海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法技术

本发明专利技术公开了一种海产品中异尖线虫的酶联免疫检测方法，该方法分离纯化异尖属幼虫的虫体抗原，利用生物免疫技术制备特异性多克隆抗体；以９６孔聚苯乙烯板为固相载体，事先以相应的完全抗原进行包被、载体蛋白进行封闭；检测时同时以不含有待测物的提取液为阴性对照，以异尖线虫抗原的标准液建立标准曲线；利用常规间接竞争酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）检测样品的吸光值并计算相应的抑制率，进而根据标准曲线测定样本中待测物（以虫体抗原计）的浓度。本发明专利技术灵敏度高、准确性好；操作简便快速，有效缩短了分析时间，可应用于鱼类等海产品中异尖线虫的快速筛选检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测海产品中致病性寄生虫的检测方法，具体地说是涉及一种检测异尖线虫的酶联免疫检测方法。本专利技术由国家863项目(No.2007AA091806)以及现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-50-G09)资助完成。
技术介绍
异尖线虫(anisakid larvae)为蛔目异尖科线虫，是目前海产品中对人体危害性最大的一类寄生虫，其致病性三期幼虫主要寄生于海栖鱼类，目前致病性较强、分布较为广泛的主要是异尖属线虫和伪新地蛔线属线虫。随着海产品生食方式的逐渐兴起，今后该寄生虫极有可能成为影响我国海产品食用安全性的重要危害因素之一。目前对于海产品中异尖线虫的检测主要有灯检法和酶消化法，前者漏检率较高，而且无法准确定性，后者则存在着检测时间长，操作繁琐问题。因此研究一种准确灵敏而又更为简便快速的检测方法具有较高的学术价值和应用前景。
技术实现思路
针对传统检测方法存在的问题，本专利技术的目的在于提供提供一种样品前处理简单，而且简便、快速、灵敏、准确、经济的海产品中异尖线虫检测方法。本专利技术的目的通过以下步骤实现(1) 从海产鱼类体内收集异尖线虫属三期幼虫，经分离纯化后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用免疫试剂盒检测海产品中异尖线虫的方法，其特征在于包括以下步骤：　（１）从海产鱼类中采集分离异尖线虫并制备虫体抗原；　（２）利用生物免疫技术制备并纯化异尖线虫的特异性抗体；　（３）以虫体抗原包被９６孔酶标板并进行封闭 处理；　（４）对待测样本中的异尖线虫进行分离提取；　（５）将工作浓度的抗体溶液与样品提取液同时加入９６孔板中，按照常规间接竞争酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）的步骤和方法进行反应，最终利用酶标仪测定ＯＤ４５０值；　（６）同时以不含有 待测物的提取液代替样品液，同样条件下反应后作为阴性对照；以系列浓度的虫体抗原标准液代...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹立民，许旭，林洪，隋建新，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]