引物探针组、检测产品及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及引物探针组、检测产品及其应用。本发明专利技术提供了引物，具有：如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6中任意所示的核苷酸序列；或与上述核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与上述核苷酸序列不同的核苷酸序列；或与上述核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与上述核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或与上述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。本发明专利技术提出了将液滴数字PCR平台用来检测结核分枝杆或结核分枝杆菌复合群，本发明专利技术另一方面提出了将rRNA结合IS6110同时检测DNA和RNA作为核酸检测试剂盒的靶标。盒的靶标。

【技术实现步骤摘要】
引物探针组、检测产品及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及引物探针组、检测产品及其应用。

技术介绍

[0002]结核分枝杆菌(M.tuberculosis)简称为结核杆菌(tubercle bacilli)，是人类结核病的病原体。是专性需氧的一类细菌，抗酸染色阳性。无鞭毛，有菌毛，有微荚膜但不形成芽孢，其细菌壁既没有革兰阳性菌的磷壁酸，也没有革兰阴性菌的脂多糖。德国细菌学家郭霍(Robert Koch，1843
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1910)于1882年发现并证明为人类结核病的病原菌。该菌感染人体导致的结核病是严重影响人类生命健康的一种传染病，经过与其几个世纪的抗争后逐渐得到控制，但近年来由于多种因素的影响，该疾病变得日趋严重。
[0003]由于结核分枝杆菌比较难破壁，其核酸提取效率最高只能达到40％左右，经提取这一步就大大的降低了结核分枝杆菌的检测灵敏度，目前市场上存在的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒，为了提高检测效率在选用高拷贝序列IS6110和IS1081的同时，使用了巢式扩增。该方法确实大大的提高了结核分枝杆菌的检测灵敏度，但是其检测的靶标是DNA。结核分枝杆菌只要存在过，无论死菌活菌都有DNA的存在，故检测DNA无法完全明确患者体内是否有活的结核分枝杆菌存在，该方法只能用于结核患者的筛查，不能用于患者的治疗监控。
[0004]同时，大量患者在使用药物以后，即使结核分枝杆菌全被杀死，但是体内仍有大量的结核分枝杆菌DNA存在，导致选用高拷贝序列并使用巢式等以DNA为靶标的方法检测仍然显示阳性结果。在治疗上为医生提供错误信息，引起过度治疗。
[0005]因此，寻找一种灵敏度高、特异性好，同时可以用于对结合患者药物治疗反应进行监测的试剂盒至关重要。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了引物探针组、检测产品及其应用。本专利技术提出了将液滴数字PCR平台用来检测结核分枝杆或结核分枝杆菌复合群，本专利技术另一方面提出了将rRNA结合IS6110同时检测DNA和RNA作为核酸检测试剂盒的靶标。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了引物，具有：
[0009](1)、如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6中任意所示的核苷酸序列；或
[0010](2)、与(1)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(1)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
[0011](3)、与(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0012](4)、与(1)、(2)或(3)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。
[0013]本专利技术还提供了探针，具有：
[0014](5)、如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:9中任意所示的核苷酸序列；或
[0015](6)、与(5)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(5)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
[0016](7)、与(5)或(6)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(5)或(6)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0017](8)、与(5)、(6)或(7)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。
[0018]在本专利技术的一些实施方案中，上述探针具有荧光报告基团和/或淬灭基团。
[0019]在本专利技术的一些实施方案中，上述探针中所述荧光报告基团包括FAM和/或VIC，所述淬灭基团包括MGB和/或BHQ1。
[0020]本专利技术还提供了引物探针组，包括上述引物和/或上述探针。
[0021]本专利技术还提供了上述引物、上述探针和/或上述引物探针组在制备检测结核分歧杆菌和/或结核分歧杆菌复合群的核酸的产品中的应用。
[0022]在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中所述结核分枝杆菌复合群包括：结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌或非洲分枝杆菌。
[0023]在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中所述产品包括：检测试剂和/或试剂盒。
[0024]本专利技术还提供了检测产品，包括上述引物、上述探针和/或上述引物探针组以及可接受的助剂或载体。
[0025]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品，以体积份数计，其反应体系包括：
[0026][0027]；所述引物探针混合液包括上述引物探针组。
[0028]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品，以体积份数计，所述引物探针混合液包括：
[0029]上游引物0.35份
[0030]下游引物0.35份探针0.105份
[0031]；所述上游引物、所述下游引物或所述探针的初始浓度为100μM。
[0032]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品的扩增程序包括：
[0033][0034]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品适用于液滴数字PCR。
[0035]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品包括检测试剂和/或试剂盒。
[0036]本专利技术还提供了检测方法，取上述引物、上述探针、上述引物探针组和/或如上述
检测产品对待测样品扩增，检测。
[0037]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中所述检测的检测靶标包括：rRNA或IS6110。
[0038]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测方法中所述待测样品包括结核分歧杆菌和/或结核分歧杆菌复合群。
[0039]本专利技术提供了引物，具有：
[0040](1)、如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6中任意所示的核苷酸序列；或
[0041](2)、与(1)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(1)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
[0042](3)、与(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
[0043](4)、与(1)、(2)或(3)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。
[0044]本专利技术的有益效果包括：
[0045](1)本专利技术提出了将液滴数字PCR平台用来检测结核分枝杆或结核分枝杆菌复合群，本专利技术另一方面提出了将rRNA结合IS6110同时检测DNA和RNA作为核酸检测试剂盒的靶标。该试剂盒不仅灵敏度高、特异性好；同时，因其绝大部分的检测值是通过rRNA反应出来的，还可以用于结核患者对药物治疗反应的监测。
[0046](2)本专利技术选用核糖体RNA(rRNA)结合IS6110为检测靶标。因为蛋白质是生命活动的体现者，核糖体是蛋白质的加工厂，所以无论是原核生物还是真核生物体内均含有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物，其特征在于，具有：(1)、如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:6中任意所示的核苷酸序列；或(2)、与(1)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(1)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(3)、与(1)或(2)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(1)或(2)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(4)、与(1)、(2)或(3)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。2.探针，其特征在于，具有：(5)、如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:9中任意所示的核苷酸序列；或(6)、与(5)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(5)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或(7)、与(5)或(6)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(5)或(6)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或(8)、与(5)、(6)或(7)所述核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。3.如权利要求2所述的探针，其特征在于，其具有荧光报告基团和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏江，高学娟，
申请(专利权)人：领航基因科技杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：