CD38抑制剂在体外减少CAR-T细胞耗竭中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CD38抑制剂在体外减少CAR

【技术实现步骤摘要】
CD38抑制剂在体外减少CAR
‑
T细胞耗竭中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及CD38抑制剂在体外减少CAR
‑
T细胞耗竭中的应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T
‑
cell therapy，CAR
‑
T)细胞疗法被用于治疗难治性或复发血液系统肿瘤。然而，治疗后疾病的复发仍是目前面临的主要问题。现有研究认为CAR
‑
T细胞在因耗竭导致的持久性不佳，伴随功能障碍是诱导持续缓解的限制因素。已有文章报道减弱CAR信号能够改善耗竭，增强记忆型细胞亚群以提高体内持久性，同时靶向耗竭相关基因可改善肿瘤浸润CAR
‑
T细胞的功能(E.W.Weber，et.al，Transient rest restores functionality in exhausted CAR
‑
T cells through epigenetic remodeling.Science 372，(2021).)。
[0003]CD38是一种单链跨膜糖蛋白，在B、T、NK细胞中均有高表达。CD38是哺乳动物中NAD+的主要消耗酶，越来越多的研究证明，CD38
‑
NAD+信号通路调控免疫细胞的代谢活性和抗肿瘤效应(M.Philip，et.al，Chromatin states define tumour
‑/>specific T cell dysfunction and reprogramming.Nature 545，452
‑
456(2017).)。
[0004][0005]小分子化合物compound 78C(简称78C)是一种CD38抑制剂，CAS号为1700637
‑
55
‑
3，结构式如式I所示。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中存在的上述不足，本专利技术提供了CD38抑制剂在体外减少CAR
‑
T细胞耗竭中的应用。
[0007]本专利技术首先提供了CD38抑制剂在体外减少CAR
‑
T细胞耗竭中的应用。优选的，CD38抑制剂为小分子化合物compound 78C。compound 78C的使用浓度为10μM。优选的，CD38抑制剂在CAR
‑
T细胞体外培养的第6～9天加入培养基。
[0008]本专利技术又提供了一种CAR
‑
T细胞体外培养方法，在CAR
‑
T细胞体外培养的第6～9天
向培养基中加入CD38抑制剂。优选的，CD38抑制剂为小分子化合物compound 78C。优选的，小分子化合物compound 78C的使用浓度为10μM。
[0009]本专利技术还提供了CD38抑制剂在制备抗癌药物中的应用，所述CD38抑制剂与CAR
‑
T细胞联用，CD38抑制剂通过减少CAR
‑
T细胞耗竭从而提高抗癌作用，其中，所述CD38抑制剂为小分子化合物compound 78C。
[0010]本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种基于CD38抑制剂的CAR
‑
T细胞和制备方法，以及CD38抑制剂预处理的CAR
‑
T细胞在抗肿瘤中的应用，该方法简单易行，通过在CAR
‑
T细胞培养过程中添加CD38抑制剂治疗肿瘤，能够明显的增加免疫细胞持续性及杀伤功能，很大程度上解决了细胞治疗过程中的难治复发问题，延长患者的生存期。
附图说明
[0011]图1为CD38抑制剂培养CAR
‑
T细胞增殖、凋亡及亚群分化统计图，其中，图A为实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后CAR
‑
T表面CD38表达的平均荧光强度，图B为实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后细胞的增殖曲线统计图，图C为实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后流式检测CAR
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T细胞的分化指标(CD62L，CD45RO)的典型图，图D为流式检测CAR
‑
T细胞的分化指标的统计图。
[0012]图2为CD38抑制剂培养CAR
‑
T细胞，流式检测PD1、LAG3、TIM3耗竭指标的表达变化检测结果图，其中，图A为实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后流式检测CAR
‑
T细胞的凋亡相关指标Annexin V的典型图，图B为实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后流式检测CAR
‑
T细胞的凋亡相关指标Annexin V阳性比例的统计图，图C为实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后流式检测CAR
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T细胞的抑制性受体PD
‑
1，LAG
‑
3和TIM
‑
3共表达比例统计图。
[0013]图3为CD38抑制剂培养CAR
‑
T细胞的细胞因子释放和肿瘤杀伤变化检测结果图，其中，图A为流式细胞术检测实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后CAR
‑
T细胞胞内IL
‑
2和TNF
‑
α的表达典型图，图B为流式细胞术检测实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后CAR
‑
T细胞胞内Granzyme B和IFN
‑
γ的表达典型图，图C为流式细胞术检测实验组78C和溶剂对照组DMSO处理72h后CAR
‑
T细胞胞内IL
‑
2，TNF
‑
αGranzyme B和IFN
‑
γ表达比例的统计图。图D为以1∶10的效靶比将CAR
‑
T细胞与肿瘤体外共培养，多轮刺激下实验组78C和溶剂对照组DMSO处理的CAR
‑
T细胞的特异性杀伤比例。
[0014]图4为不同药物处理CAR
‑
T细胞3天后输注至NSG小鼠，D0
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D49小鼠体内生物荧光成像图。
[0015]图5为溶剂对照DMSO体外处理CD19
‑
41BB CAR
‑
T细胞3天后输注至NSG小鼠，组内小鼠的肿瘤平均荧光强度随输注后天数变化的折线统计图(N＝7)。
[0016]图6为实验组78C体外处理CD19
‑
41BB CAR
‑
T细胞3天后输注至NSG小鼠，组内小鼠的肿瘤平均荧光强度随输注后天数变化的折线统计图(N＝7)。
[0017]各图中，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，****P＜0.0001。NS，No significance，即没有统计学差异。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CD38抑制剂在体外减少CAR
‑
T细胞耗竭中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，CD38抑制剂为小分子化合物compound 78C。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，compound 78C的使用浓度为10μM。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，CD38抑制剂在CAR
‑
T细胞体外培养的第6～9天加入培养基。5.一种CAR
‑
T细胞体外培养方法，其特征在于，在CAR
‑
T细胞体外培养的第6～9天向培养基中加入CD38抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄河，黄玥，邵谧，滕心怡，司晓慧，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：