分泌抗人B型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株及应用制造技术

本发明专利技术提供一种分泌抗人B型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株，采用人B型红细胞为抗原免疫BALB/c小鼠，经免疫、细胞融合、筛选、克隆，获得能稳定传代并分泌抗人B血型单抗的杂交瘤细胞株为B1B3；所述杂交瘤细胞株分泌的抗人B型血型单克隆抗体类型为IgM型，能够与人B型红细胞发生凝集反应，与人A型、O型红细胞不发生凝集反应，将该细胞培养上清收集后浓缩，用人B型红细胞做试管凝集试验检测，浓缩液抗体效价可达1024，可以用于人类血型的检测。可以用于人类血型的检测。可以用于人类血型的检测。

【技术实现步骤摘要】
分泌抗人B型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株及应用


[0001]本专利技术公开一种分泌抗人B型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用，提供了一株新的能够分泌抗人B型血型的细胞株，属于人类血型检测


技术介绍

[0002]自Landsteinor（1900）发现ABO血型以来，血型鉴定试剂主要用人血清，存在着个体间差异较大、质量不稳定、成本高、需耗用大量人血等问题。多年来各国学者一直致力于寻找一种理想的试剂代替人血清，先后用鱼类、蜗牛、扁豆等动植物组织浆液进行研究，但由于种种问题未能普及推广应用。Voak（1980）和Sacks（1981）用淋巴细胞杂交技术先后建立了分泌抗A型、抗B型单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并将其用于ABO系统血型鉴定。如今，在世界各国，ABO血型单克隆抗体试剂已成为常规试剂，在我国抗A、抗B单克隆抗体血型试剂占所有临床应用的ABO血型试剂总量90%以上。我国是一个人口14亿的大国，对血型定型试剂需求量非常大，而目前市场上供应的血型定型试剂在质量上和数量上不能满足市场的需求。
[0003]目前市场上抗A抗B试剂生产用细胞株由于细胞培养上清分泌抗体盐水凝集效价达不到国家标准，为达到国家标准，在试剂中添加少量腹水，这样不仅会增加成本，并且腹水中杂抗体会对试剂结果产生干扰。因此，开发安全可靠、性价比高的抗A抗B单克隆抗体血型试剂具有较大的社会效益和经济效益。

技术实现思路

[0004]为检测人ABO血型，本专利技术的目的在于提供一种分泌抗人B型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株，本专利技术以人B型红细胞为抗原通过杂交瘤技术制备了一株分泌IgM型抗人B型血型单克隆抗体的杂交瘤细胞，将细胞培养上清浓缩后可作为人ABO血型检测试剂，应用于人ABO血型的检测中。
[0005]本专利技术的一个目的是提供一种分泌抗人B型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株B1B3：保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏日为2021年11月10日，保藏号为CCTCC NO：C202199。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供一种抗人B型血型单克隆抗体，所述抗人B型血型单克隆抗体由如上所述的分泌IgM型抗人B型血型单克隆抗体的杂交瘤细胞株分泌产生。
[0007]所述抗人B型血型单克隆抗体类型均为IgM型；所述抗人B血型抗体能够与人B型红细胞发生凝集反应，与人A型、O型红细胞不发生凝集反应。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种人ABO血型检测试剂，包括如上所述的抗人B型血型单克隆抗体。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供一种人ABO血型检测装置，包括如上所述的抗人B型血型单克隆抗体。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供一种人ABO血型检测方法，其特征在于，包括步骤将待
测样品与如上所述的抗人B型血型单克隆抗体接触，以确定待测样本ABO血型。
[0011]本专利技术的第六个目的是提供一种如上所述的抗人B型血型单克隆抗体在人ABO系统血型检测上的应用。
[0012]本专利技术积极效果在于：公开了一种分泌抗人B型血型的IgM型单抗的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。采用人B型红细胞为抗原免疫BALB/c小鼠，经免疫、细胞融合、筛选、克隆，获得能稳定传代并分泌抗人B血型单抗的杂交瘤细胞株为B1B3；所述杂交瘤细胞株分泌的抗人B型血型单克隆抗体类型为IgM型，能够与人B型红细胞发生凝集反应，与人A型、O型红细胞不发生凝集反应，将该细胞培养上清收集后浓缩，用人B型红细胞做试管凝集试验检测，浓缩液抗体效价可达1024，可以用于人类血型的检测。
[0013]上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚的了解本专利技术的技术手段，并可按照说明书的内容予以实施，以下用一些实例来详细说明。本专利技术的具体实施方式由以下实施例详细给出。
附图说明
[0014]图1. 抗人B型血型单克隆抗体试管凝集效价测定结果照片（数字表示对应试管中抗体的稀释倍数）；图2. 抗人B型血型单克隆抗体特异性鉴定结果照片；图3. 抗人B型血型单克隆抗体（B1B3）Ig亚类鉴定结果图片；图4. 抗人B型血型单克隆抗体杂交瘤细胞株（B1B3）染色体核型分析结果照片；图5. 抗人B型血型单克隆抗体杂交瘤细胞株（B1B3）传代稳定性分析结果图片。
具体实施方式
[0015]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0016]实施例1杂交瘤细胞的获得。
[0017]1. 免疫原的制备采集人B型抗凝全血。将全血2500rpm离心10min，弃去上清，压积红细胞用生理盐水洗涤3次，每次2500rpm离心5min，弃去上清；将压积红细胞用生理盐水配制成30%红细胞悬液，备用；2. 动物免疫与试血（1）用免疫原免疫4周龄，体重约20g的BALB/c小鼠，免疫原剂量为500
µ
l/只，腹腔注射；（2）每间隔一周免疫一次；（3）三次免疫后，尾静脉加强免疫，抗原剂量为100
µ
l/只小鼠，3天后眼眶静脉采血100μL/只，3500rpm离心15min，分离血清，进行血清效价检测；小鼠血清试管凝集效价大于256进行细胞融合试验；
3. 细胞融合（1）融合前5
‑
7天，对NS
‑
1细胞进行扩大培养，调整细胞状态，使其达到对数生长期，细胞活率在95％以上。将对数生长期的NS
‑
1细胞从培养箱中取出，轻轻晃动细胞，收集细胞悬液于50mL离心管，1000rpm离心10min，弃上清，再用10mL 1640培养液重悬细胞，备用；（2）提取试血合格的BALB/c小鼠脾脏细胞按1:5~1:8的比例混匀，1000rpm离心15min，弃上清液；（3）使用50％的PEG4000作为融合剂进行融合，融合2min，加入50mL1640培养液终止反应，800rpm离心5min，弃上清液；（4）细胞沉淀用HAT培养液重悬，将细胞均匀加入96孔培养板中，置于37℃、5％CO2培养箱内培养；4 .杂交瘤细胞的筛选及克隆（1）制备A、B、O血型红细胞悬液分别采集人A型、B型、O型抗凝全血。将全血2500rpm离心10min，弃去上清，压积红细胞用生理盐水洗涤3次，每次2500rpm离心5min，弃去上清。将压积红细胞用生理盐水配制成2%红细胞悬液，备用； （2）筛选及克隆化
①ꢀ
融合细胞在培养箱培养5~7天后，细胞克隆约上百个细胞进行筛选；
②
取杂交瘤细胞上清液至96孔板中，180
µ
l/孔。将待测样本各取50μl分别加到U型板中，每个待测样本加3个孔。将2%A型、B型、O型红细胞悬液分别加到待测样本的3个孔中，50μl/孔。用板式振荡器将加完抗体和细胞的U型板混匀，300g离心30s，再用板式振荡器震荡，观察是否有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IgM型单抗的杂交瘤细胞株，其特征在于：命名为：杂交瘤细胞株B1B3；保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日为2021年11月10日，保藏号为CCTCC NO：C202199。2.如权利要求1所述的一种IgM型单抗的杂交瘤细胞株B1B3在制备人B型血型抗原检测试剂中的用途。3.一种抗人B型血型抗原的单克隆抗体，其特征在于：所述抗人B型血型抗原的单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株B1B3分泌产生。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈维佳，冷向武，何海婷，王常敏，李旭媛，李勇，李志刚，
申请(专利权)人：长春博迅生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：