重组结核分枝杆菌抗原、其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种重组结核分枝杆菌抗原，其制备方法及应用。所述重组结核分枝杆菌抗原能够有效诱导免疫反应，对结核分枝杆菌感染具有显著的保护作用。显著的保护作用。

【技术实现步骤摘要】
重组结核分枝杆菌抗原、其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种重组结核分枝杆菌抗原、其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]结核病(tuberculosis，TB)是威胁人类健康的一种重要传染病。根据世界卫生组织2020年发布的全球结核病报告，2019年估计有1000万人(范围：890
‑
1100万)罹患结核病，近年来这一数字以非常缓慢的速度下降。结核病的病原体是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)，其主要通过呼吸道传播，还可通过消化道进入人体。结核分枝杆菌感染可造成多种系统或脏器的结核病变，如肺结核、骨结核、肾结核、结核性脑膜炎等。
[0003]迄今为止，卡介苗(BCG)是全球唯一被批准使用的预防结核病的疫苗，然而其效果备受争议。通常认为，卡介苗对于预防重症结核，如小儿粟粒性结核病、结核病脑膜炎比较有效，但不能预防原发性感染，对于预防结核病传播的效果有限。已研发的其他疫苗，例如营养缺陷型结核减毒活疫苗、BCG重组疫苗、结核亚单位疫苗以及DNA疫苗等的保护效果也不理想，目前尚没有新的疫苗可以完全取代BCG。
[0004]因此，研发更有效、更安全、适用于各类人群使用的防治结核病的疫苗是非常必要的。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种对结核分枝杆菌感染具有显著的保护作用的重组结核分枝杆菌抗原。
[0006]在一方面，本专利技术提供一种重组结核分枝杆菌抗原，包含PE35、PPE68、CFP
‑
10和Rv2627c中的至少两个蛋白或其功能活性片段形成的融合蛋白。
[0007]在一些实施方式中，PE35包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，PPE68包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，CFP
‑
10包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，Rv2627c包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
[0008]在一些实施方式中，所述重组结核分枝杆菌抗原包含PE35、PPE68、CFP
‑
10和Rv2627c中的任意两个蛋白或其功能活性片段形成的融合蛋白，两个蛋白可以以任意顺序连接，以PE35和PPE68形成的融合蛋白为例，融合蛋白可以为PE35
‑
PPE68，也可以为PPE68
‑
PE35。
[0009]在一些实施方式中，所述重组结核分枝杆菌抗原包含PE35、PPE68、CFP
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10和Rv2627c中的任意三个蛋白或其功能活性片段形成的融合蛋白，三个蛋白可以以任意顺序连接，以PE35、PPE68和CFP
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10形成的融合蛋白为例，融合蛋白可以为PE35
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PPE68
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CFP
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10、PE35
‑
CFP
‑
10
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PPE68、PPE68
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PE35
‑
CFP
‑
10、PPE68
‑
CFP
‑
10
‑
PE35、CFP
‑
10
‑
PE35
‑
PPE68或者CFP
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10
‑
PPE68
‑
PE35。
[0010]在一些实施方式中，所述重组结核分枝杆菌抗原包含PE35、PPE68、CFP
‑
10和
Rv2627c中的四个蛋白或其功能活性片段形成的融合蛋白，四个蛋白可以以任意顺序连接，例如，融合蛋白可以为PE35
‑
PPE68
‑
CFP
‑
10
‑
Rv2627c、PE35
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CFP
‑
10
‑
PPE68
‑
Rv2627c、PPE68
‑
PE35
‑
CFP
‑
10
‑
Rv2627c、PPE68
‑
CFP
‑
10
‑
PE35
‑
Rv2627c、CFP
‑
10
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PE35
‑
PPE68
‑
Rv2627c、CFP
‑
10
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PPE68
‑
PE35
‑
Rv2627c、Rv2627c
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CFP
‑
10
‑
PE35
‑
PPE68或者Rv2627c
‑
PPE68
‑
PE35
‑
CFP
‑
10等。
[0011]在一些实施方式中，所述重组结核分枝杆菌抗原还包含增强免疫原性的多肽。
[0012]在一些实施方式中，所述增强免疫原性的多肽的序列包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
[0013]在一些实施方式中，所述重组结核分枝杆菌抗原包含SEQ ID NO:6
‑
8中任一项所示的氨基酸序列或其任意组合。
[0014]在一些实施方式中，所述重组结核分枝杆菌抗原进一步包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
[0015]在另一方面，本专利技术还提供一种编码所述重组结核分枝杆菌抗原的核苷酸序列。
[0016]在一些实施方式中，所述核苷酸序列包含SEQ ID NO:10
‑
12中任一项所示的核苷酸序列。
[0017]在一些实施方式中，所述核苷酸序列进一步包含SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列。
[0018]在另一方面，本专利技术还提供一种包含上述核苷酸序列的重组载体。
[0019]在另一方面，本专利技术还提供一种包含上述重组载体的表达系统细胞。
[0020]在一些实施方式中，所述表达系统的细胞包括为哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或细菌细胞，可选地；所述哺乳动物细胞包括293T细胞或CHO细胞，所述细菌细胞包括大肠杆菌细胞。
[0021]在另一方面，本专利技术还提供一种制备所述重组结核分枝杆菌抗原的方法，包括以下步骤：
[0022]利用编码所述重组结核分枝杆菌抗原的核苷酸序列构建重组表达质粒；
[0023]将构建的重组表达质粒转化宿主菌，筛选正确的重组表达质粒，
[0024]利用筛选的重组表达质粒转染表达系统的细胞，表达后收集上清并纯化得到重组结核分枝杆菌抗原。
[0025]在另一方面，本专利技术还提供一种所述重组结核分枝杆菌抗原、编码所述重组结核分枝杆菌抗原的核苷酸序列、包含所述核苷酸序列的重组载体、包含所述重组载体的表达系统细胞在制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组结核分枝杆菌抗原，其特征在于，包含PE35、PPE68、CFP
‑
10和Rv2627c中的至少两个蛋白或其功能活性片段形成的融合蛋白。2.根据权利要求1所述的重组结核分枝杆菌抗原，其特征在于，PE35包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，PPE68包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，CFP
‑
10包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，Rv2627c包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的重组结核分枝杆菌抗原，其特征在于，所述重组结核分枝杆菌抗原还包含增强免疫原性的多肽。4.根据权利要求3所述的重组结核分枝杆菌抗原，其特征在于，所述增强免疫原性的多肽的序列包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的重组结核分枝杆菌抗原，其特征在于，所述重组结核分枝杆菌抗原包含SEQ ID NO:6
‑
8中任一项所示的氨基酸序列或其任意组合。6.根据权利要求5所述的重组结核分枝杆菌抗原，其特征在于，所述重组结核分枝杆菌抗原进一步包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。7.一种编码权利要求1
‑
6中任一项所述重组结核分枝杆菌抗原的核苷酸序列。8.根据权利要求7所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列包含SEQ IDNO:10
‑
12中任一项所示的核苷酸序列。9.根据权利要求8所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列进一步包含SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列。10.一种包含权利要求7
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9中任一项所述核苷酸序列的重组载体。11.一种包含权利要求10所述重组载体的表达系统细胞。12.根据权利要求11所述的表达系统细胞，其特征在于，所述表达系统的细胞包括为哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或细菌细胞；可选地，所述哺乳动物细胞包括293T细胞或CHO细胞，所述细菌细胞包括大肠杆菌细胞。13.一种制备权利要求1
‑
6中任一项所述重组结核分枝杆菌抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用编码所述重组结核分枝杆菌抗原的核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡颖嵩，张琼月，姚文荣，张元杰，吴双，张岭，洪坤学，陈健平，刘勇，
申请(专利权)人：北京安百胜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：