液态活检指标在制备子宫内膜异位症筛查和诊断产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了子宫内膜异位症血清标志物在制备子宫内膜异位症筛查和诊断产品中的应用，所述血清标志物为血清多肽分子TAOK2。本申请发现血清多肽分子TAOK2在子宫内膜异位症患者血清中特异性高表达，可以作为子宫内膜异位症血清诊断标志物。症血清诊断标志物。症血清诊断标志物。

【技术实现步骤摘要】
液态活检指标在制备子宫内膜异位症筛查和诊断产品中的应用


[0001]本专利技术属于生物标志物
，特别是涉及血清多肽分子TAOK2在制备子宫内膜异位症筛查和诊断产品中的应用。

技术介绍

[0002]子宫内膜异位症(Endometriosis，简称内异症)是一种常见的妇科疾病，影响了10
‑
15％的育龄期女性，在不孕症患者中甚至高达40
‑
50％。该病在临床表现上具有恶性肿瘤侵袭转移的能力，易广泛种植于卵巢、腹膜、肠管等靶向器官，引起靶向器官的病变并导致多种临床症状，尤其是痛经，让很多患者痛不欲生，严重影响了患者的生存质量。目前，其诊断的“金标准”是腹腔镜检查和病理证据。但腹腔镜手术是一种有创性的手术，对于期望保守治疗的患者来说并非理想选择。由于该病具有明显的异质性，对它的认识也不足，导致诊断延迟6.7年到11.7年不等，初诊误诊率也高达65％，许多患者到了晚期才得到有效治疗。这种现状增加了患者的经济支出，也加大了临床医生的治疗难度。因此，寻找子宫内膜异位症发病的分子标志物，并开发成早期诊断试剂盒，对于在发病早期、通过液态活检即可精准地诊断内异症，对于患者无疑具有重要的临床意义和社会应用价值。
[0003]近年来对子宫内膜异位症研究的热点生物标志物主要有以下几种：糖蛋白，细胞因子，免疫细胞群，miRNA，转录组，蛋白质组，代谢组等。虽然这些研究使得我们对于子宫内膜异位症有了更加深入的了解，但就早期诊断方面仍缺乏敏感性且特异性的指标。因此，探讨EMT发生发展的准确分子机制，寻找一个新的特异性的诊断标志物对于EMT的早期诊断和治疗，改善患者生存质量有着重要的临床意义。
[0004]蛋白质是细胞发挥生物学功能的重要介质，细胞内的蛋白质在成分及数量上的变化多发现在疾病病理变化之前，一定程度上可通过血清中的蛋白质变化反映出来。因此，通过比较不同疾病人群血清中差异蛋白质的表达，可能筛选出疾病相关的标志分子。血清蛋白质组学是指研究选定的目标人群血清中表达的全部蛋白质，在建立正常蛋白质表达图谱的基础上,寻找其差异蛋白质点，鉴定疾病相关蛋白质，进而研究其结构和功能，为研究重大疾病病理生理学机制、早期诊断的特异性标志物、药物作用靶点等开辟新的途径。
[0005]通过寻找血液中的特定蛋白作为诊断标志物，特别是其中的一些蛋白肿瘤标志物目前已广泛应用于评判肿瘤的发生和发展情况，从而实现对肿瘤的早期诊断及愈后的监测。人类血清中存在大量蛋白和多肽，其中部分蛋白和多肽的存在和缺失以及表达的高低与人类健康程度密切相关，可作为疾病的诊断标志物。在子宫内膜异位症中目前主要的血清学指标为CA125，但其在多种肿瘤中均可高表达缺乏特异性，且在疾病早期阶段CA125的表现也不尽如人意。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于，克服现有技术中的不足，提供血清多肽分子TAOK2在制备
年龄34.5
±
5.532.5
±
8.5p>0.05BMI23.4
±
1.223.1
±
4.1p>0.05采集时间06:00
‑
07:0006:00
‑
07:00p>0.05储存条件4℃冰箱4℃冰箱 [0026]表1
[0027]实施例2
[0028]运用弱阳离子(MB
‑
WCX)磁珠试剂盒捕获实施例1中样本的血清蛋白多肽，具体操作步骤如下：
[0029]①
用混匀器完全混匀磁珠悬浮液1min；
[0030]②
加10μL MB
‑
WCX结合液以及10μL MB
‑
WCX磁珠至PCR管，混匀后加5μL血清，混匀至少5次，静置5min；
[0031]③
将PCR管放入磁柱分离器，使磁珠贴壁1min，液体清澈后弃上清液；
[0032]④
加100μLMB
‑
WCX冲洗液，在磁柱分离器上前后移动10次PCR管，磁珠贴壁后弃上清液，重复步骤
③
、
④
两次；
[0033]⑤
加5μLMB
‑
WCX洗脱液洗涤贴壁的磁珠，并反复吹打10次，磁珠贴壁2min，将上清液移入干净的离心管；
[0034]⑥
加5μLMB
‑
WCX稳定液至离心管并混匀，提取的蛋白多肽可以用于直接MALDI
‑
TOF
‑
MS检测或者冻存于
‑
20℃冰箱24h之内质谱分析。
[0035]实施例3
[0036]取实施例2中制得的蛋白多肽1μL与10μL的基质α
‑
氰基
‑4‑
羟基肉桂酸混匀，取1μL混匀物点在Anchorchip靶板(德国Bruker公司)上，每个样本分别点三个靶点以作三次重复。待室温干燥后将靶板放入质谱仪进行飞行时间质谱分析，采用FlexControl 2.0软件进行标准品校正后开始样本检测，每个样本要经过总共300次激光打靶(5次点靶，每次打靶2
×
30次)之后生成质谱图，获得由不同质核比(m/z)组成的蛋白多肽谱图。
[0037]将子宫内膜异位症患者和正常健康人群血清样本采用磁珠分离系统处理后，经过MALDI
‑
TOF
‑
MS分析后，对子宫内膜异位症患者和正常健康人群的每个样本进行蛋白多肽图谱绘制，在分子量范围800Da～10000Da共检测到143个蛋白多肽峰图，且每个样本的三次重复稳定性较高。
[0038]采用ClinProTools2.1软件结合遗传算法等生物统计学和生物信息学方法分析两组血清样本的蛋白多肽图谱。进行归一化平滑处理总离子流图，消除化学及电物理噪声；分析组间差异蛋白并计算差异大小，按差异大小由大到小排列，找出组间表达具有显著差异的蛋白多肽峰值(P<0.001)。
[0039]两组样本中共检测到1376种分泌性多肽或蛋白降解产物；其中100条多肽在两组样本中显著差异表达(变化倍数>2，p<0.05，FDR<0.05)。子宫内膜异位症患者组与对照组相比，15条多肽在病例组中高表达(变化倍数>3，p<0.05，FDR<0.05)，7条多肽在病例组中低表达(变化倍数>3，p<0.05，FDR<0.05)。因此与健康对照组相比，子宫内膜异位症患者血清多肽组存在显著的差异性和特异性。具体结果如表2所示。
[0040][0041][0042]表2
[0043]对表2中的子宫内膜异位症患者血清中特异高表达蛋白多肽进行Flex analysis软件分析，结果如图1中a所示，经过m/z：698.69在子宫内膜异位症患者本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.子宫内膜异位症血清标志物在制备子宫内膜异位症筛查和诊断产品中的应用，其特征在于，所述血清标志物为血清多肽分子TAOK2。2.根据权利要求1所述的子宫内膜异位症血清标志物在制备子宫内膜异位症筛查和诊断...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏智敏，石晓燕，侯户杨，付子毅，
申请(专利权)人：南京艾拓生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：