一种海水中喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA的定量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种海水中喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA的定量检测方法，属于生物技术领域。包括：采集水体样本；提取样本中抗生素抗性基因的总DNA，所述抗生素抗性基因为喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA；目标DNA标准品制备；荧光定量PCR检测：荧光定量PCR反应的上游引物为SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，下游引物为SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。本发明专利技术所述方法安全环保，价格低廉，步骤简单，耗时短，特异性好，结果稳定可靠。可运用于海水中喹诺酮类抗生素抗性基因检测及丰度分析，具有很高的理论研究意义和实用价值。研究意义和实用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种海水中喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA的定量检测方法


[0001]本专利技术涉及一种海水中喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA的定量检测方法，属于生物


技术介绍

[0002]近年来，由于抗生素的广泛使用加速了抗生素抗性基因(ARGs)在水环境中的传播扩散，这些ARGs可能会通过直接或间接接触进入人体，从而给公共健康带来巨大威胁。ARGs不再仅仅是一个临床问题，大量天然ARGs库的发现更凸显了自然环境在ARGs传播中的作用。国内外的很多研究结果表明，ARGs在环境中的持续残留、菌群间迁移、转化和传播要比抗生素自身的残留对生态环境的危害更大。
[0003]海洋环境已逐步成为抗生素抗性基因传播扩散的重要媒介之一。我国入海河流中的抗生素浓度水平一般高于相应近岸海域，例如渤海、黄海、南海和莱州湾、北部湾，这表明抗生素随河流不断汇入邻近海域，如氟喹诺酮类抗生素在珠江三角洲以每年102吨的通量进入河口和近海。喹诺酮类抗生素作为我国水产养殖中最广泛使用的抗生素类型，同样也是治疗人类疾病的重要抗生素类型。因而，喹诺酮类抗生素引发的喹诺酮类抗生素抗性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA的引物，其特征在于，所述引物为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物用于检测海水中喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA。3.权利要求1或2所述的引物在检测海水中喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA中的应用。4.权利要求1或2所述的引物定量检测喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采集样本；(2)提取样本中抗生素抗性基因的总DNA，所述抗生素抗性基因为喹诺酮类抗生素抗性基因qnrA；(3)目标DNA标准品制备；(4)荧光定量PCR检测：荧光定量PCR反应的上游引物为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，下游引物为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。5.根据权利要求4所述的定量检测方法，其特征在于，步骤(3)所述目标DNA标准品制备的方法包括：1)以抗生素抗性基因的总DNA为模板，通过PCR反应扩增出抗生素抗性基因的DNA片段；2)切胶回收抗生素抗性基因的PCR产物；3)将回收的PCR产物与克隆载体连接成环状质粒，转化至感受态细胞进行克隆；4)通过蓝白实验筛选阳性克隆子，分离纯化后提取质粒；5)梯度稀释标准质粒制备荧光定量PCR标准曲线。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：苏洁，樊景凤，郭戈，明红霞，胡田，石婷婷，金媛，
申请(专利权)人：国家海洋环境监测中心，
类型：发明
国别省市：