用于评估接触系统激活的含有蛋白酶抑制剂的真空采血管技术方案

本文公开了包含液体形式的蛋白酶抑制剂混合物的真空采血管和其用于评估与受试者的接触系统相关的特征的用途，所述特征包括接触系统激活的内源水平、治疗期间靶向接触系统的组分的药物的内源水平和/或这样的药物的免疫原性。原性。原性。

【技术实现步骤摘要】
用于评估接触系统激活的含有蛋白酶抑制剂的真空采血管
[0001]本申请为申请号为2016800472546、申请日为2016年8月12日、专利技术名称为“用于评估接触系统激活的含有蛋白酶抑制剂的真空采血管”的中国专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2015年8月13日提交的美国临时申请号62/204,644和2015年9月4日提交的美国临时申请号62/214,308的申请日的益处。这些引用的申请各自的全部内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0004]由于采血过程中离体激活的倾向，使用患者血浆精确测量接触系统激活(contact system activation)的体内水平面临着挑战。来自患有与接触系统相关的某些疾病(例如，遗传性血管性水肿)的患者的血液尤其倾向于离体接触系统激活，因为其缺乏该途径的天然抑制剂——C1抑制剂。因此，测量途径特异性生物标志物(例如，2
‑
链高分子量激肽原)可能高估了患者中存在的接触系统激活的程度，除非血液被小心收集和加工。

技术实现思路

[0005]本公开至少部分基于非玻璃真空采血管的开发，所述非玻璃真空采血管含有液体制剂中的蛋白酶抑制剂混合物(mixture)(混合物(cocktail))，其在采血过程中预防接触系统的离体激活。因此，本文所述的真空采血管允许精确测量患者(尤其缺乏该途径的天然抑制剂(例如，C1抑制剂)那些患者)的接触系统激活的内源水平。
[0006]因此，本公开的一个方面描述了一种真空采血管，其包含含有蛋白酶抑制剂的混合物的液体制剂，所述液体制剂可基本上不含在水溶液中不稳定的蛋白酶抑制剂。所述管可以是非玻璃管。在一些实施方式中，所述管是塑料的。在一些实施方式中，真空采血管包含0.5ml的本文所述的任何液体制剂，其可在使用时被稀释10倍。
[0007]在一些实施方式中，本文所述的真空采血管中的蛋白酶抑制剂的混合物包含至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂(例如，血浆激肽释放酶抑制剂)和至少一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂。在一个实施例中，蛋白酶抑制剂的混合物包含EPI
‑
KAL2(其可以是生物素化的)和亮抑酶肽。EPI
‑
KAL2的含量的范围可以是包含其的液体制剂中5至15μM。可选地或另外，液体制剂中亮抑酶肽的量的范围可以是200至300μM。
[0008]在一些实施方式中，本文所述的蛋白酶抑制剂的混合物可包含至少两种丝氨酸蛋白酶抑制剂，所述两种丝氨酸蛋白酶抑制剂中的至少一种是胰蛋白酶抑制剂，例如，大豆胰蛋白酶抑制剂。在一些实施例中，蛋白酶抑制剂的混合物包含苄脒、大豆胰蛋白酶抑制剂、亮抑酶肽和AEBSF。在一些实施例中，真空采血管中的液体制剂可包含80
‑
120mM苄脒、1
‑
3mg/ml大豆胰蛋白酶抑制剂、200
‑
300μM亮抑酶肽和/或10
‑
30mM AEBSF。
[0009]本文所述的任何真空采血管中的液体制剂可进一步包含聚凝胺和EDTA。在一些实施方式中，本文所述的任何液体制剂的pH可为4
‑
6(例如，4.5)。
[0010]在另一方面中，本公开提供了用于评估受试者的接触系统激活的内源水平的方
法。该方法包括：(i)将受试者的血液采集至本文所述的任何真空采血管中；(ii)加工血液以产生血浆样品；和(iii)测量血浆样品中接触系统激活的水平。在一些实施方式中，测量步骤(步骤(iii))可通过测量指示接触系统激活的一种或多种生物标志物的水平来进行。这类生物标志物可包括前激肽释放酶、活性血浆激肽释放酶(pKal)、α2M
‑
pKal复合物、活性因子XII、活性因子XI、高分子量激肽原(HMWK)和/或缓激肽代谢物。在一个实施例中，一种或多种生物标志物包括切割的HMWK和/或完整的HMWK。
[0011]在仍另一方面中，本公开提供了用于评估靶向接触系统的药物在受试者中的水平的方法。该方法包括：(i)将受试者的血液采集至如本文所描述的真空采血管中，其中所述受试者被施用靶向接触系统的组分的药物；(ii)加工血液以产生血浆样品；和(iii)测量血浆样品中药物的水平。
[0012]此外，本公开提供了用于评估靶向接触系统的药物的免疫原性的方法，该方法包括：(i)将受试者的血液采集至如本文所描述的真空采血管中，其中所述受试者被施用靶向接触系统的组分的药物；(ii)加工血液以产生血浆样品；和(iii)测量血浆样品中结合至药物的抗体的水平。这样的方法可进一步包括：在步骤(iii)之前，从血浆样品分离结合药物的抗体。在一些实施例中，可通过固相萃取和酸解离(SPEAD)测定分离抗药物抗体(ADA)。
[0013]在本文所述的任何方法中，所述受试者可以是人患者，在一些情况下，可用靶向接触系统的组分(例如，血浆激肽释放酶)的药物，例如特异性靶向血浆激肽释放酶(例如，活性形式的血浆激肽释放酶)的药物(例如，抗体)治疗所述人患者。在一些实施例中，血液来自患有与接触系统相关的疾病(例如，遗传性血管性水肿(HAE)或特发性血管性水肿)的人患者。在一些情况下，人患者患有具有正常C1
‑
抑制剂(C1
‑
INH)的HAE。
[0014]在本文所述的任何方法中，真空采血管可以不是装有来自受试者的血液的第一管。可选地或另外，处理步骤[步骤(ii)]可在血液收集步骤[步骤(i)]之后一小时内进行。
[0015]在下面的说明书中阐释本专利技术的一个或多个实施方式的细节。通过下述附图和对若干实施方式的详细说明以及通过所附的权利要求书，本专利技术的其他特征或优势将是显而易见的。
附图说明
[0016]下述附图形成本说明书的一部分并且被包括，以进一步阐释本公开的某些方面，通过参考这些附图的一幅或多幅结合本文呈现的具体实施方式的详细说明，本公开将被更好地理解。
[0017]图1是照片，显示SCAT169和SCAT153管防止接触激活，如在2
‑
链蛋白质印迹测定中所测量的。当将10％鞣花酸添加至血浆时，接触系统被激活，导致1
‑
链HMWK转变成2
‑
链HMWK(见柠檬酸钠血浆)。相比之下，在添加鞣花酸之前和之后，SCAT169和SCAT153血浆包含相同量的1
‑
链HMWK。
[0018]图2是显示激肽原切割的变化(2
‑
HMWK/cHMWK百分数)的图表，其是基于从健康受试者进行的血浆样品采集方法。显示了采集的临床部位以及用于采集的管的类型，包括K2EDTA(EDTA)、柠檬酸钠、SCAT169或P100。数据点的分组从左向右对应于部位1：EDTA；部位2：柠檬酸盐；部位3：柠檬酸盐；部位4：柠檬酸盐；部位1：SCAT169；部位2：SCAT169；部位4：SCAT169；部位5：SCAT169；和部位4：P100。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种真空采血管，其包含含有蛋白酶抑制剂的混合物的液体制剂。2.如权利要求1所述的真空采血管，其中所述管是非玻璃管。3.如权利要求2所述的真空采血管，其中所述管是塑料管。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的真空采血管，其中所述蛋白酶抑制剂的混合物包含至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂和至少一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂。5.如权利要求4所述的真空采血管，其中所述至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂包括血浆激肽释放酶抑制剂。6.如权利要求5所述的真空采血管，其中所述蛋白酶抑制剂的混合物包含EPI
‑
KAL2和亮抑酶肽。7.如权利要求6所述的真空采血管，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：