利用液相色谱纯化淀粉酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用液相色谱纯化淀粉酶的方法，属于生物制剂技术领域。其包括以下步骤：（1）粗淀粉酶的制备：准备枯草芽孢杆菌，进行发酵得到发酵液，接着将发酵液进行离心，取上清液，得到粗淀粉酶溶液；（2）粗淀粉酶的纯化：将步骤（1）得到的粗淀粉酶溶液，先选择凝胶过滤，接着施加到色谱柱进行洗脱分离，即得到纯化后的淀粉酶溶液，然后烘干即可。本发明专利技术的工艺方法对于淀粉酶的纯化具有明显的提升作用，使用后不仅产率提升，而且酶活力的保留较大。大。

【技术实现步骤摘要】
利用液相色谱纯化淀粉酶的方法


[0001]本专利技术属于生物制剂
，具体地说，涉及一种利用液相色谱纯化淀粉酶的方法。

技术介绍

[0002]淀粉酶作为一种基本的工业用酶，分为α
‑
淀粉酶、β
‑
淀粉酶和γ
‑
淀粉酶。其中α
‑
淀粉酶是一种应用较为广泛的工业用酶，它可以作用于淀粉和其它多糖的内部α
‑1‑
4糖苷键，从而产生葡萄糖和麦芽糖等多种物质，目前工业上利用其生产了乙醇、高果糖玉米糖浆、食品、纺织物和洗涤剂等。作为重要的大分子生物催化剂，酶分子具有高效性和特异性，是常用的化学催化剂的良好替代品。此外，酶促反应是在较为温和的条件下进行，所产生的副产物和污染少。因此，近年来，酶分子在制药、化工、生物、食品等行业的应用明显增加。然而，酶分子在极端条件下具有相对较低的稳定性，并且在商业应用中成本颇高。为了改善这些局限性，提高酶活力、稳定性、再利用能力和酶的效率成为了研究的热点。其中，研究多采用超声波处理、微波辐射、高静水压、超临界二氧化碳处理以及蛋白质工程本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.利用液相色谱纯化淀粉酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）粗淀粉酶的制备：准备枯草芽孢杆菌，进行发酵得到发酵液，接着将发酵液进行离心，取上清液，得到粗淀粉酶溶液；所述枯草芽孢杆菌的分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacilus subtilis)，保藏编号为CGMCC NO.16139，保藏日期为2018年7月20日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；（2）粗淀粉酶的纯化：将步骤（1）得到的粗淀粉酶溶液，先选择凝胶过滤，接着施加到色谱柱进行洗脱分离，即得到纯化后的淀粉酶溶液，然后烘干。2.根据权利要求1所述的利用液相色谱纯化淀粉酶的方法，其特征在于：步骤（1）中发酵采用的培养基为NB营养肉汤；所述NB营养肉汤中添加氯化钙，其中氯化钙的终浓度为0.1mM。3.根据权利要求1所述的利用液相色谱纯化淀粉酶的方法，其特征在于：步骤（1）中发酵的时间为24h；步骤（1）中发酵的温度为35℃；步骤（1）中发酵的摇床转速为120rm；步骤（1）中发酵的pH值为7.0。4.根据权利要求1所述的利用液相色谱纯化淀粉酶的方法，其特征在于：步骤（1）中离心的转速为12000rpm；步骤（1）中离心的时间为15min；步骤（1）中离心的温度为4℃。5.根据权利要求1所述的利用液相色谱纯化淀粉酶的方法，其特征在于：步骤（2）中凝胶过滤的缓冲液为PBS缓冲液；步骤（2）中凝胶过滤的凝胶材质，以重量份计，包括以下组分：葡聚糖
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150份
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200份，壳聚糖
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80份
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120份，β
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磷酸三钙
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20份
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭云，唐桢尧，郭贝亭，
申请(专利权)人：南京农丰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：