一种SARS-CoV-2抗原诱发细胞因子风暴模型的建立及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS
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CoV
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2抗原诱发细胞因子风暴模型的建立及应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种SARS
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2抗原诱发细胞因子风暴模型的建立及应用。

技术介绍

[0002] 细胞因子风暴（Cytokine storm）即细胞因子综合释放征（Cytokine release syndrome, CRS），是机体对感染所发生的过度反应。在机体受到某些病毒感染或者免疫功能出现异常时，体内的细胞因子平衡被打破，促炎性细胞因子持续大量的产生，不断活化更多的免疫细胞聚集到炎症部位。过多的免疫细胞及多种促炎细胞因子会引起组织充血、水肿、发热、损伤，还可能引起其它继发性感染甚至导致“全身炎症反应综合征”（脓毒败血症），使患者因多器官衰竭而死亡。
[0003]中重度SARS
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2感染患者致死的主要原因就是细胞因子风暴的发生与发展，开发能够减轻细胞因子风暴的药物刻不容缓。病毒诱导的细胞因子风暴模型是研究SARS
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2最直接、有效的选择。但病毒研究存在一定的危险性，尤其SARS
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2病毒传染性强，对于实验室等级与人员资格都要求极高，所以一定程度上限制了这种模型的选择。目前直接使用SARS
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2感染引起的细胞因子风暴的小鼠体内研究报道较少。细胞因子风暴治疗药物的非临床药效学实验方法有∶在小鼠上建立病毒诱导、LPS诱导、TLR激动剂诱导及抗原诱导的细胞因子风暴模型，此外，更贴近人的动物模型还可以选择灵长类动物如恒河猴进行试验。体外模型中可以选择RAW264.7细胞系或小鼠提取的原代巨噬细胞、外周血单个核细胞等进行试验，诱导方法一般也是使用LPS或TLR激动剂刺激单核细胞或巨噬细胞。常用的免疫细胞有巨噬细胞、树突状细胞、淋巴细胞、外周血单个核细胞等。
[0004]此外，开展SARS
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2研究需要P3实验室，但是在我国各大科研院所和企业中拥有P3实验室的机构并不多，这导致直接研究SARS
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2比较困难，也难以建立SARS
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2导致的细胞因子释放综合征模型。即使建立相应模型，由于缺少P3实验室或者成本过高，也难以广泛推广使用。由于缺乏简单、有效、低成本的SARS
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2诱发细胞因子大量释放的模型，导致针对SARS
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2诱发细胞因子释放的药物开发进程缓慢。此外，也有研究者在使用替代病毒或者LPS等物质构建炎症模型，但是非SARS
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2诱导的模型无法真实反应SARS
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2促使机体释放大量细胞因子的真实状况。

技术实现思路

[0005]为解决上述不足，本专利技术的目的是建立了一种不需要P3实验室就可以开展的SARS
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2抗原诱发细胞因子大量释放的体外模型，为实现该目的，本专利技术采用了如下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种SARS
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2抗原诱发细胞因子风暴的模型的构建方法，所述的方法包括在免疫细胞的培养体系中加入SARS
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2抗原和白细胞介素。
[0006]应当注意，术语“包括”和/或“包含”用于表示本公开的各个方面和实施方案“包
括”一个特定特征或多个特征。应当理解，这个/这些术语还可以涵盖“基本上由相关特征或多个特征组成”或“由相关特征或多个特征组成”的方面和/或实施方案。
[0007]作为一种优选的实施方式，所述的免疫细胞的培养体系中使用的细胞培养基为加入血浆的无血清培养基。
[0008]作为一种优选的实施方式，所述的血浆为人血浆。
[0009]作为一种优选的实施方式，所述的血浆为自体血浆，更为优选的，在所述的细胞培养基中，所述的自体血浆的浓度为10%。
[0010]作为一种替代的实施方式，所述的血浆可替换为血清，所述的血清包括自体血清或胎牛血清。
[0011]SARS
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2是大包膜的正链RNA病毒，SARS
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2基因组包装在被包膜包围的螺旋衣壳内。至少有3种结构蛋白与病毒包膜相关：刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)。
[0012]在本专利技术中，SARS
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2抗原可选自：刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)、核蛋白(N)和/或血凝素酯酶蛋白(HE)。
[0013]作为一种优选的实施方式，所述的SARS
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2抗原包括能通过TLR4发挥作用的病毒抗原。
[0014]作为一种优选的实施方式，所述的能通过TLR4发挥作用的病毒抗原包括刺突蛋白。
[0015]作为一种优选的实施方式，所述的SARS
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2抗原的浓度为0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10或20 nM，更为优选的，所述的SARS
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2抗原的浓度为10 nM。
[0016]“白细胞介素”是指由淋巴细胞产生的一种细胞因子蛋白质，包括但不限于通常被称为IL
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2、IL
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3、IL
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4、IL
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5、IL
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10、IL
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12、IL
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13、IL
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18的细胞因子和其混合物。白细胞介素可以由天然来源得到，或重组产生。
[0017]作为一种优选的实施方式，所述的白细胞介素为IL
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2。
[0018]作为一种优选的实施方式，所述的IL
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2的浓度为0.1
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100 ng/mL，更为优选的，所述的IL
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2的浓度为10 ng/mL。
[0019]如本文所使用的，术语免疫细胞是指在免疫应答中起作用的任何细胞。免疫细胞是来源于造血干细胞，并且包括但不限于淋巴细胞，如T细胞、NK细胞和B细胞；髓样细胞，如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞。
[0020]术语“淋巴细胞”是指所有未成熟的、成熟的、未分化的和分化的淋巴细胞群体，包括组织特异性的和特化的品种。作为非限制性实例，其涵盖NK细胞、T细胞、NKT细胞和B细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS
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2抗原诱发细胞因子风暴的模型的构建方法，其特征在于，所述的方法包括在免疫细胞的培养体系中加入SARS
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2抗原和白细胞介素。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的免疫细胞的培养体系中使用的细胞培养基为含有人血浆的无血清培养基。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的SARS
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CoV
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2抗原包括能通过TLR4发挥作用的病毒抗原。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的能通过TLR4发挥作用的病毒抗原包括刺突蛋白。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛超，崔久嵬，
申请(专利权)人：吉林大学第一医院，
类型：发明
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