一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的方法及其用途技术

本发明专利技术属于生物医学领域，涉及一种将间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的方法以及其应用。其包含诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的诱导剂，由以下组分组成：尼克酰胺、碱性成纤维细胞生长因子、GLP

【技术实现步骤摘要】
一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的方法及其用途


[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及一种将间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的诱导方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是严重危害人类健康的常见多发病，目前治疗以注射胰岛素和药物为主，不仅给患者带来很大痛苦，对社会和家庭也造成沉重负担。近几年采用胰岛细胞或胰腺移植治疗糖尿病取得了一些疗效，但遗憾的是仍然面临两大难题：供体匮乏和免疫排斥。干细胞是一群较原始的细胞，具有自我更新的能力。间充质干细胞因来源广泛、易于培养和自体移植的特点，从而更加受到学者的青睐。
[0003]干细胞的优势是可自体来源,避免了免疫抑制剂的使用,将为糖尿病的细胞替代治疗提供了新的思路。干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,分为胚胎干细胞(embryon ic stem cel,IESC)和成体干细胞(adu lt stem ce l1,ASC)。而成体干细胞来源广泛，无伦理争议，可作为胰岛细胞的来源。
[0004]目前的干细胞诱导方式主要有体外诱导、基因修饰、蛋白转导与组织微环境诱导，其中体外诱导是采用不同刺激因子组合，将干细胞诱导分化为目的细胞。各实验室诱导分化条件各异，诱导分化机制尚不明确，诱导分化效率低，胰岛分泌能力仅为正常胰岛1％左右，且诱导过程复杂，诱导时间长，所得细胞数量少，功能低。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的上述问题，提供一种将间充质干细胞诱导分化成胰岛细胞的诱导方法及其应用，各成分均安全无毒性，诱导分化所需步骤少、时间短，诱导效率高。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案包括以下步骤：
[0007]1)间充质干细胞的分离，间充质干细胞可以来源于包括但不限于骨髓、脾源性胰腺干细胞、巢蛋白(nestin)阳性干细胞、神经源性胰腺干细胞、肝源性胰腺干细胞、肠源性胰腺干细胞等，通过常规方法均可以分离得到间充质干细胞。
[0008]2)配置诱导培养基：以高糖DMEM为基础培养基，添加尼克酰胺15
‑
20mmol/L、细胞生长因子150
‑
500pmol/L、GLP
‑
1 5
‑
15mg/L、β
‑‑
巯基乙醇0.05
‑
0.3mmol/L，最后加入10
‑
20％(V/V)的人血白蛋白以及0.5
‑
1％亚硒酸(V/V)，混匀，4℃保存备用。
[0009]所述的细胞生长因子可以为碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、肝细胞生长因子、角化细胞生长因子中的一种或多种。
[0010]3)体外诱导分化：将所述的间充质干细胞加入诱导培养基至于4
‑
6％CO2、94
‑
96％饱和湿度的36
‑
38
°
培养箱中培养，每3
‑
5X105个的细胞中加入3ml诱导培养基，悬浮培养。
[0011]4)每24h半量换液，培养4
‑
6天，得胰岛分泌细胞。
[0012]本专利技术的一种将间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的方法，具有以下优势：
[0013]1、无需基因转染，故无基因改变和癌症风险；
[0014]2、显著缩短周期：本专利技术的诱导培养基仅需要5天即可到达诱导峰值。
[0015]3、显著提高诱导细胞胰岛素分泌功能。
[0016]4、间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞后，移植后无排斥，无伦理问题，安全性高，具有广阔的临床应用前景。
具体实施方式
[0017]实施例1：配置诱导培养基
[0018]诱导培养基1：以高糖DMEM为基础培养基，添加尼克酰胺15mmol/L、碱性成纤维细胞生长因子150pmol/L、GLP
‑
1 5mg/L、β
‑‑
巯基乙醇0.05mmol/L，最后加入10％(V/V)的人血白蛋白以及0.5％亚硒酸(V/V)，混匀，4℃保存备用。
[0019]诱导培养基2：以高糖DMEM为基础培养基，添加尼克酰胺20mmol/L、碱性成纤维细胞生长因子500pmol/L、GLP
‑
1 15mg/L、β
‑‑
巯基乙醇0.3mmol/L，最后加入20％(V/V)的人血白蛋白以及1％亚硒酸(V/V，混匀，4℃保存备用。
[0020]对比例1
[0021]高糖DMEM基础培养基，通过商购即可获得，
[0022]对比例2
[0023]常规培养基1：高糖DMEM基础培养基+尼克酰胺15mmol/L+碱性成纤维细胞生长因子150pmol/L+GLP
‑
1 5mg/L+β
‑‑
巯基乙醇0.05mmol/L+10％(V/V)的人血白蛋白
[0024]对比例3
[0025]常规培养基2：高糖DMEM基础培养基+尼克酰胺15mmol/L+碱性成纤维细胞生长因子150pmol/L+GLP
‑
1 5mg/L+β
‑‑
巯基乙醇0.05mmol/L+0.5％亚硒酸(V/V)
[0026]对比例4
[0027]常规培养基3：高糖DMEM基础培养基+尼克酰胺15mmol/L+碱性成纤维细胞生长因子150pmol/L+GLP
‑
1 5mg/L+10％(V/V)的人血白蛋白+0.5％亚硒酸(V/V)
[0028]对比例5
[0029]常规培养基4：高糖DMEM基础培养基+尼克酰胺15mmol/L+碱性成纤维细胞生长因子150pmol/L+β
‑‑
巯基乙醇0.05mmol/L+10％(V/V)的人血白蛋白+0.5％亚硒酸(V/V)
[0030]对比例6
[0031]常规培养基5：高糖DMEM基础培养基+尼克酰胺15mmol/L+GLP
‑
1 5mg/L+β
‑‑
巯基乙醇0.05mmol/L+10％(V/V)的人血白蛋白+0.5％亚硒酸(V/V)
[0032]对比例7
[0033]常规培养基6：高糖DMEM基础培养基+碱性成纤维细胞生长因子150pmol/L+GLP
‑
1 5mg/L+β
‑‑
巯基乙醇0.05mmol/L+10％(V/V)的人血白蛋白+0.5％亚硒酸(V/V)
[0034]对比例8
[0035]常规培养基7：高糖DMEM基础培养基+尼克酰胺15mmol/L+碱性成纤维细胞生长因子150pmol/L+GLP
‑
1 5mg/L
[0036]实施例2：诱导分化。
[0037]诱导步骤：将人骨髓间充质干细胞加入诱导培养基至于4
‑
6％CO2、94
‑
96％饱和湿
度的36
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种将间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的诱导剂，其特征为，由以下组分组成：尼克酰胺、碱性成纤维细胞生长因子、GLP
‑
1、β
‑‑
巯基乙醇、人血白蛋白和亚硒酸。2.根据权利要求1所述的一种将间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的诱导剂，其特征在于，各组分的含量为尼克酰胺15
‑
20mmol/L、细胞生长因子150
‑
500pmol/L、GLP
‑
1 5
‑
15mg/L、β
‑‑
巯基乙醇0.05
‑
0.3mmol/L，10
‑
20％(V/V)的人血白蛋白以及0.5
‑
1％亚硒酸(V/V)。3.根据权利要求2所述的一种将间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的诱导剂，其特征在于，各组分的含量为尼克酰胺20mmol/L、细胞生长因子150pmol/L、GLP
‑
1 5mg/L、β
‑‑
巯基乙醇0.05mmol/L，10％(V/V)的人血白蛋白以及0.5％亚硒酸(V/V)。4.根据权利要求2所述的一种将间充质干细胞诱导分化为胰岛细胞的诱导剂，其特征在于，各组分的含量为尼克酰胺15mmol/L、细胞生长因子500p...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文东，杜文敬，
申请(专利权)人：广东华夏健康生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：