生物标志物组合物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了生物标志物组合物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用，生物标志物组合物包含膜联蛋白Annexin A1、膜结合的II型C

【技术实现步骤摘要】
生物标志物组合物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用


[0001]本专利技术属于医学诊断领域，具体涉及生物标志物组合物及其在制备评价机体免疫功能的产品中的应用。

技术介绍

[0002]目前，对于评价机体免疫功能的应用方案为检测各项免疫细胞亚群在外周血中的数量比例，比如CD3
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T细胞、CD4
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T细胞、NK细胞、巨噬细胞等的比例，来判断免疫系统是否活跃。特殊的应用是针对特定肿瘤或者HIV感染等，通过检测抗原特异性的CD8
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T细胞(靶向特定病毒或肿瘤的)数量来进行检查。
[0003]但是，这些检测并不是直接针对CD8
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T细胞在发挥效应过程中直接相关的各项指标，因此，检测结果存在不精确的缺陷，无法综合评价机体的免疫功能。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是克服现有技术中生物标志物无法综合评价机体免疫功能的缺陷。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种生物标志物组合物，所述生物标志物组合物包含膜联蛋白Annexin A1、膜结合的II型C
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凝集素受体分化抗原簇CD69和白介素2受体α链CD25、细胞因子IFNγ中的任意两种或者任意两种以上的组合。
[0006]较佳地，所述生物标志物组合物包含膜联蛋白Annexin A1、膜结合的II型C
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凝集素受体分化簇CD69和白介素2受体α链CD25、细胞因子IFNγ。
[0007]本专利技术还提供了一种如上所述的生物标志物组合物用于评价机体免疫功能的产品中的应用。
[0008]较佳地，所述产品包含评价机体免疫功能的生物标志物组合物检测试剂盒，该试剂盒包含检测所述生物标志物组合物的试剂。
[0009]较佳地，所述试剂包含用于检测所述Annexin A1蛋白表达水平的第一试剂，用于检测所述CD69和CD25蛋白表达水平的第二试剂，用于检测所述IFNγ的分泌水平的第三试剂。
[0010]较佳地，所述评价机体免疫功能的方法包含以下步骤：S1，提取外周血样本中单核细胞，分离其中的CD8
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T细胞；S2，体外激活并培养所述CD8
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T细胞；S3，分别使用所述第一试剂检测Annexin A1的蛋白表达水平、使用所述第二试剂检测CD69、CD25的蛋白表达水平以及使用所述第三试剂检测IFNγ的分泌水平，对得到的检测数据构建评分体系，根据评分体系对免疫功能进行综合性评价。
[0011]较佳地，S3中，检测之前还包含使用染色抗体混合物A对Annexin A1进行染色、使用染色抗体混合物B对CD69和CD25进行染色、使用染色抗体混合物C对IFNγ进行染色；其中，所述染色抗体混合物A包含DAPI、抗人CD3抗体、抗人CD8抗体、抗人Annexin A1抗体；所述染色抗体混合物B包含DAPI、抗人CD3抗体、抗人CD8抗体、抗人CD69抗体、抗人CD25抗体；
所述染色抗体混合物C包含live/dead blue、抗人CD3抗体、抗人CD8抗体。
[0012]较佳地，S3中，所述综合性评价包含：以Annexin A1的蛋白表达水平与年龄进行线性拟合，当实际检测的Annexin A1的蛋白表达水平大于等于线性拟合计算所得数值的60％时，判定免疫细胞功能存在异常；当CD69与CD25的表达峰值小于103时，判定细胞活化功能受损失调；当分泌IFNγ的细胞亚群小于10％时，判定细胞在体外无法被有效激活。
[0013]较佳地，所述机体包括但不限于健康人、感染病人、癌症病人。
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015](1)生物标志物Annexin A1在正常人群内其表达水平随着年龄增长而升高，其表达水平与T细胞状态与免疫功能密切相关，能够更加独特、深入地评价受检者免疫系统状态；生物标志物CD69、CD25为T细胞活化的特异性标志物，其表达水平在特定时间点随着细胞受到激活后的活化强度的增强而增加；生物标志物IFNγ是由CD8
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杀伤性T细胞分泌的效应性细胞因子，在维持组织稳态、介导炎症反应以及肿瘤免疫监视中具有重要作用。当受检者实际检测的Annexin A1的蛋白表达水平大于等于60％，提示其免疫细胞功能存在异常；当受检者的CD69、CD25的表达峰值均小于103，提示CD8
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T细胞在体外刺激条件下不能被有效激活，细胞活化功能受损失调；当受检者分泌IFNγ的细胞亚群小于10％时，提示细胞在体外无法被有效激活。通过检测受检者外周血中上述三类生物标志物的表达水平，可以构建综合评价人体免疫功能的实验方法及应用体系，为衡量人体抗感染、抗肿瘤能力提供体外评价模型。
[0016](2)相较于现有技术中检测的其他免疫指标，本专利技术的三种生物标志物的检测均是与CD8
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T细胞发挥功能直接相关的各项指标，根据上述三类生物标志物制备的试剂盒可以同时检测三种生物标志物的表达水平，进而有助于免疫功能的早期筛查与干预。
[0017](3)本专利技术提供的检测方案完善，检测指标相关性显著，且受检者的外周血样本易得、易处理，能够随体检进行实时检测。
附图说明
[0018]图1为本专利技术的Annexin A1蛋白在总CD8
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T细胞内的表达水平与年龄呈正相关示意图。
[0019]图1的A为代表性样本的外周血CD8
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T细胞检测图。
[0020]图1的B为Annexin A1蛋白在代表性样本的外周血CD8
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T细胞内的表达峰值图。
[0021]图1的C为Annexin A1蛋白在237例不同年龄样本内的表达水平与其年龄的回归线图。
[0022]图1的D为不同年龄段Annexin A1蛋白表达水平的统计图，对应C图数据。
[0023]图1的E为样本生物学年龄与Annexin A1蛋白表达强度(MFI)的相关性统计图。
[0024]图2为T细胞活化的表面标志物CD69与CD25的表达随年龄增长而下降的示意图。
[0025]图2的A为CD69在10例代表性样本的CD8
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T细胞内的表达峰值图。
[0026]图2的B为CD69在两个年龄段内的表达统计图，对应A图数据。
[0027]图2的C为CD25在10例代表性样本的CD8
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T细胞内的表达峰值图。
[0028]图2的D为CD25在两个年龄段内的表达统计图，对应C图数据。
[0029]图3为T细胞激活后分泌效应分子IFNγ的水平随年龄增长而下降的示意图。
[0030]图3的A为IFNγ在代表性样本的外周血CD8
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T细胞内的分泌水平图。
[0031]图3的B为IFNγ在6例不同年龄的代表性样本内分泌水平的峰值图。
[0032]图3的C为分泌IFNγ的效应性CD8...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.生物标志物组合物，其特征在于，所述生物标志物组合物包含膜联蛋白Annexin A1、膜结合的II型C
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凝集素受体分化抗原簇CD69和白介素2受体α链CD25、细胞因子IFNγ中的任意两种或者任意两种以上的组合。2.如权利要求1所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述生物标志物组合物包含膜联蛋白Annexin A1、膜结合的II型C
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凝集素受体分化簇CD69和白介素2受体α链CD25、细胞因子IFNγ。3.一种根据权利要求1或2所述的生物标志物组合物用于制备评价机体免疫功能的产品中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包含评价机体免疫功能的生物标志物组合物检测试剂盒，该试剂盒包含检测所述生物标志物组合物的试剂。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包含用于检测所述Annexin A1蛋白表达水平的第一试剂，用于检测所述CD69和CD25蛋白表达水平的第二试剂，用于检测所述IFNγ的分泌水平的第三试剂。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述评价机体免疫功能的方法包含以下步骤：S1，提取外周血样本中单核细胞，分离其中的CD8
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T细胞；S2，体外激活并培养所述CD8
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T细胞；S3，分别使用所述第一试剂检测A...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宏林，吴玥，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：