【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及荧光共振能量转移效率的测量方法，具体涉及一种基于光漂白 的荧光共振能量效率的定量测量方法。
技术介绍
基于荧光的各种技术已经成为在活体细胞中实时检测细胞信号转导、细胞 凋亡和增殖的分子调控机制的重要技术。荧光光谱技术被广泛应用于化学合成 物以及蛋白质成分和结构的分析，也被广泛应用于肿瘤特征、中药成分以及中药作用机理的分析。荧光共振能量转移(FRET)技术是一种用于定量测量两个 不同发光基团间距离的技术。FRET是通过分子间的电偶极相互作用将供体激发 态能量转移到受体激发态的过程，它是一种非辐射的能量越迁。当FRET发生时， 供体荧光减弱，而受体荧光增强，如果能够准确测量受体增加的荧光强度和供 体减少的荧光强度，就可以准确测量FRET效率。但是由于自荧光以及光谱串扰 的影响，使得荧光共振能量成像显微镜很难定量分析荧光共振能量转移效率。 目前已有多种计算FRET效率的方法，Gordon —种可以修正发射串扰的定量计算FRET效率的方法，采用三组 不同的滤光片，分别测量分离的供体和受体以及供体一受体对在三组滤片组时 的荧光强度，所以该方法非常复杂。另外，...
【技术保护点】
一种基于光漂白的荧光共振能量效率的定量测量方法，包括以下具体步骤： （１）在活细胞中表达供体－受体对； （２）利用激光共聚焦扫描荧光显微镜对上述细胞进行多通道荧光成像和ＦＲＥＴ受体光漂白；ＦＲＥＴ检测时，使用氩离子激光器选择性的激光供体，选择合适的荧光探测通道分别用来收集供体和受体的荧光；光漂白时，采用氩离子激光器选择性地光漂白受体，采集受体光漂白前后供体通道和受体通道光漂白前后的平均荧光强度，得到供体通道增加的荧光强度为ΔＩ↓［Ｄ］以及受体通道减少的荧光强度为ΔＩ↓［Ａ］； （３）计算荧光共振能量转移效率Ｅ： Ｅ＝［ΔＩ↓［Ｄ］φ↓［Ｄ］φ↓［Ａ］Ｃ↓［Ｄ－ＣＨ１］Ｃ↓［...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈同生，王龙祥，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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