脂肪组织凋亡囊泡的应用、制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了脂肪组织凋亡囊泡的应用、制剂及其制备方法，涉及生物医学基础研究领域，本发明专利技术实施例中，可以对脂肪组织进行培养并诱导凋亡，再通过梯度离心分离得到脂肪组织的凋亡细胞外囊泡(apoptotic extracellular vesicles，ApoEVs)，本发明专利技术实施例中，脂肪组织凋亡囊泡的粒径为纳米级，有利于各种临床应用，本发明专利技术实施例中的脂肪组织凋亡囊泡来源于脂肪组织，来源广泛，获取方法简单，有利于实际推广应用。本发明专利技术实施例提供的ApoEVs可以直接进行应用，以促进皮肤伤口愈合，减小疤痕产生，并且，避免了细胞治疗可能产生的细胞移植后坏死、免疫排斥、伦理问题和肿瘤风险等问题，可以广泛应用于皮肤创面的临床处理。广泛应用于皮肤创面的临床处理。广泛应用于皮肤创面的临床处理。

【技术实现步骤摘要】
脂肪组织凋亡囊泡的应用、制剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医学基础研究领域，特别是涉及一种脂肪组织凋亡囊泡的应用、制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]皮肤是人体最大的器官，在外部环境和本专利技术实施例的身体之间起着重要作用，因此皮肤不可避免的总是受到各种伤害。由于真皮脂肪细胞在皮肤发育和重塑中的重要性，脂肪组织和脂肪组织衍生物的移植被认为是皮肤疾病最先进的治疗方法之一。相关研究已使用脂肪组织、纳米脂肪、脂肪基质细胞(SVF)、脂肪干细胞和其他细胞成分治疗皮肤创伤和疤痕，并证明它们具有良好的治疗效果。然而，细胞治疗受到移植后坏死、免疫排斥、伦理问题和肿瘤风险等因素的限制。
[0003]因此，目前亟需一种新的皮肤创伤和疤痕治疗策略。

技术实现思路

[0004]为解决上述
技术介绍
中存在的问题，本专利技术提供了一种脂肪组织凋亡囊泡的应用、制剂及其制备方法。
[0005]第一方面，本专利技术提供了一种脂肪组织凋亡囊泡在制备促进皮肤伤口愈合的制剂中的应用，所述脂肪组织凋亡囊泡来源于脂肪组织，由脂肪组织经培养并诱导凋亡后梯度离心得到，所述脂肪组织凋亡囊泡呈球型，具有磷脂双分子层结构，所述脂肪组织凋亡囊泡的粒径为50～500nm，所述脂肪组织凋亡囊泡表达凋亡相关的特异性蛋白；所述脂肪组织凋亡囊泡还用于促进皮肤伤口愈合，减小疤痕产生。
[0006]可选地，所述脂肪组织凋亡囊泡用于增强成纤维细胞和内皮细胞的增殖和迁移，促进成纤维细胞的脂肪分化；所述脂肪组织凋亡囊泡减少成纤维相关基因Col 1、Col 3和α
‑
SMA的表达，并增加脂肪相关基因PPARγ和C/EBPα的表达。
[0007]第二方面，本专利技术提供了一种脂肪组织凋亡囊泡制剂，所述脂肪组织凋亡囊泡制剂包括：脂肪组织凋亡囊泡、缓释材料，所述脂肪组织凋亡囊泡来源于脂肪组织，由脂肪组织经培养并诱导凋亡后梯度离心得到，所述脂肪组织凋亡囊泡呈球型，具有典型的磷脂双分子层结构，所述脂肪组织凋亡囊泡的粒径为50～500nm，所述脂肪组织凋亡囊泡表达凋亡相关的特异性蛋白；所述脂肪组织凋亡囊泡还用于促进皮肤伤口愈合，减小疤痕产生，所述缓释材料包括玻尿酸、胶原、壳聚糖中的一种或多种。
[0008]可选地，所述脂肪组织凋亡囊泡用于增强成纤维细胞和内皮细胞的增殖和迁移，促进成纤维细胞的脂肪分化；所述脂肪组织凋亡囊泡减少成纤维相关基因Col 1、Col 3和α
‑
SMA的表达，并增加脂肪相关基因PPARγ和C/EBPα的表达；
[0009]所述缓释材料用于作为支架材料包裹所述脂肪组织凋亡囊泡。
[0010]第三方面，本专利技术提供了一种脂肪组织凋亡囊泡制剂的制备方法，所述方法包括：
[0011]收集脂肪组织凋亡囊泡，所述脂肪组织凋亡囊泡来源于脂肪组织，由脂肪组织经
培养并诱导凋亡后梯度离心得到；
[0012]将所述脂肪组织凋亡囊泡与缓释材料相混合；
[0013]所述脂肪组织凋亡囊泡呈球型，具有磷脂双分子层结构，所述脂肪组织凋亡囊泡的粒径为50～500nm，所述脂肪组织凋亡囊泡表达凋亡相关的特异性蛋白；所述脂肪组织凋亡囊泡还用于促进皮肤伤口愈合，减小疤痕产生；
[0014]所述缓释材料包括玻尿酸、胶原、壳聚糖中的一种或多种。
[0015]可选地，所述收集脂肪组织凋亡囊泡，包括：
[0016]获取脂肪组织；
[0017]向所述脂肪组织中加入α
‑
MEM培养基、星形孢菌素，得到混合物，将所述混合物转移到悬浮培养瓶中，置于37℃，5％ CO2培养箱中悬浮培养，以对所述脂肪组织进行悬浮培养并诱导凋亡；
[0018]对培养后的混合物进行过滤，去除组织块，获取培养上清液；
[0019]对所述培养上清液进行离心，去除细胞碎片和大粒径囊泡，收集囊泡上清液；
[0020]对所述囊泡上清液进行离心，收集脂肪组织凋亡囊泡。
[0021]可选地，对所述培养上清液进行离心，去除细胞碎片和大粒径囊泡，收集囊泡上清液，包括：
[0022]对所述培养上清液进行离心，离心力为700g
‑
900g，离心时间为8
‑
12分钟，以去除细胞碎片，收集细胞上清液；
[0023]对所述细胞上清液进行离心，离心力为1900g
‑
2100g，离心时间为13
‑
17分钟，以去除大粒径囊泡，收集囊泡上清液。
[0024]可选地，对所述囊泡上清液进行离心，收集脂肪组织凋亡囊泡，包括：
[0025]对所述囊泡上清液进行离心，离心力为15000g
‑
17000g，离心时间为28
‑
32分钟，去除上清液，收集沉淀得到的脂肪组织凋亡囊泡。
[0026]可选地，所述α
‑
MEM培养基的体积/质量＝9～11，所述星形孢菌素的浓度为200
‑
300nmol。
[0027]可选地，所述悬浮培养的转速为150
‑
250rpm/min。
[0028]与现有技术相比，本专利技术包括以下优点：
[0029]本专利技术实施例中可以对脂肪组织进行悬浮培养并诱导凋亡，再通过梯度离心分离得到脂肪组织的凋亡细胞外囊泡(apoptotic extracellular vesicles，ApoEVs)，本专利技术实施例中，脂肪组织凋亡囊泡的粒径为纳米级，有利于各种临床应用，本专利技术实施例中的脂肪组织凋亡囊泡来源于脂肪组织，来源广泛，获取方法简单，有利于实际推广应用。
[0030]本专利技术实施例提供的ApoEVs可以直接进行应用，以促进皮肤伤口愈合，减小疤痕产生，并且，避免了细胞治疗可能产生的细胞移植后坏死、免疫排斥、伦理问题和肿瘤风险等问题，可以广泛应用于皮肤创伤的临床处理。
附图说明
[0031]图1是本专利技术实施例提供的脂肪组织凋亡囊泡的制备与表征相关分析结果示意图；
[0032]图2是本专利技术实施例提供的大鼠皮肤缺损模型实验中ApoEVs加速皮肤伤口愈合的
相关分析结果示意图。
[0033]图3是本专利技术实施例提供的大鼠皮肤缺损模型实验中ApoEVs诱导高质量肉芽组织生成的相关分析结果示意图；
[0034]图4是本专利技术实施例提供的大鼠皮肤缺损模型实验中ApoEVs减少疤痕形成的相关分析结果示意图；
[0035]图5是本专利技术实施例提供的ApoEVs调控成纤维细胞的行为的相关分析结果示意图；
[0036]图6是本专利技术实施例提供的ApoEVs调控成内皮细胞的行为的相关分析结果示意图。
具体实施方式
[0037]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本专利技术，并不局限于所述最佳实施方式，不对本专利技术的内容和保护范围构成限制，任何人在本专利技术的启示下或是将本专利技术与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本专利技术相同或相近似的制剂，均落在本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂肪组织凋亡囊泡在制备促进皮肤伤口愈合的制剂中的应用，其特征在于，所述脂肪组织凋亡囊泡直接来源于脂肪组织，由脂肪组织经培养并诱导凋亡后梯度离心得到，所述脂肪组织凋亡囊泡呈球型，具有磷脂双分子层结构，所述脂肪组织凋亡囊泡的粒径为50～500nm，所述脂肪组织凋亡囊泡表达凋亡相关的特异性蛋白；所述脂肪组织凋亡囊泡还用于促进皮肤伤口愈合，减小疤痕产生。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂肪组织凋亡囊泡用于增强成纤维细胞和内皮细胞的增殖和迁移，促进成纤维细胞的脂肪分化；所述脂肪组织凋亡囊泡减少成纤维相关基因Col 1、Col 3和α
‑
SMA的表达，并增加脂肪相关基因PPARγ和C/EBPα的表达。3.一种脂肪组织凋亡囊泡制剂，其特征在于，所述脂肪组织凋亡囊泡制剂包括：脂肪组织凋亡囊泡、缓释材料，所述脂肪组织凋亡囊泡来源于脂肪组织，由脂肪组织经培养并诱导凋亡后梯度离心得到，所述脂肪组织凋亡囊泡呈球型，具有典型的磷脂双分子层结构，所述脂肪组织凋亡囊泡的粒径为50～500nm，所述脂肪组织凋亡囊泡表达凋亡相关的特异性蛋白；所述脂肪组织凋亡囊泡还用于促进皮肤伤口愈合，减小疤痕产生，所述缓释材料包括玻尿酸、胶原、壳聚糖中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的脂肪组织凋亡囊泡制剂，其特征在于，所述脂肪组织凋亡囊泡用于增强成纤维细胞和内皮细胞的增殖和迁移，促进成纤维细胞的脂肪分化；所述脂肪组织凋亡囊泡减少成纤维相关基因Col 1、Col 3和α
‑
SMA的表达，并增加脂肪相关基因PPARγ和C/EBPα的表达；所述缓释材料用于作为支架材料包裹所述脂肪组织凋亡囊泡。5.一种脂肪组织凋亡囊泡制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：收集脂肪组织凋亡囊泡，所述脂肪组织凋亡囊泡来源于脂肪组织，由脂肪组织经培养并诱导凋亡后梯度离心得到；将所述脂肪组织凋亡囊泡与缓释材料相混合；所述脂肪组织凋亡囊泡呈球型，具有磷脂双分子层结构，所述脂肪组织凋亡囊泡的粒径为5...

【专利技术属性】
技术研发人员：田卫东，董佳，汤颖峰，张静怡，
申请(专利权)人：成都世联康健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：