一种酵母发酵培养基制造技术

本发明专利技术属于酵母发酵领域，具体涉及一种可以缩短酵母发酵周期并且降低发酵上清中总磷含量的发酵培养基。相对常规的酵母发酵培养基，本发明专利技术提供的发酵培养基可以在不影响重组蛋白产量的前提下缩短发酵周期42

【技术实现步骤摘要】
一种酵母发酵培养基


[0001]本专利技术属于酵母发酵领域，具体涉及一种可以缩短酵母发酵周期并且降低发酵上清中磷含量的发酵培养基。

技术介绍

[0002]酵母既具有真核生物的蛋白可翻译后修饰、蛋白正确折叠的特性，又具有类似原核生物的繁殖快、易培养、便于遗传操作的特性，应用十分广泛，尤其是毕赤酵母，已经成为多种重组蛋白生产的理想宿主。
[0003]毕赤酵母发酵培养基，一般为BSM培养基及BSM基础上改进的培养基。BSM(基础盐)培养基是Invitrogen公司提供的毕赤酵母发酵常规培养基，其配方为：85％磷酸26.7ml/L，二水硫酸钙0.93g/L，硫酸钾18.2g/L，七水硫酸镁14.9g/L，氢氧化钾4.13g/L，甘油40.0g/L，PTM1 4.35ml/L。用该培养基发酵生产重组蛋白，培养时间一般需要6
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8天。同时，高浓度磷酸盐在发酵结束时往往不能被完全代谢转化，使得发酵上清中总磷含量较高，且在下游纯化处理及废水处理过程中一般难以去除而造成较大的环保压力。因此有必要对上述培养基进行优化，获得一种发酵周期短、磷含量低的发酵培养基，以实现酵母发酵生产节能减排的目的。专利CN105154500B提供了一种酵母发酵培养基，能够将发酵周期缩短24
‑
42小时，但培养基中使用了蛋白胨和黄豆粉等有机营养物质，增加了生产成本及有机物排放。相对而言，本专利技术提供的发酵培养基中无有机成分，且发酵周期进一步缩短，节能减排优势显著。

技术实现思路

[0004]本专利技术通过对常规的酵母发酵培养基进行优化，获得一种可以在不影响重组蛋白表达量的前提下，同时缩短发酵周期和降低发酵上清总磷含量的酵母发酵培养基。
[0005]为达到此专利技术的目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]第一方面，本专利技术提供了一种酵母发酵培养基，其特征在于，配方为：85％磷酸10～15ml/L，二水硫酸钙0.3～0.5g/L，硫酸钾8～10g/L，七水硫酸镁7～8g/L，氢氧化钾1～3g/L，甘油0～100g/L，PTM1溶液4～5ml/L。
[0007]优选地，所述酵母发酵培养基配方为：85％磷酸13ml/L，二水硫酸钙0.46g/L，硫酸钾9.1g/L，七水硫酸镁7.46g/L，氢氧化钾2.06g/L，甘油30.0g/L，PTM1溶液4.35ml/L。
[0008]第二方面，本专利技术提供了一种通过如第一方面所述的发酵培养基生产重组蛋白的通用方法，所述方法包括如下步骤：
[0009](1)将酵母种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养至碳源耗尽；
[0010](2)流加甘油进行甘油补料培养，培养至一定的菌体湿重；
[0011](3)流加甲醇进行甲醇诱导培养，培养至重组蛋白表达量不再提高时结束发酵。
[0012]优选地，步骤(1)所述的酵母种子液的OD600为6
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10。
[0013]优选地，步骤(1)所述的接种至发酵培养基中的接种量为1％
‑
20％，更优选地，接
种量为10％。
[0014]优选地，步骤(1)所述的培养至碳源耗尽表现为溶氧上升。
[0015]优选地，步骤(1)和(2)所述培养的培养温度为25
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30℃，更优选地，所述培养温度为28
‑
30℃，最优选地，所述培养温度为30℃。
[0016]优选地，步骤(3)所述培养的培养温度为20
‑
30℃，更优选地，所述培养温度为25
‑
28℃。
[0017]优选地，步骤(1)、(2)和(3)所述培养的溶氧量为0
‑
50％，更优选地，所述培养的溶氧量为0
‑
30％。
[0018]优选地，步骤(1)和(2)所述发酵培养的pH为5.0
‑
7.0，更优选地，所述发酵培养的pH为6.0。
[0019]优选地，步骤(3)所述发酵培养的pH为2.0
‑
6.0，更优选地，所述发酵培养的pH为3.0
‑
5.0。
[0020]优选地，步骤(2)所述培养至菌体湿重达到200
‑
300g/L。
[0021]优选地，步骤(2)所述的甘油浓度为0
‑
100％，更优选地，甘油浓度为50％。
[0022]优选地，步骤(2)所述的甘油补料速度为0
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100ml/h/L，更优选地，甘油补料速度为0
‑
40ml/h/L。
[0023]优选地，步骤(3)所述的甲醇浓度为0
‑
100％，更优选地，甘油浓度为100％。
[0024]优选地，步骤(3)所述的甲醇补料速度为0
‑
50ml/h/L，更优选地，甘油补料速度为0
‑
20ml/h/L。优选地，第一方面和第二方面所述酵母为毕赤酵母和酿酒酵母，更优选地，所述酵母为毕赤酵母。
[0025]优选地，第一方面所述的酵母发酵培养基和第二方面所述的方法适用于生产重组蛋白，优选地，所述重组蛋白选自下组：重组人免疫球蛋白G1～4，单域抗体VHH，重组人干扰素α2a，重组人干扰素α2b，重组人白介素
‑
11，重组人表皮生长因子，重组人糜蛋白酶原，I型胶原蛋白，人血清白蛋白，重组人白介素
‑
1β，重组人白介素
‑
3，重组人白介素
‑
15，scFv，α
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淀粉酶，菠萝蛋白酶，重组人胰蛋白酶原，重组人溶菌酶和重组人生长激素。
[0026]优选地，第一方面所述的酵母发酵培养基和第二方面所述的方法可使得生产重组蛋白的发酵周期相对于常规发酵培养基缩短24
‑
72h，更优选地，发酵周期可缩短42
‑
54h。所述常规发酵培养基优选地为BSM培养基。
附图说明
[0027]图1为实施例1中菌体湿重、上清含磷量和重组人糜蛋白酶原表达量随培养时间变化的曲线图；
[0028]图2为实施例2中菌体湿重、上清含磷量和重组人糜蛋白酶原表达量随培养时间变化的曲线图。
[0029]图3为实施例3中菌体湿重、上清含磷量和重组人胰蛋白酶原表达量随培养时间变化的曲线图；
[0030]图4为实施例4中菌体湿重、上清含磷量和重组人胰蛋白酶原表达量随培养时间变化的曲线图；
[0031]图5为实施例5中菌体湿重、上清含磷量和重组人溶菌酶表达量随培养时间变化的
曲线图；
[0032]图6为实施例6中菌体湿重、上清含磷量和重组人溶菌酶表达量随培养时间变化的曲线图；
[0033]图7为实施例7中菌体湿重、上清含磷量和重组人生长激素表达量随培养时间变化的曲线图；
[0034]图8为实施例8中菌体湿重、上清含磷量和重组人生长激素表达量随培养时间变化的曲线图。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酵母发酵培养基，其包含：85％磷酸10～15ml/L，二水硫酸钙0.3～0.5g/L，硫酸钾8～10g/L，七水硫酸镁7～8g/L，氢氧化钾1～3g/L，甘油0～100g/L，PTM1溶液4～5ml/L。2.根据权利要求1所述的培养基，其包含：85％磷酸13ml/L，二水硫酸钙0.46g/L，硫酸钾9.1g/L，七水硫酸镁7.46g/L，氢氧化钾2.06g/L，甘油30.0g/L，PTM1溶液4.35ml/L。3.使用权利要求1或2所述的酵母发酵培养基进行酵母发酵以生产重组蛋白的方法，其特征在于，包含如下步骤：(1)将酵母种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养至碳源耗尽；(2)流加甘油进行甘油补料培养，培养至一定的菌体湿重；(3)流加甲醇进行甲醇诱导培养，培养至重组蛋白表达量不再提高时结束发酵。4.根据权利要求3所述的方法，其中，优选地，步骤(1)所述的酵母种子液的OD600为6
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10；优选地，步骤(1)所述的接种至发酵培养基中的接种量为1％
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20％，更优选地，接种量为10％；优选地，步骤(1)所述的培养至碳源耗尽表现为溶氧上升；优选地，步骤(1)和(2)所述培养的培养温度为25
‑
30℃，更优选地，所述培养温度为28
‑
30℃，最优选地，所述培养温度为30℃；优选地，步骤(3)所述培养的培养温度为20
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30℃，更优选地，所述培养温度为25
‑
28℃；优选地，步骤(1)、(2)和(3)所述培养的溶氧量为0
‑
50％，更优选地，所述培养的溶氧量为0
‑
30％；优选地，步骤(1)和(2)所述发酵培养的pH为5.0
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7.0，更优选地，所述发酵培养的pH为6.0；优选地，步骤(3)所述发酵培养的pH为2.0
‑
6.0，更优选地，所述发酵培养的pH为3.0
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5.0；优选地，步骤(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙玉华，郑雷雷，刘彦君，王征，
申请(专利权)人：上海宝济药业有限公司，
类型：发明
国别省市：