一种来源于肿瘤组织的T淋巴细胞的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种来源于肿瘤组织的T淋巴细胞的制备方法及应用，通过对肿瘤组织进行消化分离，获得的细胞给予连续刺激并使用特定培养基进行定向诱导扩增培养，在细胞达到一定数量后使用磁珠进行分选，对获得的特异性杀伤细胞继续扩增，直到细胞数量满足多次使用后冻存，对冻存细胞进行复苏，经过10天左右时间培养即可获得满足制剂需求的细胞数量并制成细胞悬液。本发明专利技术采用连续刺激加定向培养的扩增方式，在细胞接种初始即给予刺激，相比传统培养方法先无差别扩增种子细胞再定向刺激的方式，可大大提高细胞扩增效率。使用磁珠分选，对特异性杀伤细胞进一步提纯，再大规模扩增，可使细胞维持高水平的生物活性，1次冻存的种子细胞能够满足4

【技术实现步骤摘要】
一种来源于肿瘤组织的T淋巴细胞的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及T淋巴细胞制剂领域，特别涉及一种来源于肿瘤组织的T淋巴细胞的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]近几年，随着生物医药领域的迅猛发展，免疫疗法逐渐成为继手术、放疗、化疗后第四类肿瘤治疗手段，其中过继性细胞治疗、免疫检查点阻断疗法、肿瘤疫苗以及双特异性抗体等治疗方法均取得了一定的临床疗效。然而在实体瘤发展过程中，实体肿瘤的物理屏障及其复杂的肿瘤微环境限制了非特异性免疫治疗的疗效。
[0003]来自肿瘤内部或肿瘤组织附近的肿瘤组织浸润性淋巴细胞，对肿瘤细胞具有特异性识别能力，在1922年首次被提到，Mac carty推测淋巴细胞到肿瘤组织内是体内免疫系统抵抗肿瘤的一种现象，提出了肿瘤组织浸润性淋巴细胞是一种高效抗癌的免疫效应细胞。1986年Rosenberg等人在荷瘤小鼠的肿瘤组织内发现并分离出了肿瘤组织浸润性淋巴细胞，他们将分离出的细胞经过体外扩增培养后，再回输到荷瘤小鼠体内，发现肿瘤组织有明显消退，从而证明肿瘤组织浸润性淋巴细胞具有抗肿瘤的作用。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种来源于肿瘤组织的T淋巴细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将手术后废弃的肿瘤组织进行清洗、分割，放入消化液中震荡消化30
‑
40min；S2.组织消化后过滤、洗涤、离心，用T淋巴细胞完全培养基重悬沉淀后加入到预先包被的培养瓶中，补加IFN
‑
γ至终浓度1000
‑
1500IU/ml，进行细胞培养；S3.每日观察细胞状态，取样计数，根据计数结果补加T淋巴细胞完全培养基，调整细胞浓度在(0.3
‑
0.8)
×
109/L，继续细胞培养；S4.继续每日观察细胞状态，当培养体系达到10
‑
15ml时，取样计数，将细胞转移至预先包被的培养瓶中；根据计数结果补加T淋巴细胞完全培养基，调整细胞浓度在(0.3
‑
0.8)
×
109/L，补加IFN
‑
γ至终浓度1000
‑
1500IU/ml，继续细胞培养；S5.继续每日观察细胞状态，取样计数，当培养体系达到25
‑
45ml时，将细胞转入另一培养瓶中，根据计数结果补加T淋巴细胞完全培养基，调整细胞浓度在(0.3
‑
0.8)
×
109/L，继续细胞培养；S6.继续每日观察细胞状态，取样计数，当细胞总数达到1
×
108时，使用CD4磁珠对细胞进行分选，所得阴选细胞重新接种至培养瓶中，调整细胞浓度在(0.3
‑
0.8)
×
109/L，补加T淋巴细胞完全培养基继续培养；S7.继续每日观察细胞状态，取样计数，当细胞总数达到(1.0
‑
2.0)
×
108时，将细胞按照(2.5～4.0)
×
107个细胞/支，冻存4
‑
6支，程控降温后冻存于
‑
196℃液氮罐中；S8.复苏1支细胞，接种到预先包被的培养瓶中，补加IFN
‑
γ至终浓度1000

【专利技术属性】
技术研发人员：韩颢，韩洪起，王小宇，冯春玲，吴学涛，陈晓波，
申请(专利权)人：优赛生命科学发展有限公司，
类型：发明
国别省市：