一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法技术

本发明专利技术属于癌症治疗领域，提供了具体涉及一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。本发明专利技术提供的shRNA包括shHTOMM22#1或shHTOMM22#2，shRNA抑制载体包括上述的shRNA和基础载体。shRNA抑制载体的制备方法包括以下步骤：将shRNA的正向引物和反向引物混合，退火，得到双链寡核苷酸；酶切基础载体得到敲低载体；将所述双链寡核苷酸和所述敲低载体进行连接，得到所述shRNA抑制载体。本发明专利技术通过在肝癌细胞中敲低TOMM22的表达，显著抑制癌细胞增殖；通过裸鼠成瘤实验，确定TOMM22的敲低对肿瘤生长具有显著抑制效果。有显著抑制效果。有显著抑制效果。

【技术实现步骤摘要】
一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法


[0001]本专利技术属于癌症治疗
，具体涉及一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。

技术介绍

[0002]肝癌是导致病人死亡的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，在我国肝癌死亡率仅次于胃癌，居我国恶性肿瘤死亡率第二位。据统计，我国每年新增肝癌人数30万人，而每年肝癌死亡人数达11万。
[0003]因此，寻找有效且副作用和缓的抗癌物质就显得更为迫切。
[0004]目前，已经公开的针对Hep3b的治疗方法包括：使用棕榈酸作为人肝癌细胞株Hep3B，LM3的生长抑制剂；使用吡咯并嘧啶酯Ⅰ、吡咯并嘧啶酯Ⅱ和吡咯并嘧啶酯Ⅲ抑制肝癌Hep3b细胞中LncRNA CCAT1的表达；使用异戊烯基黄酮类化合物对Hep3B细胞具有细胞毒作用和促凋亡作用，从而抑制其表达；使用千金藤素抑制HepG2、Hep3B和Huh7的增殖以及使用辛伐他汀和博舒替尼作为肝癌细胞抑制剂的方法。
[0005]通过WB、RT
‑
qPCR和免疫组化对临床肝癌样本分析中发现，在肝癌中TOMM22表达量显著高于正常组织，并且TOMM22的表达量同生存率呈负相关，因此，猜想，TOMM22的异常高表达会促进肝癌的进程。通过siRNA敲低TOMM22可能会抑制肝癌细胞的生长，进而有望成为治疗肝癌的药物。
[0006]但是现有技术中，并未发现有针对TOMM22表达的研究，如其可以适用于肿瘤生长的抑制，则对于本领域具有积极的意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的一个目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供的一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术首先提供了一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法，使用抑制TOMM22表达的shRNA抑制肿瘤，所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；
[0009]所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；
[0010]所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；
[0011]SEQ ID NO.1
[0012]CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；
[0013]SEQ ID NO.2
[0014]AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；
[0015]SEQ ID NO.3
[0016]CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；
[0017]SEQ ID NO.4
[0018]AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。
[0019]所述shHTOMM22#1的靶点为TOMM22序列的第373
‑
393位；所述shHTOMM22#2的靶点为TOMM22序列的第316
‑
336位。
[0020]进一步的，本专利技术还提供了一种抑制TOMM22表达的shRNA，所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；
[0021]所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；
[0022]所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；
[0023]SEQ ID NO.1
[0024]CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；
[0025]SEQ ID NO.2
[0026]AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；
[0027]SEQ ID NO.3
[0028]CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；
[0029]SEQ ID NO.4
[0030]AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。
[0031]所述shHTOMM22#1的靶点为TOMM22序列的第373
‑
393位；所述shHTOMM22#2的靶点为TOMM22序列的第316
‑
336位。
[0032]进一步的，本专利技术还提供了一种抑制TOMM22表达的shRNA抑制载体，包括所述的shRNA和基础载体。
[0033]优选的，所述基础载体为pLKO.1质粒。
[0034]进一步的，本专利技术还提供了一种抑制载体的制备方法，包括：
[0035]将所述的shRNA的正向引物和反向引物混合，退火，得到双链寡核苷酸；酶切基础载体得到敲低载体；将所述双链寡核苷酸和所述敲低载体进行连接，得到所述shRNA抑制载体。
[0036]优选的，所述酶切所用的酶包括EcoRI和AgeI。
[0037]优选的，所述EcoRI和AgeI为限制性内切酶，切割DNA产生粘性末端。
[0038]优选的，所述连接所用的酶为T4 DNA连接酶。
[0039]优选的，所述T4 DNA连接酶可以将所述限制性内切酶切割后的，具有互补的粘性末端进行连接，产生重组DNA。
[0040]进一步的，本专利技术还提供了抑制TOMM22表达的试剂在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0041]优选的，所述抑制TOMM22表达的试剂包括所述的shRNA。
[0042]优选的，所述抑制TOMM22表达的试剂包括所述的抑制载体。
[0043]本专利技术具有如下的有益效果：
[0044]本专利技术通过在肝癌细胞中敲低TOMM22的表达，显著抑制癌细胞增殖；通过裸鼠成瘤实验，确定TOMM22的敲低对肿瘤生长具有显著抑制效果，且本专利技术的研发成本较低，体内稳定性好，特异性强，不对正常的人体组织产生干扰，比靶向治疗中的单克隆抗体的生产成
本低，具有较好的应用前景。
附图说明
[0045]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降低TOMM22表达抑制肿瘤的方法，其特征在于，使用抑制TOMM22表达的shRNA抑制肿瘤，所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；SEQ ID NO.1CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGCTTTTTG；SEQ ID NO.2AATTCAAAAAGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAGTTAGGTCCTAGAAGTATCTGC；SEQ ID NO.3CCGGCGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACGTTTTTG；SEQ ID NO.4AATTCAAAAACGTTGTCTTTGAGACGGAGAACTCGAGTTCTCCGTCTCAAAGACAACG。2.一种抑制TOMM22表达的shRNA，其特征在于,所述shRNA为shHTOMM22#1或shHTOMM22#2；所述shHTOMM22#1的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述shHTOMM22#1的反向引物如SEQ ID NO.2所示；所述shHTOMM22#2的正向引物如SEQ ID NO.3所示,所述shHTOMM22#2的反向引物如SEQ ID NO.4所示；SEQ ID NO.1CCGGGCAGATACTTCTAGGACCTAACTCGAG...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓荣，程满，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：