CRISPR/Cas12a系统直接靶向目标RNA基因并激活核酸酶侧切活性的方法技术方案

本发明专利技术涉及CRISPR/Cas12a系统及其直接靶向目标RNA基因并激活核酸酶侧切活性(反式切割)的方法。本发明专利技术提供CRISPR/Cas12a系统，其包含CRISPR RNP复合物、支架AuNP表面上的FAM标记的底物或FQ底物，所述CRISPR RNP复合物包含Cas12a蛋白和与目标RNA基因互补的crRNA。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，涉及crispr/cas12a系统直接靶向目标rna基因并激活核酸酶侧切活性(反式切割)的方法。

技术介绍

1、crispr/cas12a(原名cpf1)是cas家族第va型的一种单一rna引导的内切酶。在结构上，cas12a呈双叶结构，由α螺旋识别(rec)叶和核酸酶(nuc)叶组成。其中rec叶由rec1和rec2组成，nuc叶由ruvc域和三个附加域(pi域、wed域、nuc域)组成。近年来cas12a的切割机制方面取得了快速进展，在特定的crrna存在的情况下，它识别其目标单链dna(ssdna)或双链dna(dsdna)，并执行其切割活性，用ruvc结构域催化切割dsdna或ssdna。值得注意的是，由靶向dna激活的crispr/cas12a系统除了能够切割靶向dna(顺式切割)外，还对非靶向ssdna具有不加区分的反式切割活性。这种独特的不加区分的反式切割特性使cas12a成为一个强大的信号放大工具，已被广泛应用于开发新的生物传感技术，用于检测核酸、小分子、蛋白质和细菌等。目前crispr/cas12a系统还与荧光光谱法、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.CRISPR/Cas12a系统，其包含CRISPR核糖核酸蛋白(CRISPR RNP)复合物、支架纳米金(AuNP)表面上的FAM标记的底物或FQ底物，所述CRISPR RNP复合物包含Cas12a蛋白和与目标RNA基因互补的crRNA。

2.权利要求1所述的CRISPR/Cas12a系统，其中，所述FAM标记的底物的长度为8～30nt。

3.权利要求1或2所述的CRISPR/Cas12a系统，其中，所述FQ底物的浓度为500～2000nM。

4.权利要求1或2所述的CRISPR/Cas12a系统，其中，所述FAM标记的底物和所述FQ底物为单链DN...

【技术特征摘要】

1.crispr/cas12a系统，其包含crispr核糖核酸蛋白(crispr rnp)复合物、支架纳米金(aunp)表面上的fam标记的底物或fq底物，所述crispr rnp复合物包含cas12a蛋白和与目标rna基因互补的crrna。

2.权利要求1所述的crispr/cas12a系统，其中，所述fam标记的底物的长度为8～30nt。

3.权利要求1或2所述的crispr/cas12a系统，其中，所述fq底物的浓度为500～2000nm。

4.权利要求1或2所述的crispr/cas12a系统，其中，所述fam标记的底物和所...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭汉勇，袁爱姣，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
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