重组色蛋白、其制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及重组色蛋白、其制备方法及应用。该重组色蛋白是通过将目标色蛋白N端的预设长度的序列替换为MASSE、并将其C端的预设长度的序列替换为GA而获得。重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1至5之一。本发明专利技术重组色蛋白不仅对大肠杆菌没有毒性，还具有优于fwYellow和mRFP1的色彩；可以应用于基因克隆的筛选，还可以应用于感应代谢诱导物，以指示大肠杆菌生长状态。长状态。长状态。

【技术实现步骤摘要】
重组色蛋白、其制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及一种重组色蛋白、其制备方法及应用，属于生物


技术介绍

[0002]色蛋白家族（Chromoprotein）、荧光蛋白家族（Fluorescent Protein）及其工程改造的突变体，被广泛用作基因表达的报告基因。他们大部分来源于珊瑚和水母等腔肠动物，含有同源的三氨基酸发色团/荧光团，其中被研究最透彻的要属来自于Aequorea victoria的GFP及其衍生物，以及来自于Discosoma sp的DsRed及其衍生物。在自然环境下，相比于荧光蛋白，色蛋白可强烈吸收可见光，在特定场景有独特的优势，例如无仪器检测分析，轻的紫外线损伤，避免背景荧光，可用于荧光共振能量转移（FRET）的淬灭和光声成像。色蛋白已经被应用于克隆生物体中的标记，教学和生物传感器。
[0003]当前常用的色蛋白大多数仍是天然的氨基酸序列，相比于被深度研究和改造过的荧光蛋白，其色彩往往不够鲜明，且这些色蛋白通常对大肠杆菌有毒性，会明显干扰大肠杆菌的生长。来自于Aequorea victoria的GFP及其衍生物、以及来自于Discosoma sp的DsRed及其衍生物虽然有鲜明的色彩，但是其大多对大肠杆菌的毒性相当强烈，以至于它们不适合作为指示标志。这就大大限制了色蛋白的可选性以及应用范围。目前已知仅有两个不干扰大肠杆菌生长的色蛋白，即mRFP1和fwYellow。此外，当前发现的色蛋白以红色和蓝色居多，也有黄色，但是几乎没有合适的绿色色蛋白。因此亟待寻找或研发出更多对大肠杆菌没有毒性，且具有更多色彩的色蛋白，以更好地拓展色蛋白的应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是：克服现有技术存在的问题，提供一种重组色蛋白，对大肠杆菌没有毒性，显色明显，具有实用价值；同时还提供其制备方法，以及应用。
[0005]本专利技术解决其技术问题的技术方案如下：一种重组色蛋白，其特征是，通过将目标色蛋白N端的预设长度的序列替换为MASSE、并将其C端的预设长度的序列替换为GA而获得。
[0006]优选地，所述重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1至5之一。
[0007]优选地，所述目标色蛋白为mScarlet
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I，其N端的预设长度的序列为MVSKGE，其C端的预设长度的序列为GGMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1；该重组色蛋白命名为CP
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Pink，在白光下显洋红色，在蓝光下显红色荧光；或者，所述目标色蛋白为dTomato，其N端的预设长度的序列为MVSKGE，其C端的预设长度的序列为YGMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2；该重组色蛋白命名为CP
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Orange，在白光下显橙红色，在蓝光下显橙色荧光；或者，所述目标色蛋白为mCherry，其N端的预设长度的序列为MVSKGEEDNM，其C端的预设长度的序列为GGMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.3；该重组色蛋白命名为CP
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Voilet，在白光下显紫色，在蓝光下显深红色荧光；
或者，所述目标色蛋白为mhYFP，其N端的预设长度的序列为MVSKGE，其C端的预设长度的序列为MNELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.4；该重组色蛋白命名为CP
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Yellow，在白光下显黄色，在蓝光下显黄色荧光；或者，所述目标色蛋白为sfGFP，其N端的预设长度的序列为MSKGE，其C端的预设长度的序列为GMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.5；该重组色蛋白命名为CP
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Green，在白光下显绿色，在蓝光下显绿色荧光。
[0008]上文提到的各目标色蛋白本身有强烈毒性，其持续表达会导致大肠杆菌死亡，而上述重组色蛋白均对大肠杆菌没有毒性，且具有优于fwYellow和mRFP1的色彩；经实验验证，上述重组色蛋白可以应用于基因克隆的筛选，相比蓝白斑筛选，显色更快，正确率高，而且不受大肠杆菌菌株限制；还可以应用于感应培养基中的代谢诱导物，从而指示大肠杆菌生长状态。
[0009]本专利技术还提供：一种重组色蛋白的制备方法，其特征是，包括：将目标色蛋白N端的预设长度的序列替换为MASSE、并将其C端的预设长度的序列替换为GA，从而得到重组色蛋白。
[0010]优选地，所述重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1至5之一。
[0011]优选地，所述制备方法的具体过程为：将目标色蛋白mScarlet
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I的N端MVSKGE替换为MASSE，并将其C端GGMDELYK替换为GA，所得重组色蛋白命名为CP
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Pink，且其氨基酸序列为SEQ ID NO.1；该重组色蛋白在白光下显洋红色，在蓝光下显红色荧光；或者，将目标色蛋白dTomato的N端MVSKGE替换为MASSE，并将其C端YGMDELYK替换为GA，所得重组色蛋白命名为CP
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Orange，且其氨基酸序列为SEQ ID NO.2；该重组色蛋白在白光下显橙红色，在蓝光下显橙色荧光；或者，将目标色蛋白mCherry的N端MVSKGEEDNM替换为MASSE，并将其C端GGMDELYK替换为GA，所得重组色蛋白命名为CP
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Voilet，且其氨基酸序列为SEQ ID NO.3；该重组色蛋白在白光下显紫色，在蓝光下显深红色荧光；或者，将目标色蛋白mhYFP的N端MVSKGE替换为MASSE，并将其C端MNELYK替换为GA，所得重组色蛋白命名为CP
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Yellow，且其氨基酸序列为SEQ ID NO.4；该重组色蛋白在白光下显黄色，在蓝光下显黄色荧光；或者，将目标色蛋白sfGFP的N端MSKGE替换为MASSE，并将其C端GMDELYK替换为GA，所得重组色蛋白命名为CP
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Green，且其氨基酸序列为SEQ ID NO.5；该重组色蛋白在白光下显绿色，在蓝光下显绿色荧光。
[0012]本专利技术还提供：前文所述重组色蛋白用于筛选基因克隆的应用。
[0013]前文所述重组色蛋白用于感应培养基中代谢诱导物的应用。
[0014]编码前文所述重组色蛋白的核酸。
[0015]含有前文所述核酸的载体。
[0016]与现有技术相比，本专利技术通过对现有色蛋白的N端序列和C端序列进行改造获得了系列重组色蛋白，不仅对大肠杆菌没有毒性，还具有优于fwYellow和mRFP1的色彩；可以应用于基因克隆的筛选，还可以应用于感应代谢诱导物，以指示大肠杆菌生长状态。
附图说明
[0017]图1为本专利技术实施例2中pLevo
‑
Amp
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BluntGreen的质粒图谱。
具体实施方式
[0018]下面参照附图并结合实施例对本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组色蛋白，其特征是，通过将目标色蛋白N端的预设长度的序列替换为MASSE、并将其C端的预设长度的序列替换为GA而获得。2.根据权利要求1所述的重组色蛋白，其特征是，所述重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1至5之一。3.根据权利要求2所述的重组色蛋白，其特征是，所述目标色蛋白为mScarlet
‑
I，其N端的预设长度的序列为MVSKGE，其C端的预设长度的序列为GGMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1；该重组色蛋白命名为CP
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Pink，在白光下显洋红色，在蓝光下显红色荧光；或者，所述目标色蛋白为dTomato，其N端的预设长度的序列为MVSKGE，其C端的预设长度的序列为YGMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2；该重组色蛋白命名为CP
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Orange，在白光下显橙红色，在蓝光下显橙色荧光；或者，所述目标色蛋白为mCherry，其N端的预设长度的序列为MVSKGEEDNM，其C端的预设长度的序列为GGMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.3；该重组色蛋白命名为CP
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Voilet，在白光下显紫色，在蓝光下显深红色荧光；或者，所述目标色蛋白为mhYFP，其N端的预设长度的序列为MVSKGE，其C端的预设长度的序列为MNELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.4；该重组色蛋白命名为CP
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Yellow，在白光下显黄色，在蓝光下显黄色荧光；或者，所述目标色蛋白为sfGFP，其N端的预设长度的序列为MSKGE，其C端的预设长度的序列为GMDELYK，替换后所得重组色蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.5；该重组色蛋白命名为CP
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Green，在白光下显绿色，在蓝光下显绿色荧光。4.一种重组色蛋白的制备方法，其特征是，包括：将目标色蛋白N端的预设长度的序列替换为MASSE、并将其C端的预设长度的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨熹，钱莉春，赵碧玉，吴昕，郭文雅，姜伟，黎建军，
申请(专利权)人：苏州左旋星生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：