一种基于距离信号读出的胰蛋白酶含量检测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于距离信号读出的胰蛋白酶含量检测方法，将100μL的质量分数为5％的明胶水溶液滴加在混合纤维素微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径d0；分别向质量分数为5％的明胶水溶液中加入不同浓度的胰蛋白酶溶液，在温度为37℃的条件下，发生酶催化反应10min，然后取100μL的反应液滴加于混合纤维素微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径，记为d；根据d

【技术实现步骤摘要】
一种基于距离信号读出的胰蛋白酶含量检测方法


[0001]本专利技术属于胰蛋白酶检测
，具体涉及一种基于距离信号读出的胰蛋白酶含量检测方法。

技术介绍

[0002]目前，胰蛋白酶活性检测方法有质谱法、光谱法、凝胶电泳法、电化学法等，仪器价格昂贵，检测成本高，需专人操作，普适性差，且耗时长。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种以距离为输出信号的胰蛋白酶含量检测方法，该方法操作简单，不涉及大型仪器，混合纤维素微孔滤膜成本低，降低检测成本。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种基于距离信号读出的胰蛋白酶含量检测方法，该方法为：
[0005]S1、将100μL的质量分数为5％的明胶水溶液滴加在混合纤维素微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d0；
[0006]S2、分别向质量分数为5％的明胶水溶液中加入不同浓度的胰蛋白酶溶液，在温度为37℃的条件下，发生酶催化反应10min，然后取100μL的反应液滴加于混合纤维素微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d；
[0007]S3、根据d
‑
d0的变化值，制得直径变化值随胰蛋白酶浓度变化的标准曲线；
[0008]S4、取含有胰蛋白酶的待测样品按步骤S2进行，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d
待测样品
，将所述d
待测样品
代入S3中得到的标准曲线中，可计算出待测样品中胰蛋白酶含量。
[0009]优选地，S1中所述混合纤维素微孔滤膜的孔径为1.0μm。
[0010]优选地，S2中所述胰蛋白酶溶液的浓度为0.01mg/mL～10mg/mL。
[0011]优选地，S2中所述明胶水溶液和胰蛋白酶溶液的体积比为9：1。
[0012]优选地，S4中所述含有胰蛋白酶的待测样品包括血清。
[0013]本专利技术与现有技术相比具有以下优点：
[0014]本专利技术操作简单，不涉及大型仪器，混合纤维素微孔滤膜成本低，降低检测成本。
[0015]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明。
附图说明
[0016]图1是本专利技术的扩散直径随滤膜孔径变化图。
[0017]图2是本专利技术的扩散直径随加样体积变化图。
[0018]图3是本专利技术的扩散直径随扩散时间变化图。
[0019]图4是本专利技术的扩散直径随酶反应时间变化图。
[0020]图5是本专利技术测量胰蛋白酶的选择性图。
[0021]图6是本专利技术的胰蛋白酶浓度标准曲线图。
具体实施方式
[0022]实施例1
[0023]本实施例的基于距离信号读出的胰蛋白酶含量检测方法，该方法为：
[0024]S1、将100μL的质量分数为5％的明胶水溶液滴加在孔径为1.0μm的混合纤维素(MCE)微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d0；
[0025]混合纤维素(MCE)微孔滤膜市购，购于上海兴亚净化材料厂；所述混合纤维素(MCE)微孔滤膜的孔直径为0.25～2.0μm；
[0026]S2、分别向质量分数为5％的明胶水溶液中加入不同浓度的胰蛋白酶溶液，在温度为37℃的条件下，发生酶催化反应10min，然后取100μL的反应液滴加于混合纤维素微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d；本实施例中所选择的胰蛋白酶溶液的浓度依次为0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、5.0mg/mL、10.0mg/mL。
[0027]本实施例的胰蛋白酶浓度标准曲线图如图6所示，随着胰蛋白酶浓度增大，扩散直径逐渐增大，并且呈线性关系。
[0028]直径变化值d
‑
d0与胰蛋白酶浓度在0.01mg/mL～10.0mg/mL范围内呈线性关系；
[0029]所述明胶水溶液和胰蛋白酶溶液的体积比为9：1；
[0030]S3、根据胰蛋白酶浓度在0.01mg/mL～10mg/mL范围内的d
‑
d0的变化值，制得直径变化值随胰蛋白酶浓度变化的标准曲线，在0.01mg/mL～0.5mg/mL线性方程为y＝2.051x+6.419，R2＝0.991在0.5mg/mL～10.0mg/mL线性方程为y＝7.549x+7.936，R2＝0.993(图6)；
[0031]本实施例中胰蛋白酶水解明胶溶液后，明胶溶液粘度变化，导致扩散距离变化，距离变化值与蛋白酶浓度/活性呈线性关系；
[0032]S4、取含有胰蛋白酶的待测样品(健康人血清)按步骤S2进行，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d
待测样品
，将所述d
待测样品
代入S3中得到的标准曲线中，可计算出待测样品中胰蛋白酶含量。
[0033]血清来源于志愿者，由当地医院所抽取，向血清中加入3种不同浓度(1.0mg/mL、2.0mg/mL、5.0mg/mL)的胰蛋白酶标准溶液，所测得回收率在93.5％
‑
108.7％之间，说明本方法准确可靠。
[0034](一)本实施例对微孔滤膜的孔径进行了优化。
[0035]取100μL的质量分数为5％的明胶水溶液滴加在不同孔径的MCE微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径。由图1可知，扩散直径随孔径增大而增大，最终选择1.0μm孔径。
[0036](二)本实施例对加样体积进行了优化。
[0037]分别在有无胰蛋白酶存在下，对加样体积进行了优化。将质量分数为5％的明胶水溶液和1mg/mL胰蛋白酶溶液按照体积9:1进行混合，在37℃反应10min，然分别取出不同体积(20μL、50μL、80μL、100μL、150μL、200μL)滴加在1.0μm孔径的MCE微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径。由图2可知，两种溶液的扩散直径均随加样体积增大而增大，但若体积过大，扩散形状不规则，且扩散平衡时间长，因此最终选择100μL。
[0038](三)本实施例对扩散时间进行了优化。
[0039]对不同胰蛋白酶浓度溶液的扩散时间进行了优化，将质量分数为5％的明胶水溶液和不同胰蛋白酶溶液按照体积9:1进行混合，在37℃反应10min，然后取出100μL混合液滴加在1.0μm孔径的MCE微孔滤膜上，扩散不同时间(0.5min、1min、1.5min、2min、3min、4min、5min)，用游标卡尺读取扩散直径。由图3可知，扩散直径随扩散时间增大而增大，3min后直径不再变化，因此最终选择3min。
[0040](四)本实施例对酶催化反应时间进行了优化。
[0041]对胰蛋白酶的催化反应时间进行了优化，将质量分数为5％的明胶水溶液和10mg/mL胰蛋白酶溶液按照体积9:1进行混合在37℃进行反应，待反应不同时间(0m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于距离信号读出的胰蛋白酶含量检测方法，其特征在于，该方法为：S1、将100μL的质量分数为5％的明胶(溶于pH7.5磷酸盐水溶液)溶液滴加在混合纤维素微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d0；S2、分别向质量分数为5％的明胶水溶液中加入不同浓度的胰蛋白酶溶液，在温度为37℃的条件下，发生酶催化反应10min，然后取100μL的反应液滴加于混合纤维素微孔滤膜上，扩散3min，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d；S3、根据d
‑
d0的变化值，制得直径变化值随胰蛋白酶浓度变化的标准曲线；S4、取含有胰蛋白酶的待测样品按步骤S2进行，用游标卡尺读取扩散直径，并记为d
待测样品
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓霞，侯文雅，张国娟，郭晓迪，吕丹，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：