一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液及其用途，本发明专利技术的培养液可实现快速、高效、一步法诱导间充质干细胞为胰岛样细胞。经3天的诱导分化后，本发明专利技术实施例1

【技术实现步骤摘要】
一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液及其用途


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，特别涉及一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液及其用途。

技术介绍

[0002]糖尿病主要由因遗传、环境、精神等因素相互作用而导致胰岛素相对或绝对缺乏，并以持续高血糖为其主要生化特征的一种慢性全身性代谢疾病。胰岛素的注射与药物治疗成为了当前临床上控制糖尿病和降低其并发症发生的主要方法，但是不能从根本上治愈糖尿病。相关研究证实，体外实验中胰岛细胞的移植能够有效降低血糖和减少其并发症的发生。于是胰岛移植成为从根本上治愈糖尿病的方法之一，但是由于供体缺乏、胰腺/胰岛分离费用高、移植产生的炎性反应需要多次移植和长期服用免疫排斥药物等问题而未能在临床上广泛应用。
[0003]近几年来，利用干细胞移植技术来克服胰岛短缺的问题成为人们研究的焦点，将具有某种特定功能的细胞移植到体内相应的受损部位，不仅避免了传统药物治疗引起的毒副作用，而且可以恢复受损器官部分功能干细胞具有多向分化潜能，其中间充质干细胞是中胚层中具有高度自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为神经、汗腺、骨、软骨、脂肪、肝脏等多种组织细胞。脂肪、脐带和胎盘来源的MSC具有取材方便，传代能力强，免疫反应低，被污染的概率较小，无伦理学限制等优点，在一定条件下可分化为胰岛β细胞或胰岛素生成细胞(IPCs)，此方法成为替代现有短缺的胰岛细胞、实现临床糖尿病治疗的重要研究途径。
[0004]然而，现有技术中多是采用通过多步诱导的方式将间充质干细胞成功分化为胰岛素分泌型细胞。该诱导技术步骤繁杂、诱导因子使用较多，诱导周期一般为14
‑
21天，诱导周期长、残留因子种类繁多、细胞活性低、诱导转化率低，增加了临床应用的风险。因此，急需要开发一种体外一步法、快速且高效地诱导间充质干细胞定向分化为胰岛素分泌型细胞的培养液。

技术实现思路

[0005]针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术提供了一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液及其用途。
[0006]具体而言，本专利技术首先提供了一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液包括如下组分：1
‑
3％(v/v)BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，10
‑
30mM GLP
‑
1，50
‑
150mg/L人参总皂苷，100
‑
300u/L青霉素，100
‑
300u/L链霉素，DMEM/F12培养液余量。
[0007]优选地，所述诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液包括如下组分：1％(v/v)BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，10mM GLP
‑
1，50mg/L人参总皂苷，100u/L青霉素，100u/L链霉素，DMEM/F12培养液余量。
[0008]优选地，所述诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液包括如下组分：2％
(v/v)BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，20mM GLP
‑
1，100mg/L人参总皂苷，200u/L青霉素，200u/L链霉素，DMEM/F12培养液余量。
[0009]优选地，所述诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液包括如下组分：3％(v/v)BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，30mM GLP
‑
1，150mg/L人参总皂苷，300u/L青霉素，300u/L链霉素，DMEM/F12培养液余量。
[0010]进一步地，本专利技术还提供了一种制备上述诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液的方法，包括以下步骤：
[0011](1)取DMEM/F
‑
12的干粉溶解在高压灭菌的双蒸水中，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解制得基础培养液；
[0012](2)向由步骤(1)制得的基础培养液中加入一定量的BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，GLP
‑
1，人参总皂苷，青霉素，链霉素，搅拌至完全溶解；
[0013](3)调节步骤(2)所得混合物的PH至7.2
‑
7.4，过膜除菌后即得。
[0014]进一步的，所述步骤(3)中用0.22μm的透析袋过滤除菌。
[0015]优选地，使用时，要将上述培养液置于37℃预热后使用。
[0016]另一方面，本专利技术还提供了所述的培养液在诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化中的应用。
[0017]优选地，所述间充质干细胞为脂肪、骨髓和脐带来源的干细胞。
[0018]另一方面，本专利技术还提供了由所述培养液诱导间充质干细胞分化的胰岛样细胞。
[0019]进一步地，本专利技术还提供了所述培养液或所述的胰岛样细胞在制备糖尿病治疗药物中的应用。
[0020]本专利技术的优点如下：本专利技术的培养液可实现快速、高效、一步法诱导间充质干细胞为胰岛样细胞。经3天的诱导分化后，本专利技术实施例1
‑
3诱导后的胰岛样细胞的胰岛当量显著提高，且本专利技术所述培养液存在协同增效的技术效果，尤其是在培养液中添加ITS液体培养液补充剂、GLP
‑
1和人参总皂苷后，使其诱导分化效果得到显著改善，经诱导分化的胰岛样细胞会高表达胰岛素和胰高血糖素基因，且经诱导后的细胞团在低浓度和高浓度的葡萄糖刺激下胰岛素分泌量显著增加，具有体内分泌胰岛素调控血糖的功能。
附图说明
[0021]图1为经双硫腙染色的胰岛当量计数；
[0022]图2为Real
‑
Time PCR特异性基因检测的相对定量结果；
[0023]图3为不同浓度葡萄糖刺激下胰岛素的分泌量。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0025]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，并不用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0026]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市
售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0027]本专利技术的诱导剂各成分均为市售产品：DMEM/F12，购自于武汉普诺赛生命科技有限公司；GLP
‑
1(胰高血糖素样肽1)，购自Sigma公司；ITS液体培养液补充剂(100x)，购自Sigma公司；BSA，购自Sigma公司；青霉素/链霉素，购自Solarbio公司，双硫腙，购自上海一飞生物公司；人参总皂苷，购自于南京泽本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液，其特征在于，包括如下组分：1
‑
3％(v/v)BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，10
‑
30mM GLP
‑
1，50
‑
150mg/L人参总皂苷，100
‑
300u/L青霉素，100
‑
300u/L链霉素，DMEM/F12培养液余量。2.如权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液包括如下组分：1％(v/v)BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，10mM GLP
‑
1，50mg/L人参总皂苷，100u/L青霉素，100u/L链霉素，DMEM/F12培养液余量。3.如权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液包括如下组分：2％(v/v)BSA，1
×
ITS液体培养液补充剂(100x)，20mM GLP
‑
1，100mg/L人参总皂苷，200u/L青霉素，200u/L链霉素，DMEM/F12培养液余量。4.如权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液包括如下组分：3％(v/v)BSA，1
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【专利技术属性】
技术研发人员：李文东，杜文敬，
申请(专利权)人：广东华夏健康生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：