65℃，只需要水浴锅等简单加热器就可以进行反应且能目视判断结果。现有的商业SARS
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CoV
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2核酸RT
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LAMP(逆转录环介导等温扩增)试剂盒检测对象多为提取的核酸，在使用成本上并不比qRT
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PCR低，且在特异性较低易发生非特异性扩增产生假阳性结果。许多研究为了解决非特异性扩增会在RT
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LAMP基础上结合CRISPR技术，这无疑是更进一步增加了检测成本。核酸提取试剂不仅价格昂贵且需要专业人员和提取设备，同时增加了检测时间。为了解决这一问题，专利技术了与RT<br/>‑
LAMP适配的裂解试剂，针对咽拭子或唾液或鼻拭子等某一或多种样本免提取，在裂解液中处理10min或95℃热处理5min后，直接将样本进行扩增，操作仍相对较繁琐。因此专利技术了微流体盒和微流控芯片等核酸提取
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等温扩增
‑
杂交集成系统，相对的价格也较昂贵，并不能解决基层对于大流行性疫情的监测、防控需求。
[0004]环介导等温扩增(LAMP)技术的一个难点是引物设计，需要利用6对特殊引物识别靶基因的6个区段，且内引物FIP和BIP的序列较长，再加入环引物LF、LB增加扩增速率，因此引物混合液在长期保存中易形成引物二聚体。LAMP的反应最适温度在60
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65℃，没有95℃从而导致扩增灵敏度下降，现有的商业SARS
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CoV
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2核酸RT
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LAMP试剂盒灵敏度在40copises/反应—80copises/反应，远低于qRT
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PCR；检测时间需要30
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50min，虽然较常规qRT
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PCR的检测时间略有缩减，但快速qRT
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PCR试剂也可以达到这个检测时间。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种新型冠状病毒SARS
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CoV
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2核酸检测试剂盒，该试剂盒能够对新型冠状病毒SARS
‑
CoV
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2进行快速检测并可通过目视判断结果，为了减少检测时间和成本。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种新型冠状病毒SARS
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CoV
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2核酸检测引物组，包括SARS
‑
CoV
‑
2特异性基因S引物组或SARS
‑
CoV
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2特异性基因N引物组中的至少一种。本专利技术针对N基因和S基因设计2组特异性引物，具有高度特异性，对于新型冠状病毒的alpha、Beta、Delta、Omicron、Gamma等5种新冠亚型都能检测到，而且对于BA.1、BA.2、BA.3、BA.4、BA.5等变异毒株也不会发生漏检；本专利技术经过对引物设计的优化和筛选，最终优选出扩增效率高、灵敏度高的引物组，实现反应在20min内完成。
[0007]作为本专利技术所述新型冠状病毒SARS
‑
CoV
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2核酸检测引物组的优选实施方式，所述
SARS
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CoV
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2特异性基因S引物组包括外引物S
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F3和S
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B3、内引物S
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FIP和S
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BIP、环引物S
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LF和S
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LB；所述S
‑
F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述S
‑
B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述S
‑
FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述S
‑
BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述S
‑
LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述S
‑
LB的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0008]作为本专利技术所述新型冠状病毒SARS
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CoV
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2核酸检测引物组的优选实施方式，所述SARS
‑
CoV
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2特异性基因N引物组包括外引物N
‑
F3和N
‑
B3、内引物N
‑
FIP和N
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BIP、环引物N
‑
LF和N
‑
LB；所述N
‑
F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述N
‑
B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述N
‑
FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述N
‑
BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述N
‑
LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述N
‑
LB的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
[0009]本专利技术还提供所述的新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2核酸检测引物组在制备新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2核酸检测产品中的应用。
[0010]本专利技术还提供一种新型冠状病毒SARS
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CoV
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2核酸检测试剂盒，包括冻干反应预混物、采样管、定量滴管和样本采集器。
[0011]作为本专利技术所述新型冠状病毒SARS
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CoV
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2核酸检测试剂盒的优选实施方式，所述冻干反应预混物包括5
×
RT
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LAMP反应液、引物组和冻干复合保护剂。本专利技术的冻干预混物已将所需反应组分按相应比例组合，经采样液与样本混合液复溶即溶即用，可避免反复加样，使用更加便捷、准确，更适于基层现场检测。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2核酸检测引物组，其特征在于，包括SARS
‑
CoV
‑
2特异性基因S引物组或SARS
‑
CoV
‑
2特异性基因N引物组中的至少一种。2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2核酸检测引物组，其特征在于，所述SARS
‑
CoV
‑
2特异性基因S引物组包括外引物S
‑
F3和S
‑
B3、内引物S
‑
FIP和S
‑
BIP、环引物S
‑
LF和S
‑
LB；所述S
‑
F3的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述S
‑
B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述S
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FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述S
‑
BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述S
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LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述S
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LB的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2核酸检测引物组，其特征在于，所述SARS
‑
CoV
‑
2特异性基因N引物组包括外引物N
‑
F3和N
‑
B3、内引物N
‑
FIP和N
‑
BIP、环引物N
‑
LF和N
‑
LB；所述N
‑
F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述N
‑
B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述N
‑
FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述N
‑
BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述N
‑
LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述N
‑
LB的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭爱女，郭永超，王艳平，蔡锦刚，陈春花，
申请(专利权)人：深圳联合医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：