一种蛋清内注射leptin的方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋清内注射leptin的方法，属于动物生长调节技术领域。孵化前， 对种蛋小头端进行消毒，用蟾蜍脊髓穿刺针轻轻在消毒部位钻孔，用微量进样器通过钻 孔向蛋清内导入leptin注射试剂，石蜡封口。本发明专利技术往蛋清内注射一定浓度的leptin后， 观察到leptin抑制肉鸡胚胎发育，降低出雏重，却促进出雏后肉鸡的早期生长发育，leptin 可能作为信号物质介导对肉鸡子代早期生长发育的程序化作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体地讲，本专利技术涉及一种以leptin作 为信号物质介导对肉鸡子代早期生长发育的程序化作用，属于动物生长调节
二
技术介绍
二十一世纪，肥胖成为重要的公共健康问题而越来越为世人所关注。我国随着经济 的发展和物质生活的改善，越来越多的儿童已悄然加入了肥胖者的行列，肥胖儿童已占 儿童总数的10%，并正以每年8%的速度递增。在对动物食品品质的要求日益提高的今 天，由于肉用畜禽的脂类沉积直接关系肉品质量，动物的肥胖问题也不容忽视。研究发现，肥胖与生命早期的营养状况密不可分，胚胎和新生期的营养与脂肪细胞 数量和肥大直接相关。目前，"肥胖程序化"的研究己经成为当今世界生命科学研究的 前沿，其中母源性激素信号的介导作用更成为该研究的焦点。母源性激素作为反映母体营养和代谢状况的媒介，在子代生长发育过程中扮演着十 分重要的角色，这些激素包括性腺激素(gonadal hormones)、糖皮质激素 (glucocorticoids)、甲状腺激素(thyroid hormones)和促生长类激素以及反映机体能量 平衡和脂肪代谢状况的胰岛素(insulin)和瘦素(leptin)等。自1994年小鼠的o6基因及其人类的同源序列被克隆以来，对W基因编码的蛋白 质leptin的研究一度成为热点。L印tin能抑制脂肪的蓄积、维持脂肪细胞的正常大小， 其水平是反映动物机体脂肪蓄积量的信号，作为反映能量摄取、脂肪含量及组成状态的 传入信号，参与动物体重稳态的反馈调节。此外，leptin作为母子信息传递的媒介物质， 在肥胖的程序化研究中也倍受关注。近年来，leptin在肥胖程序化中的作用逐渐被人们认识。对噬齿类和反刍类的研究 表明，母体循环leptin浓度可能是提供给胎儿关于现在和潜在的营养环境的关键信号。 这个信号可能"指导"胎儿和新生儿完成"脂-脑"反馈调节环的早期发育，并最终主 导成年后能量平衡和体重稳态调节模式。与哺乳动物不同，肝脏不但是禽类leptin的合 成和分泌的主要场所，同时又是禽类最重要的脂肪代谢器官，然而母源性leptin或禽类 胚胎发育早期l印tin处理是否会影响胚胎和新生雏鸡肝脏leptin合成和分泌，并对肝脏 脂肪代谢模式产生程序化影响，尚未见报道。有文献报道(Poultry Science2008 Sep. 87:1810—1817)，以三黄肉鸡为实验对象，观 察到日粮添喂半胱胺导致母鸡肝脏leptin合成、分泌以及蛋中leptin沉积发生变化，同3时伴随子代维鸡早期生长受到影响，提出leptin可能作为一种信号物质介导半胱胺对肉 鸡子代生长程序化影响的假说，认为蛋中沉积的leptin会改变子代肝脏leptin合成及其 功能，并影响子代生长早期肝脏脂肪酸合成关键因子的表达，从而改变子代早期的生长 和代谢模式。
技术实现思路
技术问题本专利技术提出了，往蛋清内注射一定浓度的 leptin后，leptin抑制肉鸡胚胎发育，降低出雏重，却促进出雏后肉鸡的早期生长发育， leptin可能作为信号物质介导对肉鸡子代早期生长发育的程序化作用。技术方案，其特征在于孵化前，对种蛋小头端进行消毒，用蟾 蜍脊髓穿刺针轻轻在消毒部位钻孔，用微量进样器通过钻孔向蛋清内导入leptin注射试 剂，石蜡封口。包括a、 器械准备玻璃棒、微孔滤器、蟾蜍脊髓穿刺针、10-25mL钠钙玻璃模制注射 剂瓶、碘酊、酒精棉、巻纸、酒精灯、lmL—次性注射器；b、 试剂准备NaCl、 Na2HP04.12H20、 NaH2P04.2H20、双蒸水、小鼠重组leptin (498-OB-01M, R&D， USA)、石蜡；C、操作步骤(1) 孵化箱消毒；微孔滤器、蟾蜍脊髓穿刺针、10-25mL钠钙玻璃模制注射剂瓶高 压灭菌；(2) 种蛋称重、甲醛熏蒸消毒、分组；(3) 小鼠重组leptin溶液的配制① PBS(0.01M， pH7.4)配方NaC18.0g， Na2HP04.12H20 3.23 g， NaH2P04.2H20 0.45 g，加蒸馏水至1000 ml，调pH值7.4;② 将PBS高压灭菌；③ 在消毒灭菌的超净工作台中，用高压灭菌后的PBS配制leptin溶液，微孔滤器 过滤后，盛入高压灭菌后的钠钙玻璃模制注射剂瓶中，密封待用；(4) 蛋清内注射① 鸡蛋消毒将鸡蛋移入开放式超净工作台，手持鸡蛋，小头朝上，碘酊消毒， 体积比75%酒精脱碘；② 打孔将消毒后的鸡蛋小头朝上置于蛋拖上，用蟾蜍脊髓穿刺针在小头顶端位 置打孔，入针位置以刚好突破内壳膜，旋转针尖，扩大针眼方便注射；③ 注射用lmL—次性注射器吸取注射液，由打孔处导入100nl leptin溶液，然后4用石蜡封孔；(5)入孵在孵化器中随机排列鸡蛋，孵化。有益效果与现有技术相比，本专利技术的蛋清内注射leptin的方法及其引发的生物学效应具有以 下优点(1) 本专利技术的蛋清内注射leptin的方法简单，并且可排除其他未知因素的影响，单纯研 究蛋中高水平的leptin沉积对胚胎和新生雏鸡生长发育的影响。(2) 通过本专利技术技术提出了蛋清内注射leptin对肉鸡胚胎发育的影响，并证实这种影响 伴随禽类胚胎肝脏leptin合成与分泌、以及新生雏鸡肝脏脂质代谢模式的改变。G)通过本专利技术提出了蛋清内注射leptin抑制肉鸡胚胎发育，但是出雏后生长速度加快， 肝脏脂肪代谢模式发生改变，并且leptin对胚胎发育和出雏后生长的影响存在不同 的时效性和性别特异性。此外，蛋内注射leptin影响出雏后肉鸡生长和代谢的机制 可能有甲状腺激素和生长轴基因的参与。具体实施例方式用75%酒精对种蛋小头端进行消毒，用蟾蜍脊髓穿刺针轻轻在消毒部位钻孔，用微 量加样器通过钻孔向蛋清内导入特定体积和浓度leptin注射溶剂，石蜡封口 ；鸡蛋正常 孵化；观察肉鸡胚胎、新生雏鸡和出雏后快速生长期的生长情况，研究不同发育阶段肝 脏leptin合成及其受体的变化，并比较肝脏脂肪酸合成关键因子表达的差异。包括a、 器械准备玻璃棒、微孔滤器、蟾蜍脊髓穿刺针、10-25mL钠钙玻璃模制注射 剂瓶、碘酊、酒精棉、巻纸、酒精灯、lmL—次性注射器；b、 试剂准备NaCl、 Na2HP04.12H20、 NaH2P04.2H20、双蒸水、小鼠重组leptin、 石蜡；c、 步骤(1) 孵化箱消毒；微孔滤器、蟾蜍脊髓穿刺针、10-25mL钠钙玻璃模制注射剂瓶高 压灭菌；(2) 种蛋称重、甲醛熏蒸消毒、分组；(3) 特定的小鼠重组leptin溶液的配制① PBS(0.01M， pH7.4)配方NaC18.0g ， Na2HP04.12H20 3.23g ， NaH2P04.2H20 0.45g，加蒸馏水至1000ml，调pH值7.4;② 将PBS高压灭菌；③ 在消毒灭菌的超净工作台中，用高压灭菌后的PBS配制特定浓度的leptin溶液，5微孔滤器过滤后，盛入高压灭菌后的钠钙玻璃模制注射剂瓶中，密封待用(现配现用)；(4) 蛋清内注射① 鸡蛋消毒将鸡蛋移入开放式超净工作台，手持鸡蛋，小头朝上，碘酊消毒，75%酒精脱碘；② 打孔将消毒后的鸡蛋小头朝上置于蛋拖上，用蟾蜍脊髓穿刺针在小头顶端位置轻巧快速打孔，入针位置以刚好突破本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋清内注射ｌｅｐｔｉｎ的方法，其特征在于：孵化前，对种蛋小头端进行消毒，用蟾蜍脊髓穿刺针轻轻在消毒部位钻孔，用微量进样器通过钻孔向蛋清内导入ｌｅｐｔｉｎ注射试剂，石蜡封口。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵茹茜，胡艳，
申请(专利权)人：赵茹茜，胡艳，
类型：发明
国别省市：84