吸附miR-141-3p的四氧化三铁纳米粒子及应用制造技术

本发明专利技术的目的在于提供吸附miR

【技术实现步骤摘要】
吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子及应用


[0001]本专利技术属于纳米生物
，涉及吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子及应用。

技术介绍

[0002]microRNA(miRNA)是一类单链内源性RNA，长约18
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24个核苷酸，不编码蛋白，但可通过与靶基因mRNA的3'端非编码区(3'
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untranslated region,3'
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UTR)互补结合，降低靶mRNA的稳定性或抑制其翻译，参与基因转录后水平的调控，在细胞分化、增殖、凋亡和肿瘤等多种生物学过程中发挥调节作用。
[0003]血清微小RNA
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3p(miR
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3p)是一种成熟的miRNA，miR
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3p是miR
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200家族的成员之一，在前列腺癌、结直肠癌和膀胱癌等肿瘤组织中呈下调趋势，且其发挥抑癌作用。关于miR
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3p的其他作用也在进一步研究中。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子及应用。吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子是通过四氧化三铁纳米粒级别的材料包裹吸附miR
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3p，通过作用于视神经钳夹致视网膜损伤部位进行释放miR
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3p，对miR
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3p的表达进行影响，从而对视神经钳夹致视网膜损伤进行相关的治疗作用。
[0005]为了实现本专利技术的目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0006]本专利技术提供了吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子的制备方法，包括：
[0007]向四氧化三铁纳米粒子加入NHS与EDC.HCl，室温下活化1h，超纯水环境下透析24h，以除去未反应的NHS与EDC.HCl，透析完成后收集液体加入叶酸，充分搅拌混匀，室温下孵育过夜，再次透析24h，除去未反应的叶酸。收集液体加入miR
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3p混匀，4℃上下翻转孵育过夜，即得到修饰叶酸与吸附miR
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3p的纳米粒子。
[0008]优选地，采用5000D透析袋透析24h，每隔4h换液一次。
[0009]本专利技术还提供了上述制备方法制备得到的吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子。
[0010]优选地，所述四氧化三铁纳米粒子最大能吸附自身质量4倍的miR
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3p。
[0011]本专利技术又提供了上述吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子在制备治疗视网膜损伤的药物中的应用。
[0012]优选地，所述应用包括把吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子注射到视网膜损伤部位作用14天。
[0013]优选地，还包括构建视神经钳夹致大鼠视网膜损伤模型。
[0014]更优选地，模型构建包括：
[0015]a.麻醉：大鼠采用3％戊巴比妥钠以3ml/kg剂量麻醉后，术眼朝向操作者，利多卡因滴眼，接触眼睑大鼠无反应后进行后续操作；
[0016]b.暴露视神经：以内眦为9点钟方向，外眦为3点钟方向，从术眼的3
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6点方向剪开结膜，向内分离，找到白色的视神经；
[0017]c.视神经钳夹：采用有齿纤维止血钳，精准钳夹大鼠视神经球后0.5cm位
[0018]置15s，钳夹强度为将止血钳卡扣卡到最大；
[0019]d.结束钳夹后采用8
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0带线缝合针缝合结膜，术眼涂红霉素软膏，术后3天每天一次；
[0020]e.术后14天取眼球置于10％多聚甲醛中保存，用于石蜡切片和HE染色，模型视网膜结构紊乱，出现波浪状，外核层增厚，说明模型成功。
[0021]本专利技术的有益效果在于：
[0022]制备了吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子，构建了视神经钳夹致大鼠视网膜损伤模型，进而证实可以将四氧化三铁纳米粒子吸附miR
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3p应用于治疗视神经钳夹致视网膜损伤。
附图说明
[0023]图1是本专利技术实施例中纳米粒子(PEI@Fe3O4)以及叶酸修饰与miR
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3p吸附后的透射电镜表征结果。
[0024]图2是本专利技术实施例中纳米粒子(PEI@Fe3O4)以及叶酸修饰与miR
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3p吸附后的粒径和Zeta电位结果。
[0025]图3是本专利技术实施例中四氧化三铁纳米粒子吸附miR
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3p的凝胶电泳结果，图中1
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10分别对应的质量比为：0:1、0.05:1、0.1:1、0.2:1、0.25:1、0.5:1、1:1、1.5:1、2:1、2.5:1。
[0026]图4是本专利技术实施例中暴露视神经的示意图。
[0027]图5是本专利技术模型验证的HE染色结果。
[0028]图6是本专利技术四氧化三铁纳米粒子吸附miR
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3p注射到视网膜损伤部位的HE染色结果。
具体实施方式
[0029]为了更清楚地说明本专利技术，下面结合实施例并对照附图对本专利技术作进一步详细说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。
[0030]实施例
[0031]一、制备吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子(一)材料(货号，厂家)：四氧化三铁纳米粒子(PEI@Fe3O4)(北京中科雷鸣)；miR
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3p(通用生物合成)；叶酸(IF0180索莱宝)；异硫氰酸荧光素酯(FITC)(IF8070索莱宝)；EDC.HCl(N808856麦克林)；NHS(N811124麦克林)。(二)使用仪器(型号，厂家)：磁力搅拌；5000D透析袋；Zetasizer Pro(Malvern Panalytical)；透射电镜((JEM
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1230(80KV)，JE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子的制备方法，包括：向四氧化三铁纳米粒子加入NHS与EDC.HCl，室温下活化1h，超纯水环境下透析24h，以除去未反应的NHS与EDC.HCl，透析完成后收集液体加入叶酸，充分搅拌混匀，室温下孵育过夜，再次透析24h，除去未反应的叶酸，收集液体加入miR
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3p混匀，4℃上下翻转孵育过夜，即得到修饰叶酸与吸附miR
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3p的纳米粒子。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用5000D透析袋透析24h，每隔4h换液一次。3.权利要求1或2所述的制备方法制备得到的吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子。4.根据权利要求3所述的吸附miR
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3p的四氧化三铁纳米粒子，其特征在于，所述四氧化三铁纳米粒子最大能吸附自身质量4倍的miR
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3p。5.权利要求3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：江斌，熊忠贤，
申请(专利权)人：江西中洪博元生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：