一种快速鉴定外源cop-GFP的方法技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，本发明专利技术提供了一种快速鉴定外源cop

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定外源cop
‑
GFP的方法


[0001]本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及一种快速鉴定外源cop
‑
GFP的方法。

技术介绍

[0002]cop
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GFP是一种加强荧光蛋白，在动物体内表达后发绿色荧光。通常是作为一种报告基因来检测基因表达、调控、细胞分化及蛋白质在生物体内定位和转运等。通常cop
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GFP的表达鉴定方法主要包括：将外源基因转到动物体内后在48～72小时是使用荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达，或者是用流式细胞仪或者是紫外分光光度计来判断荧光蛋白的表达。然而，使用荧光显微镜观察虽可以判断细胞是否有绿色荧光蛋白的表达，但是无法定量判断荧光基因表达量的高低，使用流式细胞仪检测cop
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GFP绿色荧光的表达，虽然准确效率高而且能够定量分析，准确判断荧光表达量的高低，但是需要抗体和流式细胞仪所需设备条件较为苛刻，而且无法检测体外的外源的cop
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GFP的表达。因此，需要提供一种较为快捷、稳定的可以同时定性并且定量的方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定外源cop
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GFP的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)根据cop
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GFP的DNA序列设计合成地高辛探针；(2)使用离心柱纯化法提取待测样本的DNA；(3)将所述待测样本的DNA进行煮沸处理后加到薄膜上；(4)待膜风干后置于2
×
SSC缓冲液中浸泡；(5)浸泡结束后使用紫外交联将DNA固定在膜上；(6)固定结束后将膜DNA面与预杂交液混合进行预杂交，得预杂交膜；(7)将步骤(1)所得地高辛探针进行煮沸变性后冷却，然后与杂交液混合，得混合液；(8)将步骤(6)所得预杂交膜与步骤(7)所得混合液混合进行杂交过夜，然后使用0.5
×
SSC溶液进行漂洗，得探针交联膜；(9)使用核酸检测试剂盒对所述探针交联膜进行显影实验。2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定外源cop
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GFP的方法，其特征在于，步骤(1)中所述cop
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GFP的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的一种快速鉴定外源cop
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GFP的方法，其特征在于，步骤(1)中所述地高辛探针的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。4.根据权利要求1所述的一种快速鉴定外源cop
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GFP的方法，其特征在于，步骤(2)中所述待测样本的DNA的提取浓度≥100ng/μl。5.根据权利要求1所述的一种快速鉴定外源cop
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GFP的方法，其特征在于，步骤(3)中所述煮沸处理的时间为4～6min，步骤(3)中所述薄膜包括硝酸纤维素膜或尼龙膜，步骤(4)中所述浸泡的时间为15～25min。6.根据权利要求1所述的一种快速鉴定外源cop
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【专利技术属性】
技术研发人员：靳锴，高嘉晨，左其生，韩威，陈国宏，李碧春，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：发明
国别省市：