一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法，采用的原料包括卵磷脂、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺

【技术实现步骤摘要】
一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法


[0001]本专利技术涉及药物制剂领域，具体涉及一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法。

技术介绍

[0002]布奎那(Brequinar)是一种二氢乳酸脱氢酶抑制剂，具有抗病毒、免疫抑制、抗炎、抗肿瘤等多种潜在药理作用。目前布奎那的抗肿瘤作用已得到广泛的研究，如治疗晚期黑色素瘤、头颈部鳞癌、结直肠癌、胃癌和胰腺癌等。但其未表现出足够抗肿瘤活性，而且引起了骨髓抑制、恶性呕吐等不良反应，限制了布奎那的临床应用。
[0003]线粒体是铁消耗和能量代谢的中心，与肿瘤转移和治疗抵抗有关。线粒体中还存在肿瘤相关的铁死亡防御物质，包括还原性谷胱甘肽和二氢乳清酸脱氢酶，它们维持线粒体中氧化还原平衡并保护细胞免受脂质过氧化。以肿瘤细胞线粒体作为铁死亡诱导剂的作用靶点，可以促使线粒体发生铁死亡。线粒体脂质过氧化为线粒体DNA的释放创造了条件，进而激活先天性免疫，是癌症治疗的一种有效手段。然而，现在仍缺乏诱导线粒体铁死亡的有效策略。
[0004]因此，需开发一种靶向线粒体脂质体的制剂，来提高布奎那抗肿瘤的疗效，并降低其毒副作用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体及其制备方法，提高布奎那抗肿瘤的疗效，并降低其毒副作用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案是：
[0007]一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，采用的原料包括卵磷脂、胆固醇、DSPE
‑
MPEG2000、十六烷基三苯基溴化膦和布奎那，质量比范围为80
‑
120∶5
‑
15∶5∶2∶2；制备步骤如下：
[0008](1)原料溶解：
[0009]取溶剂溶解卵磷脂、DSPE
‑
MPEG2000、胆固醇和十六烷基三苯基溴化膦，配制成混合溶液；另取溶剂溶解布奎那，配制成布奎那溶液；
[0010](2)旋转蒸发：
[0011]将步骤(1)制备的混合溶液与布奎那溶液混合并混匀，在一定温度下旋转蒸发除去有机溶剂，在旋转蒸发器壁上形成薄膜；
[0012](3)真空干燥：
[0013]取出薄膜，将薄膜放入真空干燥器内干燥，去除残余的有机溶剂；
[0014](4)水化：
[0015]将真空干燥后的薄膜放入PBS缓冲液中进行水合，并用探头超声分散，采用滤器挤出过膜，即得具有靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体制剂。
[0016]为优化上述技术方案，采取的具体措施还包括：
[0017]进一步地，步骤(1)中，溶解采用的有机溶剂均为无水乙醇；混合溶液中，卵磷脂溶液的浓度为80
‑
120mg/ml；布奎那溶液的浓度为0.4
‑
0.5mg/ml。
[0018]进一步地，步骤(2)中，旋转蒸发采用的温度为36℃
‑
38℃。
[0019]进一步地，步骤(3)中，在真空干燥器内干燥的时间为3
‑
5h，温度为室温。
[0020]进一步地，步骤(4)中，PBS缓冲溶液的pH为7.4，PBS缓冲溶液的与真空干燥后的薄膜的质量比例为25∶94
‑
144。
[0021]作为优选的方案，步骤(4)中，探头超声功率为150
‑
250w，超声时间为15
‑
30min。
[0022]作为优选的方案，步骤(4)中，采用的滤器为0.45μm滤膜的滤器。
[0023]作为优选的方案，十六烷基三苯基溴化膦与卵磷脂的质量比为1:40。
[0024]本专利技术还保护所述的方法制备的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体。
[0025]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0026]本专利技术的布奎那脂质体主要由卵磷脂、胆固醇、DSPE
‑
MPEG2000(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000)、布奎那及十六烷基三苯基溴化膦组成，配伍科学，该布奎那脂质体制剂所带正电荷能选择性将药物蓄积在线粒体，并通过抑制或消耗线粒体内还原性物质引起线粒体铁死亡，是线粒体靶向性制剂上的创新，开拓了肿瘤治疗的新途径。
[0027]本专利技术的布奎那脂质体含有DSPE
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MPEG2000，在肿瘤组织部位具有良好的渗透和滞留效应，能够被动的蓄积在肿瘤组织内，减少在其他组织和器官中的分布，从而降低了布奎那的毒性；其中，两亲性阳离子十六烷基三苯基溴化膦修饰在布奎那脂质体上，使其具备了线粒体靶向的能力，可通过产生活性氧消耗线粒体内还原性谷胱甘肽，联合布奎那抑制二氢乳酸脱氢酶诱导肿瘤细胞线粒体铁死亡，以此提高布奎那的治疗效果。
[0028]本专利技术的布奎那脂质体制剂还具有制备方法简单易行、载药量较高和稳定性好的特点。
附图说明
[0029]图1为对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo的体外稳定性曲线图，图中为在各时间点下BQR@MLipo与PBS缓冲液或血浆孵育后粒径的大小。
[0030]图2为BQR、对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo的体外药物释放曲线图。
[0031]图3为BQR、对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo的血药浓度
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时间曲线图。
[0032]图4为负载香豆素6的布奎那脂质体C6/BQR@Lipo和C6/BQR@MLipo与MB49细胞共孵后，细胞摄取分析图(比例尺＝15μm)；从左至右四组分别为：活细胞的细胞核染色图；负载香豆素的纳米制剂(C6/BQR@Lipo和C6/BQR@MLipo)的细胞摄取图；线粒体染色图；三幅图的融合图像。
[0033]图5为BQR、对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo与MB49细胞共孵24h后细胞活力图。
[0034]图6为对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo与MB49细胞共孵后，MitoSOX Red(线粒体超氧化物指示剂)染色分析(比例尺＝40μm)。
[0035]图7为对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo与MB49细胞共孵后，MitoPeDPP(线粒体脂质过氧化物检测试剂)染色分析(比例尺＝15μm)。
[0036]图8为对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo对膀胱原位癌体内的药效学和安全性评估中小鼠膀胱肿瘤质量图。
[0037]图9为对比例1制备的BQR@Lipo和实施例1制备的BQR@MLipo对膀胱原位癌体内的药效学和安全性评估中治疗期间小鼠体重变化曲线图。
具体实施方式
[0038]以下通过实施例的形式对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：采用的原料包括卵磷脂、胆固醇、DSPE
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MPEG2000、十六烷基三苯基溴化膦和布奎那，质量比范围为80
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120∶5
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15∶5∶2∶2；制备步骤如下：(1)原料溶解：取溶剂溶解卵磷脂、DSPE
‑
MPEG2000、胆固醇和十六烷基三苯基溴化膦，配制成混合溶液；另取溶剂溶解布奎那，配制成布奎那溶液；(2)旋转蒸发：将步骤(1)制备的混合溶液与布奎那溶液混合并混匀，在一定温度下旋转蒸发除去有机溶剂，在旋转蒸发器壁上形成薄膜；(3)真空干燥：取出薄膜，将薄膜放入真空干燥器内干燥，去除残余的有机溶剂；(4)水化：将真空干燥后的薄膜放入PBS缓冲液中进行水合，并用探头超声分散，采用滤器挤出过膜，即得具有靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体制剂。2.根据权利要求1所述的靶向诱导线粒体铁死亡的布奎那脂质体的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，溶解采用的有机溶剂均为无水乙醇；混合溶液中，卵磷脂溶液的浓度为80
‑
120mg/ml；布奎那溶液的浓度为0.4
‑
0.5mg/ml。3.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭宏骞，张青，丁秋播，苏志桂，李祥龙，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：