一种检测阿尔茨海默病标志物Aβ制造技术

本发明专利技术属于蛋白检测技术领域，具体公开了一种检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑

【技术实现步骤摘要】
一种检测阿尔茨海默病标志物A
β1‑
42
的试剂盒


[0001]本专利技术属于蛋白检测
，尤其涉及一种检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer
′
s disease,AD)是最常见的痴呆类型。由于起病隐匿、早期诊断困难，其引发的认知障碍、精神行为问题和生活功能丧失问题给公共卫生系统带来了沉重的经济和社会负担。
[0003]AD是一个从无症状、轻度认知损害(mild cognitive impairment,MCI)到痴呆的连续过程，经历早期、中期、晚期三个阶段，反映痴呆发生、发展、恶化的临床特征。早期AD无明显症状，难以诊断，极易被误诊，早期诊断、早期干预能够显著延缓病变的发生，对于降低发病率至关重要，有利于维持患者的正常生活，有助于鉴别AD患者和AD疑似病患者，提高诊断准确性。
[0004]β淀粉样蛋白(Aβ)是淀粉样蛋白前体(APP)经蛋白水解酶作用后的底物，由第21号染色体编码，是AD主要病理蛋白之一。Aβ1‑
42
是由42
‑
43个氨基酸组成的蛋白质片断，主要位于AD患者的脑内，Aβ1‑
42
的形成、沉积和降解贯穿阿尔茨默海症的整个病理过程，检测Aβ1‑
42
抗体能够准确的判断AD发病。
[0005]阿尔兹海默症的前期，血液中微量存在Aβ1‑
42
，化学发光和层析平台只能达到纳克/毫升(ng/mL)级别，检测难度大，很难进行精准检测及超微量检测。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒，以解决上述技术问题。
[0007]本专利技术目的之一在于提供一种检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒，包括包被有捕获抗体的磁珠复合物、标记有荧光微球的检测抗体复合物；包被有捕获抗体的磁珠复合物包括磁珠和捕获抗体，磁珠粒径为0.5
‑
4.7μm；标记有荧光微球的检测抗体复合物包括荧光微球和检测抗体，荧光微球粒径为200
‑
400nm；磁珠的工作浓度为0.05
‑
0.3mg/mL。
[0008]包被有捕获抗体的磁珠复合物、标记有荧光微球的检测抗体复合物均能与Aβ1‑
42
抗原结合。Aβ1‑
42
抗原的氨基酸序列为：
[0009]DAEFRHDSGYEVHHOKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIV。
[0010]优选地，根据抗体特异性特性分类，捕获抗体可以为多克隆抗体和单克隆抗体中的一种或两种，按照来源分类，捕获抗体可以为鼠源抗体、兔源抗体、羊源抗体中的一种或多种。
[0011]磁珠与捕获抗体偶联需用活化剂，磁珠表面的修饰基团为羧基时，活化剂可以为N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)、SulfoNHS、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)中的一种或两种以上。磁珠的表面修饰有羧基、氨基或甲苯磺酰基中的一种或多种，优选修饰
有羧基的磁珠。羧基浓度为10
‑
35μeq/g。羧基浓度大于35μeq/g，会出现本低浓度过大，小于10μeq/g抗体与磁珠连接不充分，后续造成试剂盒出现非特异连接。
[0012]优选地，荧光微球材质为二氧化硅、聚丙烯酰胺或聚苯乙烯中的一种或两种以上，优选为聚苯乙烯。二氧化硅不易溶胀，无法将染料包裹在其内，荧光强度不稳定。聚丙烯酰胺偶联抗体后，其灵敏度能达到0.091ng/mL，但较聚苯乙烯偶联抗体后的灵敏度低。荧光微球表面修饰有羧基、氨基或甲苯磺酰基中的一种或多种，优选修饰有羧基的荧光微球。在荧光微球上修饰羧基，有助于进一步增强信号，进一步提高灵敏度。
[0013]采用内部染料包埋方法制备荧光微球，得到的荧光微球发光更加稳定。
[0014]优选地，荧光微球内包裹的染料为荧光素、量子点、稀土元素、稀土螯合物、荧光蛋白或上转换纳米粒子。采用荧光素为染料的荧光微球的荧光强度强，能与背景信号分开，有利于在最终结果分析时的信号采集，能显著提高检测的精密度。进一步优选荧光微球内包裹的染料为异硫氰酸荧光素(FITC)。
[0015]异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂，具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性，稳定性佳，与蛋白质结合力优良，并且人眼对黄绿色较为敏感，方便观察，最大吸收光波长为490
‑
495nm，最大发射光波长为520
‑
530nm，呈现明亮的黄绿色荧光，在冷暗干燥处也可保存多年。在大量的荧光染料中，FITC由于其高吸收性，出色的荧光量子产率和良好的水溶性而成为最受欢迎的荧光团之一。像其他荧光素衍生物一样，FITC产生可检测的信号，而无需其他试剂进行检测。该功能使FITC在检测蛋白质或抗体的位置和活化，鉴定蛋白质或抗体复合物的形成和构象变化以及监测体内生物过程方面极为灵活。
[0016]量子点是一种纳米级别的半导体，通过对量子点施加一定的电场或光压，便会发出特定频率的光，而发出的光的频率会随着这种半导体尺寸的改变而变化，因而通过调节这种纳米半导体的尺寸就可以控制其发出的光的颜色，具体原理是由于这种纳米半导体拥有限制电子和电子空穴(Electron hole)的特性。
[0017]稀土元素是化学元素周期表中镧系元素—镧(La)、铈(Ce)、镨(Pr)、钕(Nd)、钷(Pm)、钐(Sm)、铕(Eu)、钆(Gd)、铽(Tb)、镝(Dy)、钬(Ho)、铒(Er)、铥(Tm)、镱(Yb)、镥(Lu)，钇(Y)和钪(Sc)，共17种元素，均是非常活泼的金属，性质极为相似，常见化合价+3，其水合离子大多有颜色，易形成稳定的配化合物。
[0018]稀土螯合物是一些稀土元素Sm
3+
、Dy
3+
、Eu
3+
、Tb
3+
，尤其是Eu
3+
、Tb
3+
同一些有机化合物如β
‑
二酮化合物、菲罗啉类化合物、水杨酸类化合物、联吡啶类化合物等所形成的螯合物，在紫外光的照射下发出很强的荧光，最主要的特点是激发波长具有配体的特性即随配体的变化而变化，发射光的波长具有镧系元素的性质，即不随配体的变化而变化，有利于多种稀土离子标记进行多分析物同时监测。
[0019]荧光蛋白优选为绿色荧光蛋白，绿色荧光蛋白(GFP)是一种β
‑
桶状蛋白1，由238个氨基酸组成，分子量约为27kDa，激发波长为488nm，并在约507nm处有一个发射峰。GFP从水晶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒，其特征在于，包括包被有捕获抗体的磁珠复合物、标记有荧光微球的检测抗体复合物；包被有捕获抗体的磁珠复合物包括磁珠和捕获抗体，磁珠粒径为0.5
‑
4.7μm；标记有荧光微球的检测抗体复合物包括荧光微球和检测抗体，荧光微球粒径为200
‑
400nm；磁珠的工作浓度为0.05
‑
0.3mg/mL。2.根据权利要求1所述的检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒，其特征在于，根据抗体特异性特性分类，捕获抗体可以为多克隆抗体和单克隆抗体中的一种或两种，按照来源分类，捕获抗体可以为鼠源抗体、兔源抗体、羊源抗体中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒，其特征在于，荧光微球材质为二氧化硅、聚丙烯酰胺或聚苯乙烯中的一种或两种以上。4.根据权利要求1所述的检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒，其特征在于，根据抗体特异性特性分类，检测抗体可以为多克隆抗体和单克隆抗体中的一种或两种，按照来源分类，检测抗体可以为鼠源抗体、兔源抗体、羊源抗体中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的检测阿尔茨海默病标志物Aβ1‑
42
的试剂盒，其特征在于，还包括分别含有Aβ1‑
42
抗原的校准品和质控品；校准品用于试剂盒定标，质控品用于检测试剂盒是...

【专利技术属性】
技术研发人员：方胡兵，于小利，祝言言，
申请(专利权)人：合肥国研汉因检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：