【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
海产品中简单异尖线虫的TaqMan?PCR检测法,具体测定步骤如下:(a)用定量标准品制备标准样本,即将定量标准品以一定拷贝数浓度梯度规律制作为成系列工作浓度的标准样本;(b)用DNA提取试剂盒从待测标本中提取总DNA作为待测样本;(c)取(a)步所得各工作浓度标准样本为阳性模板和待测样本为目标模板分别加入到各自包含PCR反应体系的试管中,同步进行荧光定量PCR检测;(d)对各工作浓度标准样本测定出的Ct值与浓度对数值,即log[阳性模板拷贝数浓度]作出标准曲线,将待测样品测出的Ct值从标准曲线中找出log[目标模板拷贝数浓度]值,求出其反对数,即为简单异尖线虫细胞核糖体DNA拷贝浓度;其特征是:其中荧光定量PCR反应体系为2×Premix?Ex?Taq?10μl、无菌双蒸水6.8μl、10μM上游引物0.4μl、10μM下游引物0.4μl、5μM?TaqMan探针0.4μl、模板2.0μl,反应总体积20μl,其中模板即为(c)步中加入的阳性模板或目标模板;所说上游引物、下游引物和定量标准品分别根据简单异尖线虫细胞核糖体DNA内转录间隔区基因不同片段设计合成;所说PCR检测时,其荧光 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:王建跃,王爱萍,王忠发,张均和,
申请(专利权)人:舟山市疾病预防控制中心,
类型:发明
国别省市:
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