一种用于人月经血的保存液及其制备方法技术

本发明专利技术属于干细胞保存的生物技术领域，提供了一种用于人月经血的保存液及其制备方法。保存液的成分包括生理盐水、水蛭素、葡萄糖、羟乙基淀粉、左氧氟沙星、复合维生素、谷胱甘肽、坏死性凋亡抑制剂Necrostatin‑1/RIP1激酶抑制剂，其制备方法如下：1）制备A液：往生理盐水中分别加入葡萄糖、水蛭素以及左氧氟沙星；2）制备B液：往生理盐水中分别加入羟乙基淀粉、复合维生素以及谷胱甘肽；3）制备C液：将A液、B液混合之后加入坏死性凋亡抑制剂Necrostatin‑1/RIP1激酶抑制剂，用滤膜过滤后于4℃下保存备用，本发明专利技术的保存液能在48小时内维持宫内膜干细胞原有的生物学特性，细胞质量稳定，纯度高。

A preservation solution for human menstrual blood and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种用于人月经血的保存液及其制备方法
本专利技术属于干细胞保存的生物
，具体涉及一种人月经血保存液及其制备方法。
技术介绍
月经是由下丘脑、垂体和卵巢三者生殖激素之间的相互作用来调节的，在月经周期中的月经期和增殖期，血中雌二醇和孕酮水平很低，从而对腺垂体和下丘脑的负反馈作用减弱或消除，导致下丘脑对促进性腺激素释放激素的分泌增加，继而导致腺垂体分泌的卵泡刺激素和黄体生成素增多，因而使卵泡发育，雌激素分泌逐渐增多。此时，雌激素又刺激子宫内膜进入增殖期。黄体生成素使孕激素分泌增多，导致排卵。此期中雌激素与孕激素水平均升高。这对下丘脑和腺垂体产生负反馈抑制加强的作用，因而使排卵刺激素和黄体生成素水平下降，导致黄体退化，进而雌激素和孕激素水平降低。子宫内膜失去这二种激素的支持而剥落、出血，即发生月经。此时，雌激素和孕激素的减少，又开始了下一个月经周期。月经的成分主要是血液(3/4动脉血，1/4静脉血)，子宫内膜组织碎片和各种活性酶及生物因子，其中纤维蛋白溶解酶使月经血呈液态，不致凝固，前列腺素起收缩子宫的作用。月经血在离体情况下在短时间内迅速凝固；活力下降，这直接影响了月经血中的宫内膜干细胞的细胞质量。宫内膜干细胞的活力直接与月经血保存相关；月经血离体后凝结、经血中的激素等对细胞质量的影响；如何避免上述成为了首要解决的问题。此外，这些问题直接制约了月经血来源的宫内膜干细胞体外培养成功与否；因此，兹需开发一种月经血保存液，一方面满足抗凝、抑菌的作用，另一方面可满足月经血离体保存48h后仍能提取出数量充足、质量佳的宫内膜干细胞。现有技术中的月经保存液一般会添加青霉素、氨基酸、人血白蛋白等物质用于保存离体组织，但是由于其营养成分单一且成本较高、抗生素浓度大等原因，虽抗生素能降低染菌几率，但对胎盘干细胞存在一定的毒性，导致种子细胞在长期保存或运输中出现活力低下、甚至死亡等现象。随后人们为了进一步改善保存液的组成体系，以无机离子构成的缓冲液的基础上添加数种氨基酸和抗生素以维持离体细胞活性、降低染菌率。这些措施虽然在较长时间内很好的维持了种子细胞的活性，但保存液的成分复杂，配制需要经过称量、灭菌等步骤，操作过程繁琐，不能便携应用。因此为了适应临床应用需要，开发一种营养成分多元且方便配置的胎盘保存液成为了当务之急。
技术实现思路
针对以上问题，本专利技术的目的在于提供一种用于人月经血的保存液及其制备方法，提供一种能够很好的维持月经来源的宫内膜干细胞的活力，不引起细胞的功能性变异，现有技术中，白蛋白等常作为维持胎盘间充质干细胞的活力营养来源，本专利技术在此基础上进一步改进了保存液的离子缓冲体系和营养体系，同时优化制剂中的成分组成和改良运输条件，尽可能的维持细胞存活率，维持其生物特性。本专利技术的
技术实现思路
如下：本专利技术提供了一种用于人月经血的保存液，保存液的成分包括生理盐水、水蛭素、葡萄糖、羟乙基淀粉、左氧氟沙星、复合维生素、谷胱甘肽、坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制剂。进一步地，所述水蛭素的浓度为(1～5)×水蛭素，水蛭素是水蛭及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它是由65～66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽)，水蛭素对凝血酶由极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂；所述生理盐水为基础的缓冲溶液，从试剂公司购置，可保证保存液缓冲体系的稳定性，避免了人为配置所引起的质量差异；所述葡萄糖作为宫内膜干细胞的基础营养成分，能被细胞直接吸收利用，提高细胞的抵抗能力，维持了细胞的活性；所述羟乙基淀粉的浓度为1～5％，其能够维持保存液渗透压，使得宫内膜干细胞在一个等渗等压的环境下保存，为了胎盘间充质干细胞的活性；所述左氧氟沙星的浓度为(1～2)×左氧氟沙星，左氧氟沙星喹诺酮类药物中的一种，具有广谱抗菌作用，抗菌作用强，能够有效地抑制女性阴道各类型的菌群，对多数肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、沙门菌属、志贺菌属和流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、淋病奈瑟菌等革兰阴性菌有较强的抗菌活性；对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌等革兰阳性菌和肺炎支原体、肺炎衣原体也有抗菌作用；所述坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制剂的浓度为5～10ng/mL，坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制剂能直接一直细胞凋亡、保存细胞的生物特性，能全方位的提升细胞的存活率，维持细胞存活；所述复合维生素的浓度为1～5mg/mL；所述谷胱甘肽的浓度为1～5mg/mL，谷胱甘肽是一种强效抗氧化剂，存在身体的每一个细胞中，能够清除多余的自由基，达到抗氧化作用。本专利技术还提供了一种人月经血保存液的制备方法，包括如下步骤：1)制备A液：往生理盐水中分别加入葡萄糖、水蛭素以及左氧氟沙星即得A液；2)制备B液：往生理盐水中分别加入羟乙基淀粉、复合维生素以及谷胱甘肽即得B液，复合维生素和谷胱甘肽的联合使用能够全方位的提高细胞的抗氧化功能；3)制备C液：将A液、B液混合之后加入坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制剂即得C液，用滤膜过滤之后于4℃的环境温度下保存备用，低温保存月经血保存液，一方面可避免营养成分变性，另一方面保持种子细胞的生物活性。步骤3)所述的A液、B液混合的体积比为1:1，所述的滤膜的孔径大小为0.22μm。本专利技术的有益效果如下：本专利技术的用于人月经血的保存液以葡萄糖作为基础营养成分，生理盐水为缓冲溶液，还包含不同的抗凋亡制剂，能够增强细胞的抗逆性，合适的保存环境和营养供给能够很好地维持月经来源的宫内膜干细胞的活力，保证离体胎盘在保存液中长时间的维持存活率，不引起细胞的功能性变异，对离体月经起到抗凝、抑菌的作用，本专利技术的保存液对离体经血的保存时间达48小时，能在48小时内维持宫内膜干细胞原有的生物学特性，保持细胞的质量，解决了月经血离体保存的技术问题，同时分离出来的细胞并未出现分化，细胞质量稳定，纯度高，能大规模生产。本专利技术的保存液的制备步骤简便，能在短时间内配置大量，成本低廉、成分稳定、安全、无任何毒副作用。说明书附图图1为本专利技术的保存液用于月经血后提取宫内膜干细胞的对照组的流式鉴定图；图2为本专利技术的保存液用于月经血后提取宫内膜干细胞的样品组的流式鉴定图；图3为本专利技术的保存液用于月经血后提取宫内膜干细胞的细胞形态检测图。具体实施方式以下通过具体的实施案例以及附图说明对本专利技术作进一步详细的描述，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的保护范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定。若无特殊说明，本专利技术的所有原料和试剂均为常规市场的原料、试剂。实施例一种用于人月经血的保存液的制备方法：1)制备A液：往0.9％生理盐水中分别加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于人月经血的保存液，其特征在于，保存液的成分包括生理盐水、水蛭素、葡萄糖、羟乙基淀粉、左氧氟沙星、复合维生素、谷胱甘肽、坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于人月经血的保存液，其特征在于，保存液的成分包括生理盐水、水蛭素、葡萄糖、羟乙基淀粉、左氧氟沙星、复合维生素、谷胱甘肽、坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制剂。


2.由权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述水蛭素的浓度为（1~5）×水蛭素。


3.由权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述羟乙基淀粉的浓度为1~5%。


4.由权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述左氧氟沙星的浓度为（1~2）×左氧氟沙星。


5.由权利要求1所述的保存液，其特征在于，所述坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1/RIP1激酶抑制的浓度为5~10ng/mL。


6.由权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文东，宋云庆，黎波，卢瑞珊，
申请(专利权)人：广东华夏健康生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44