一种检测异尖线虫病的免疫层析试条，包括一个样品垫和一个纤维素膜，样品垫和纤维素膜之间设置有一个含有胶体金标记探针的金标垫，金标垫、样品垫分别和一个纤维素膜紧密连接，在纤维素膜的远离金标垫的一端设置有一个吸水垫，吸水垫和纤维素膜紧密连接，纤维素膜上远离金标垫的一端设置有一个质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置一个检测线，检测线有异尖线虫病的天然抗原组成，质控线由特异性结合胶体金标记探针的抗体组成。本发明专利技术还提供了上述试纸条的制备方法，本发明专利技术的免疫层析试纸条具有简便性、敏感性、特异性和快速性的优点，适于临床和现场使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学领域，尤其涉及寄生虫疾病的检测技术，特别是。
技术介绍
异尖线虫病(anisakiasis)，是人食用生的或未煮熟的含异尖线虫III期幼虫的海鱼所导致的一种食源性寄生虫病。主要致病的虫种为简单异尖线虫(Anisakis simplex)和派氏异尖线虫(Anisakis pegreffii)。异尖线虫的成虫和幼虫形态不同,海鱼为异尖线虫III期幼虫的第二中间宿主，故食用了含异尖线虫III期幼虫的生海鱼，可导致异尖线虫病。20世纪60年代首次报道人异尖线虫病以来，已在全球五大洲均有病例报告，其中大多数病例是来自日本、西班牙等有食生鱼习惯的国家。日本每年有2000例异尖线虫 病报道，美国每年报道50例，欧洲每年报告500例。我国已于1993年将水生动物异尖线虫病列入了《中华人民共和国禁止进境的动物传染病、寄生虫病名录》。根据阮廷清对1982-2006年我国海鱼异尖线虫专项调查报告的数据进行统计分析显示，海鱼类总的感染率为47. 10%，在沿海省市(如辽宁、河北、山东、上海、浙江、福建、广东、海南等)和岛屿均有调查和发现异尖线虫。且已从緬甸进口的带鱼、从印度尼西亚、加拿大和泰国进口的11种海鱼中发现了异尖线虫III期幼虫。随着人们生食海鱼习惯的流行，异尖线虫病会有逐年增加的趋势。目前临床上确诊异尖线虫病的主要方法仍是通过纤维内窥镜检查在胃内是否存在虫体。在临床上对呕吐、恶心、上腹部疼痛等不典型的异尖线虫病症状的确诊存在困难。故提高现有的检测水平，研制合适的检测异尖线虫病的方法十分必要。对异尖线虫病诊断方法有病原学方法、分子生物学方法和免疫学方法。形态学上只能鉴定幼虫分型，即异尖线虫I型幼虫和异尖线虫II型幼虫.且若虫体有损坏或者缺少关键鉴定特征，则形态学上就很难区分虫种。分子生物学方面即利用等位酶分析、线粒体DNAcox2基因、核糖体RNA基因序列、核糖体DNA基因序列、多重PCR分析来鉴定虫种，虽说其精确性较高，但其花费大、检查时间长、技术专业性等因素限制了其广泛使用，且不适合在需要快速准确鉴定虫种的现场调查中使用。免疫学方法在异尖线虫病诊断上的应用越来越受到重视，最有效的免疫学诊断方法是应用纯化天然抗原或重组抗原检测异尖线虫病人特异性IgE抗体，常用的方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫印迹法(Western blot)。但这些方法费时费力、或对仪器设备及操作人员要求较高、或不适合于快速检测、或交叉反应严重。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种检测异尖线虫病的免疫层析试纸条及其制备方法，所述的这种检测异尖线虫病的免疫层析试纸条及其制备方法要解决现有技术中检测异尖线虫病的方法费时、费力，可靠性低的技术问题。本专利技术提供了一种用免疫学方法检测异尖线虫病的试剂，包括(1)异尖线虫病的天然抗原，(2)抗人或抗哺乳动物IgG的探针；其中，异尖线虫病天然抗原按如下方法制备将活的异尖线虫III期幼虫，用生理盐水洗净后，用滤纸吸取虫体水分，倒入玻璃匀浆器中加入缓冲液后手动搅碎，反复冻融，冰浴超声粉碎后，0-6°C离心，取上清即为异尖线虫病天然抗原。其中，抗人或抗哺乳动物IgG探针是利用人或哺乳动物IgG免疫鼠、兔、羊或者其他动物获得多抗或单克隆抗体。进一步的，所述的抗人或抗哺乳动物IgG探针还可以是金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)、或者链球菌G蛋白(SPG)、或者是标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)、或者标记的链球菌G蛋白(SPG)。 具体的，所述的标记为胶体金、染料或者乳胶。本专利技术还提供了一种检测异尖线虫病的免疫层析试纸条，包括一个样品垫和一个纤维素膜，所述的样品垫和所述的纤维素膜之间设置有一个含有胶体金标记探针的金标垫，所述的金标垫、所述的样品垫分别和一个纤维素膜紧密连接，在所述的纤维素膜的远离金标垫的一端设置有一个吸水垫，所述的吸水垫和所述的纤维素膜紧密连接，所述纤维素膜上远离金标垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置一条检测线，所述的检测线有异尖线虫病的天然抗原组成，所述的质控线由特异性结合胶体金标记探针的抗体组成。进一步的，所述的胶体金标记探针为利用人或哺乳动物IgG免疫鼠、兔、羊或者其他动物获得的多抗或单克隆抗体。进一步的，所述标记探针为金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA),或者链球菌G蛋白(SPG)；进一步的，所述的质控线中的抗体为鸡抗SPG的IgY抗体。在一个优选方案中，所述的异尖线虫病的天然抗原为异尖线虫III期幼虫提取的粗抗原，其蛋白浓度为f 10mg/mL，喷涂量为10 μ L/cm2 ;胶体金标记探针浓度(以蛋白浓度计)1 5mg/15 20mL ;鸡抗SPG的IgY抗体溶液浓度为O. I 5mg/mL，喷涂量为10 μ L/cm2。所述支持检测线和质控线的纤维素膜为硝酸纤维素膜(NC膜)或醋酸纤维素膜；所述支持胶体金标记抗体的金标垫为玻璃纤维膜或聚脂膜；所述样品垫可以是滤血膜样品垫，所述的滤血膜是棉籽绒和纤维素的混合物或者玻璃纤维和纤维素的混合物，适合于全血样品；所述样品垫也可以是玻璃纤维或吸水纸样品垫，适合于血清样品；所述吸水垫由吸水材料制备，如吸水纸。所述的纤维素膜的宽度为2. 5 3. Omm ;吸水垫宽度为2(T40mm,厚度为O. I "O. 2mm ；金标垫的宽度为5 IOmm;样品垫宽度为2(T40mm。具体的，所述免疫层析试纸条背面设置一个起支撑作用的背板，背板材料的选择是多种多样的，可以是为塑料板，如聚氯乙烯板(PVC)等。本专利技术的一个优选的方案是将所述带有背板的免疫层析试纸条装入一个检测盒体中，所述的检测盒体的对应于滤血膜样品垫的部位设有检测孔，对应于检测线和质控线的部位设有观测窗。检测样品时将全血或血清加入检测孔中。本专利技术还提供了一种制备上述检测异尖线虫病的免疫层析纸条的方法，包括以下步骤(I)制备异尖线虫的天然抗原，将将来源于异尖线虫III期幼虫提取的粗抗原蛋白浓度调整到f 10mg/mL ;制备胶体金标记探针，将I飞mg以链球菌G蛋白(SPG)为抗原免疫动物获得的抗体加入IOOmL胶体金溶液，离心去沉淀，复溶到15 20mL ；(2)制备与胶体金标记探针特异结合的抗体，将溶液浓度调整到O. r5mg/mL ；(3)将异尖线虫的天然抗原溶液喷到所述纤维素膜上形成检测线，将能与胶体金标记探针特征结合的抗体溶液喷到所述纤维素膜的另一区域形成质控线；(4)将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入胶体金标记探针溶液，制备金标垫；(5)将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离检测线的一端，将金标垫的一端粘贴在纤维素膜的靠近检测线的一端，将样品垫粘贴于金标垫的另外一端，得到异尖线虫病的免疫层析试纸条。 在一个优选的方案中，上述纤维素膜在喷有检测线、质控线后，在30_40°C下干燥O. 5^2小时，再粘贴吸水垫。在一个优选的方案中，为使胶体金标记探针溶液与玻璃纤维膜或聚脂膜更好地结合，可向胶体金标记探针溶液中添加29TlO%的蔗糖；为使金标垫更易于纤维素膜粘贴，可将金标垫在30-40°C下干燥O. 5小时，再与纤维素膜粘贴。异尖线虫病患者体内血液中含有能特异性结合所感染的异尖线虫III期幼虫抗原的抗异尖线虫III期幼虫的抗体，通过检测受试者体内血液中是否含有抗异尖本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用免疫学方法检测异尖线虫病的试剂，其特征在于：包括以下组份：（1）异尖线虫病的天然抗原（2）抗人或抗哺乳动物IgG的探针；其中，异尖线虫病的天然抗原按如下方法制备：将活的异尖线虫Ⅲ期幼虫，用生理盐水洗净后，用滤纸吸取虫体水分，倒入匀浆器中加入缓冲液后搅碎，反复冻融，冰浴超声粉碎后，0？6℃离心，取上清即为异尖线虫病天然抗原。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周洋，陈家旭，石锋，蔡玉春，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，
类型：发明
国别省市：
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