本发明专利技术提供了纤维网状细胞来源的外泌体在制备用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物中的应用。本发明专利技术首次提取了FRCs来源的外泌体；并通过实验发现FRCs来源的外泌体能够发挥了肾损伤保护作用，促进损伤的肾小管细胞损伤修复，促进其增殖，减少肾小管坏死，减轻炎症反应和降低氧化应激。FRCs来源的外泌体，应用于小鼠脓毒症急性肾损伤的治疗中，取得了良好的治疗效果。因此提示纤维网状细胞来源的外泌体可以用于制备治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物。与传统的细胞治疗相比，外泌体具有稳定性好、保存及应用方便快捷的特点。保存及应用方便快捷的特点。保存及应用方便快捷的特点。
【技术实现步骤摘要】
纤维网状细胞来源的外泌体在制备用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物中的应用
[0001]本专利技术涉及生物医学
，特别涉及纤维网状细胞来源的外泌体在制备用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物中的应用。
技术介绍
[0002]脓毒症(Sepsis)是由多种病原体、创伤、烧伤及外科大手术等因素造成的机体感染而引起机体对感染反应失调，导致严重的、复杂的、失控的免疫反应并危及生命的多器官功能障碍综合征。肾脏是脓毒症最容易影响的器官，约有50％脓毒症患者发生急性肾损伤(Acute Kidney Injury，AKI)。尽管应用了大量抗生素及器官支持治疗，但由于发病机制不明确，缺乏特异性治疗方法，脓毒症AKI的发病率仍不断增高，消耗的医疗资源也逐年增加。因此深入研究脓毒症AKI的发病机制并不断寻找新的治疗靶点，改善脓毒症AKI预后，具有重要的社会效益和经济效益。
[0003]因此，急需开发一种用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物。
技术实现思路
[0004]本专利技术目的是提供纤维网状细胞来源的外泌体在制备用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物中的应用，本专利技术经过试验发现FRCs来源的外泌体能够发挥了肾损伤保护作用，促进损伤的肾小管细胞损伤修复，促进其增殖，减少肾小管坏死，减轻炎症反应和降低氧化应激，应用于小鼠脓毒症急性肾损伤的治疗中，取得了良好的治疗效果。。
[0005]为实现所述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]在本专利技术的第一方面，提供了纤维网状细胞来源的外泌体在制备用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物中的应用。
[0007]进一步地，所述纤维网状细胞来源的外泌体的制备方法包括：
[0008]获得纤维网状细胞；
[0009]将所述纤维网状细胞用含无外泌体的血清的培养基进行培养，获得细胞上清，后进行第一固液分离获得上清液，将所述上清液进行第二固液分离获得固体，后重悬，获得纤维网状细胞来源的外泌体。
[0010]进一步地，所述获得纤维网状细胞，包括：
[0011]收集脂肪组织，剪碎后消化，过细胞筛后终止消化，通过密度梯度离心法去除红细胞和粒细胞，收集的细胞采用含有FBS的DMEM完全培养基进行培养并传代培养，获得纤维网状细胞。
[0012]进一步地，所述消化中，采用0.2
±
0.02％的胶原酶、2.0
±
0.5mg/ml中性蛋白酶和0.08
ꢀ±
0.01mg/ml透明质酸酶的混合酶进行消化。
[0013]进一步地，所述第一固液分离采用0.2μM过滤。
[0014]进一步地，所述第二固液分离包括：4
±
2℃下超速离心60
±
20min，所述超速离心
的转速为1.0
×
105g
±
1000g。
[0015]进一步地，所述含无外泌体的血清的培养基为含0.5
‑
1.5％P/S、0.05
‑
0.15％PB、45
‑
55μM EGF、0.1
‑
0.3mg/mLFGF、50
‑
150nM TGF、8
‑
12％无外泌体血清的DMEM完全培养基。
[0016]进一步地，所述纤维网状细胞的标志抗体为CD45
‑
、PDPN+和CD31
‑
。
[0017]进一步地，所述纤维网状细胞来源的外泌体特异性标志物为CD9、CD63、HSP70、 TSG
‑
101和CD81。
[0018]在本专利技术的第二方面，提供了一种用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物，所述药物包括纤维网状细胞来源的外泌体。
[0019]本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
[0020]本专利技术提供纤维网状细胞来源的外泌体在制备用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物中的应用，本专利技术首次提取了FRCs来源的外泌体；并通过实验发现FRCs来源的外泌体能够发挥了肾损伤保护作用，促进损伤的肾小管细胞损伤修复，促进其增殖，减少肾小管坏死，减轻炎症反应和降低氧化应激。FRCs来源的外泌体，应用于小鼠脓毒症急性肾损伤的治疗中，取得了良好的治疗效果。与传统的细胞治疗相比，外泌体具有稳定性好、保存及应用方便快捷的特点。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0022]图1为实施例1中FRCs的原代分离培养及鉴定的结果，其中图1A为小鼠肠系膜脂肪组织中淋巴结构；图1B为明场下观察FRCs细胞形态；图1C为CD45、Podoplanin、CD31 抗体标记FRCs，流式细胞仪鉴定FRCs；
[0023]图2为实施例1中提取FRCs
‑
外泌体及鉴定的结果；其中，图2A为电镜检测外泌体的大小和形态；图2B为Western blot检测外泌体(2个重复)标志蛋白CD63、CD9、TSG101和HSP70；图2C为纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测所提取的胞外囊泡的直径；图2D为成脂诱导分化培养基培养FRCs，油红O染色脂肪细胞，红色为FRCs分化为脂肪细胞；
[0024]图3为实施例2中FRCs
‑
外泌体能够归巢到损伤的肾脏的结果，其中图3A为活体成像观察FRCs在小鼠体内聚集的部位；图3B流式细胞仪检测腹腔注射的FRCs在腹腔灌洗液、脾脏、肾组织的聚集情况；图3C为Dio(绿色荧光)标记的FRCs与肾小管上皮细胞共培养，使用Transwell小室将FRCs和肾小管上皮共培养24小时，将Dio标记的FRCs
‑
Exos 加入到肾小管上皮细胞，DAPI着色肾小管上皮细胞的细胞核，共聚焦显微镜观察外泌体摄取情况；
[0025]图4为实施例2中FRCs来源外泌体对脓毒症AKI的保护作用的结果，其中图4A将 FRCs和FRCs
‑
外泌体(Exos)注射到脓毒症小鼠腹腔，观察脓毒症小鼠的120h生存率变化；图4B检测各组小鼠血清肌酐和尿素氮含量；
[0026]图5为实施例2中FRCs
‑
外泌体改善LPS诱导的脓毒症的结果。
具体实施方式
[0027]下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。
[0028]在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.纤维网状细胞来源的外泌体在制备用于治疗和/或预防脓毒症急性肾损伤的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述纤维网状细胞来源的外泌体的制备方法包括：获得纤维网状细胞；将所述纤维网状细胞用含无外泌体的血清的培养基进行培养，获得细胞上清，后进行第一固液分离获得上清液，将所述上清液进行第二固液分离获得固体，后重悬，获得纤维网状细胞来源的外泌体。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述获得纤维网状细胞，包括：收集脂肪组织，剪碎后消化，过细胞筛后终止消化，通过密度梯度离心法去除红细胞和粒细胞，收集的细胞采用含有FBS的DMEM完全培养基进行培养并传代培养，获得纤维网状细胞。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述消化中，采用0.2
±
0.02％的胶原酶、2.0
±
0.5mg/ml中性蛋白酶和0.08
±
0.01mg/ml透明质酸酶的混合酶进行消化。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述第一固液分离采用0.2μM过滤。6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述第二固液分离包括：4
±
...
【专利技术属性】
技术研发人员：李一鸣，彭志勇，张婧，锁进猛，柳叶，胡畅，汪枫云，
申请(专利权)人：武汉大学中南医院，
类型：发明
国别省市：
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