一种检测猪多种皮肤病原探针引物、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测猪多种皮肤病原探针引物、试剂盒及其应用，属于生物检测技术领域。本发明专利技术选择猪疥螨CCOX1基因、须毛藓菌TEF1α基因、细小孢子菌β

【技术实现步骤摘要】
一种检测猪多种皮肤病原探针引物、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种检测猪多种皮肤病原探针引物、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着我国畜牧业的迅速发展，猪皮肤病逐渐成为影响养猪业发展的一类重大疾病。皮肤病会导致猪食欲减退、精神萎顿、被毛松乱、怕冷嗜睡，严重影响猪群的生产性能。
[0003]猪疥螨病俗称“猪癞”，是由猪疥螨寄生于表皮内而引起的一种接触性传染性寄生虫病；营养不良、管理不善、卫生差的猪群更易发病。严重的疥螨病不但影响增重率及料肉比，而且造成猪只应激剧烈甚至死亡。病猪以剧烈瘙痒为特征，患畜会到处摩擦或以蹄挠其患部使皮肤变红，擦破出血，患部脱毛、结痂，表皮过度增厚角质化，病猪食欲减退、生长停滞、逐渐消瘦甚至衰弱死亡。
[0004]猪真菌性皮肤病的主要病原为细小孢子菌和须毛藓菌，养殖场的环境潮湿、阴暗则易发病，真菌侵害皮肤、毛发角质，猪只全身形成手掌大小的藓斑，病猪有剧烈的瘙痒感，结痂，在痂块之间产生灰棕色或微黑色连成一片的皮屑覆盖物。
[0005]猪细菌性皮肤病的主要病原为金黄色葡萄球菌和链球菌，猪形成点状到块状痂皮，严重的全身结痂，颜色为橙色到黑色，脱屑、瘙痒，病猪的全身像长癞一样，严重的皮肤上会出现溃烂，脱皮，皮肤有硬块。
[0006]真菌、细菌及疥螨引起的皮肤病症状相似，难以区分，目前主要采用的鉴别手段为镜检，但真菌性与细菌性病原在镜下难以确诊，而疥螨由于镜检所能检测的样本量较小，也容易造成误诊。然而，目前尚没有能够快速检测这五种皮肤病原的商品化检测试剂盒，因此急需研制符合当前疫情流行趋势，且能够快速高效检测鉴别上述五种病原的荧光定量PCR商品化试剂盒。

技术实现思路

[0007]猪疥螨、须毛藓菌、细小孢子菌、猪葡萄球菌、链球菌的基因组在100000
‑
2000000bp，基因组庞大且相关的研究较少。本专利技术通过毒力蛋白基因的同源性比对，选择保守的基因序列进行探针引物的设计；根据基因序列分析，本专利技术分别选取猪疥螨CCOX1基因、须毛藓菌TEF1α基因、细小孢子菌β
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tublin基因、猪葡萄球菌secE基因、链球菌ghd基因的保守区域设计荧光探针引物组。本专利技术第一个目的在于提供一种引物组合在检测猪皮肤病原中的应用；本专利技术第二个目的在于提供一种探针组合在检测猪皮肤病原中的应用；本专利技术第三个目的在于提供一种猪皮肤病原的检测试剂；本专利技术第四个目的在于提供一种猪皮肤病原的检测试剂盒。本专利技术具体采用如下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种检测猪多种皮肤病原引物组合，
[0009]包括核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示
的下游引物的引物对；
[0010]包括核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示的下游引物的引物对；
[0011]包括核苷酸序列如SEQ ID No.7所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.8所示的下游引物的引物对；
[0012]包括核苷酸序列如SEQ ID No.10所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.11所示的下游引物的引物对；
[0013]包括核苷酸序列如SEQ ID No.13所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.14所示的下游引物的引物对。
[0014]作为优选，所述引物组合包括猪疥螨检测引物、须毛藓菌检测引物、细小孢子菌检测引物、葡萄球菌检测引物、链球菌检测引物。
[0015]本专利技术还提供了一种检测猪多种皮肤病原探针组合，
[0016]包括：核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.9所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.12所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ IDNo.15所示的检测荧光探针。
[0017]作为优选，所述探针组合包括核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的猪疥螨CCOX1基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的须毛藓菌TEF1α基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.9所示的细小孢子菌β
‑
tublin基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.12所示的猪葡萄球菌secE基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.15所示的链球菌ghd基因检测荧光探针。
[0018]作为优选，所述猪疥螨CCOX1基因检测荧光探针的5
’
端连接有荧光报告基团FAM；所述须毛藓菌TEF1α基因检测荧光探针的5
’
端连接有荧光报告基团HEX；所述细小孢子菌β
‑
tublin基因检测荧光探针的5
’
端连接有荧光报告基团CY5；所述猪葡萄球菌secE基因检测荧光探针的5
’
端连接有荧光报告基团ROX；所述链球菌ghd基因检测荧光探针的5
’
端连接有荧光报告基团CY3。
[0019]作为优选，所述猪疥螨CCOX1基因检测荧光探针、须毛藓菌TEF1α基因检测荧光探针的3
’
端均连接有荧光淬灭基团BHQ1；所述细小孢子菌β
‑
tublin基因检测荧光探针、猪葡萄球菌secE基因检测荧光探针、链球菌ghd基因检测荧光探针的3
’
端均连接有荧光淬灭基团BHQ2。
[0020]本专利技术还提供了上述引物组合，或上述探针组合在检测猪皮肤病原中的应用；所述猪皮肤病原包括猪疥螨、须毛藓菌、细小孢子菌、猪葡萄球菌、链球菌。
[0021]本专利技术还提供了一种猪皮肤病原的检测试剂，所述猪皮肤病原包括猪疥螨、须毛藓菌、细小孢子菌、猪葡萄球菌、链球菌，所述检测试剂包括上述引物组合和/或上述探针组合。
[0022]本专利技术还提供了一种猪皮肤病原的检测试剂盒，包括上述检测试剂；还包括阳性对照、阴性对照、PCR扩增液。
[0023]作为优选，所述阳性对照包括含有猪疥螨、须毛藓菌、细小孢子菌、猪葡萄球菌、链球菌目的基因片段的重组质粒；所述阴性对照包括双蒸水；所述PCR扩增液包括2
×
Animal Detection Probe Master Mix(诺唯赞)。
[0024]作为优选，引物预混液初始浓度为10μM的疥螨上、下游引物、须毛藓菌上、下游引物、细小孢子菌上、下游引物、葡萄球菌上、下游引物、链球菌上、下游引物摩尔比为1:1:1:1:1:1:1:1:1:1的预混液；探针预混液初始浓度为10μM的疥螨荧光探针、须毛藓菌荧光探针、细小孢子菌荧光探针、葡萄球菌荧光探针、链球菌荧光探针摩尔比为1:1:1:1:1的预混液。
[0025]五重荧光定量实验是在一个反应管中同时扩增5个靶标基因进行定量实验，因此5个靶标基因的扩增势必本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测猪多种皮肤病原引物组合，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示的下游引物的引物对；包括核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示的下游引物的引物对；包括核苷酸序列如SEQ ID No.7所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.8所示的下游引物的引物对；包括核苷酸序列如SEQ ID No.10所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.11所示的下游引物的引物对；包括核苷酸序列如SEQ ID No.13所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNo.14所示的下游引物的引物对。2.根据权利要求1所述引物组合，其特征在于，所述引物组合包括猪疥螨检测引物、须毛藓菌检测引物、细小孢子菌检测引物、葡萄球菌检测引物、链球菌检测引物。3.一种检测猪多种皮肤病原探针组合，其特征在于，包括：核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.9所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.12所示的检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ IDNo.15所示的检测荧光探针。4.根据权利要求3所述探针组合，其特征在于，所述探针组合包括核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的猪疥螨CCOX1基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的须毛藓菌TEF1α基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ IDNo.9所示的细小孢子菌β
‑
tublin基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ IDNo.12所示的猪葡萄球菌secE基因检测荧光探针、核苷酸序列如SEQ ID No.15所示的链球菌ghd基因检测荧光探针。5.根据权利要求4所述探针组合，其特征在于，所述猪疥螨CCOX1基因检测荧光探针的5
’
端连接有荧光报告...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蓉，蒋叶林，洪少伟，范小萍，凌勇，邓政，丁能水，龙毅，龙小敏，吴有林，
申请(专利权)人：广西柯新源原种猪有限责任公司贵州傲农七环畜牧养殖有限公司福建傲农生物科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：