红系祖细胞的扩增培养基、扩增培养方法及应用技术

一种红系祖细胞的扩增培养基、扩增培养方法及应用，该扩增培养基包括N6

【技术实现步骤摘要】
红系祖细胞的扩增培养基、扩增培养方法及应用


[0001]本专利技术涉及红系祖细胞体外培养及红系相关疾病治疗药物
，尤其涉及红系祖细胞的扩增培养基、扩增培养方法及应用。

技术介绍

[0002]红细胞是血液中含量最丰富的一类细胞，它为人体所有组织和细胞提供所需的氧气。红细胞的生成是从造血干细胞逐步发育分化形成红细胞的过程。体外红系祖细胞的培养是研究红细胞生成调控，红细胞相关疾病及体外红细胞制备中必不可少的一部分。体外红系祖细胞培养需要多种生长因子的参与，然而，目前常用的一些生长因子作用都是有限的，仍寻找其他可刺激红系祖细胞增殖的化学分子。

技术实现思路

[0003]本专利技术的主要目的在于一种红系祖细胞的扩增培养基、扩增培养方法及应用），以期至少在一定程度解决上述技术问题。
[0004]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：作为本专利技术的一个方面，提供了一种红系祖细胞的扩增培养基，包括N6
‑
甲基
‑2’‑
脱氧腺苷（N6
‑
methyl
‑2’‑
deoxyadenosine，6mdA，CAS: 2002
‑
35
‑
9），具有如下式所示结构：
[0005]根据本专利技术的实施例，通过添加6mdA，可通过维持红系祖细胞中c
‑
Kit（即CD117，Ⅲ型受体酪氨酸激酶）的激活来促进增殖。
[0006]根据本专利技术的实施例，在扩增培养基中，6mdA的浓度在5
‑
200 mM范围内，在合适浓度范围内，6mdA可更有效地刺激包括胎肝来源或成体骨髓来源红系祖细胞的增殖。
[0007]根据本专利技术的实施例，扩增培养基还包括基础培养基、L
‑
谷氨酰胺、硫代甘油、糖皮质激素、促红细胞生成素（Erythropoietin, EPO）和干细胞生长因子（Stem Cell Factor, SCF）。
[0008]根据本专利技术的实施例，L
‑
谷氨酰胺可以为红系祖细胞提供所需的营养，促进红系祖细胞的增殖；作为优选，L
‑
谷氨酰胺的浓度为2~4 mM，例如可以是2 mM、2.5 mM、3.5 mM、4 mM等。
[0009]根据本专利技术的实施例，硫代甘油作为一种还原剂，来在细胞增殖中，通过抗氧化作用来维持细胞生长；作为优选，硫代甘油的浓度为50~100 μM，例如可以是50 μM、60 μM、70 μM、80 μM、90 μM、100 μM。
[0010]根据本专利技术的实施例，糖皮质激素、EPO和SCF分别是体外红系祖细胞增殖刺激因子，能够刺激红系祖细胞的增殖。糖皮质激素包括但不限于帕拉米松、地塞米松等，优选为地塞米松（Dexamethasone, dex），可增强SCF的增殖作用。
[0011]根据本专利技术的实施例，在扩增培养基中，糖皮质激素的浓度为0.1~1 μM，例如可以是0.1 μM、0.2 μM、0.4 μM、0.6 μM、0.8 μM、1 μM等。在合适的浓度范围内，可以有效地刺激红系祖细胞的增殖。
[0012]根据本专利技术的实施例，在扩增培养基中，EPO的浓度为0.5~1 U/mL，例如可以是0.5 U/mL、0.6 U/mL、0.7 U/mL、0.8 U/mL、0.9 U/mL、1.0 U/mL等。在合适的浓度范围内，可以有效地刺激红系祖细胞的增殖。
[0013]根据本专利技术的实施例，在扩增培养基中，SCF的浓度为10~100 ng/mL，例如可以是10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、80 ng/mL、100 ng/mL等。在合适的浓度范围内，可以有效地刺激红系祖细胞的增殖。
[0014]根据本专利技术的实施例，基础培养基为添加1x nutrient补充剂的StemPro
‑
34培养基。但并不局限于此，例如还可以是IMDM培养基等。
[0015]作为本专利技术的另一个方面，提供了一种红系祖细胞的扩增培养方法，包括：使用如上所述的扩增培养基对红系祖细胞进行培养，以促进红系祖细胞的增殖。
[0016]根据本专利技术的实施例，红系祖细胞可以采用常规培养条件，例如可以采用37℃、5% CO2的培养条件下培养红系祖细胞。
[0017]根据本专利技术的实施例，红系祖细胞来源于小鼠胚胎或骨髓，但并不局限于此，红系祖细胞还可以是人红系祖细胞等。
[0018]根据本专利技术的实施例，红系祖细胞为早期红系祖细胞BFU
‑
E（红系爆式集落），6mdA可促进早期红系祖细胞BFU
‑
E的增殖。体外扩增10天能将其扩增能力提高10倍左右。
[0019]作为本专利技术的再一个方面，提供了一种N6
‑
甲基
‑2’‑
脱氧腺苷在用于红系祖细胞的扩增培养中的应用。
[0020]作为本专利技术的又一个方面，提供了一种N6
‑
甲基
‑2’‑
脱氧腺苷在制备用于治疗红系相关疾病的药物中的应用。
[0021]根据本专利技术的实施例，在体外培养红系祖细胞时添加6mdA，可通过维持c
‑
Kit的激活来促进增殖，并且，6mdA对c
‑
Kit的作用并没有产生不可逆的影响，经过6mdA刺激增殖的红系祖细胞可正常分化，产生成熟的红细胞。在对这些由6mdA诱导增殖的红系祖细胞诱导分化前去除6mdA后，这些红系祖细胞可正常进入末端分化并产生血红蛋白。
[0022]总的来说，刺激红系祖细胞增殖的化学分子6mdA，可用于红系祖细胞体外长期培养，由此可获得更多具有正常分化能力的红系祖细胞。
附图说明
[0023]图1是本专利技术实例1中利用MTS的方法检测6mdA促进胎肝来源红系祖细胞增殖情况，其中A为0~100 μM浓度下6mdA的细胞增殖效果，B为100~200 μM浓度下6mdA的细胞增殖效果。
[0024]图2是本专利技术实例2中胎肝来源红系早期祖细胞BFU
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E分选及增殖情况检测，其中A为BFU
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E细胞的流式分选图，B为MTS检测BFU
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E细胞增殖图。
[0025]图3是本专利技术实例3中6mdA对成体小鼠骨髓来源红系祖细胞的增殖情况影响，其中A为成体小鼠骨髓细胞BFU
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E克隆形成实验示意图，B为6mdA处理后，BFU
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E克隆形成大小及数目图像展示，C为BFU
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E克隆形成数目统计结果，D为BFU
‑
E克隆形成大小统计结果，E为成
体小鼠骨髓来源红系祖细胞分离示意图，F为MTS检测成体小鼠骨髓来源红系祖细胞增殖情况。
[0026]图4是本专利技术实例4中红系祖细胞增殖刺激因子对胚胎来源红系祖细胞的增殖情况影响，其中A和D为SCF和6mdA浓度调整下MTS检测细胞增殖效果，B为EPO和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红系祖细胞的扩增培养基，包括N6
‑
甲基
‑2’‑
脱氧腺苷。2. 根据权利要求1所述的扩增培养基，其特征在于，N6
‑
甲基
‑2’‑
脱氧腺苷的浓度为5~200 μM。3.根据权利要求1所述的扩增培养基，其特征在于，所述扩增培养基还包括：基础培养基、L
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谷氨酰胺、硫代甘油、糖皮质激素、促红细胞生成素和干细胞生长因子。4. 根据权利要求3所述的扩增培养基，其特征在于，在所述扩增培养基中，L
‑
谷氨酰胺的浓度为2~4 mM；硫代甘油的浓度为50~100 μM；糖皮质激素的浓度为0.1~1 μM；促红细胞生成素的浓度为0.5~1 U/mL；干细胞生长因子的浓度为10~100 ng/mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪海林，李瑶，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：