一种提高NK细胞杀伤功能的方法及应用技术

本发明专利技术涉及NK细胞培养技术领域，公开了一种提高NK细胞杀伤功能的方法及应用。该方法包括以下步骤：(1)将血红素加氧酶1抗体加入NK细胞培养基，制得抗体培养基；(2)将抗体培养基进行无菌过滤处理；(3)分离NK细胞置于抗体培养基中培养。本发明专利技术通过添加血红素加氧酶1抗体处理NK细胞，阻断NK细胞中血红素加氧酶1的表达或抑制血红素加氧酶1活性有效物质。经血红素加氧酶1抗体处理后，可促进NK细胞颗粒酶B和穿孔素的分泌，并提高NK细胞对靶细胞Yac

【技术实现步骤摘要】
一种提高NK细胞杀伤功能的方法及应用


[0001]本专利技术涉及NK细胞培养
，具体涉及一种提高NK细胞杀伤功能的方法及应用。

技术介绍

[0002]自然杀伤细胞(Natural Killer Cell，NK细胞)是天然免疫系统的效应细胞，在抵御病原入侵以及抗肿瘤中至关重要。NK细胞因其具有无需预刺激即可杀伤细胞的特点受到关注，NK细胞除有强大的杀伤功能外，还能通过分泌细胞因子实现调节免疫功能。NK细胞可以通过直接或者间接的方式杀伤靶细胞。前者通过Fas
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FasL途径和TNF
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α作用途径招募Caspase8诱导靶细胞凋亡。而间接的杀伤方式包括分泌颗粒酶、穿孔素和干扰素。NK细胞的功能发挥主要通过细胞毒作用。目前，NK细胞在临床领域上的杀伤功能仍不够强大，尤其是NK细胞的抗肿瘤活性在免疫治疗领域仍需要进一步提高。目前，对于NK细胞在临床上的进一步使用，NK细胞的功能仍需进一步提高，因此，有必要研究一种提高NK细胞杀伤功能的方法，进而提高NK细胞的抗肿瘤功能。

技术实现思路

[0003]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种提高NK细胞杀伤功能的方法及应用，从而提高NK细胞的抗肿瘤功能。
[0004]本专利技术的第一方面提供一种提高NK细胞杀伤功能的方法。
[0005]具体的，所述方法包括以下步骤：
[0006](1)将血红素加氧酶1抗体加入NK细胞培养基，制得抗体培养基；
[0007](2)将抗体培养基进行无菌过滤处理；
[0008](3)分离NK细胞置于抗体培养基中培养。
[0009]优选的，步骤(1)中，所述血红素加氧酶1抗体的克隆号为EP1391Y,抗体购于Abcam。
[0010]优选的，步骤(1)中，所述抗体培养基中血红素加氧酶1抗体的终浓度为9.5μg/ml
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10.5μg/ml。
[0011]进一步优选的，步骤(1)中，所述抗体培养基中血红素加氧酶1抗体的终浓度为10μg/ml。
[0012]优选的，步骤(1)中，所述NK细胞培养基为DMEM培养基中加入10％胎牛血清ml和1000U/ml IL
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2。
[0013]优选的，步骤(2)中，所述无菌过滤处理使用灭菌抽滤瓶或针头式过滤器。
[0014]优选的，所述无菌过滤处理通过的孔径为0.22μm。
[0015]优选的，步骤(3)中，所述NK细胞为小鼠脾脏NK细胞。
[0016]优选的，所述小鼠为8周龄C57/BL6小鼠。
[0017]优选的，步骤(3)中，所述NK细胞置于抗体培养基中处理48h。
[0018]优选的，步骤(3)中，所述NK细胞的培养在细胞培养箱中进行。
[0019]本专利技术的第二方面提供一种提高NK细胞杀伤功能的方法在NK细胞培养中的应用。
[0020]相对于现有技术，本专利技术的有益效果如下：
[0021]本专利技术通过添加血红素加氧酶1抗体处理NK细胞，阻断NK细胞中血红素加氧酶1的表达或抑制血红素加氧酶1活性有效物质。经血红素加氧酶1抗体处理后，可促进NK细胞颗粒酶B和穿孔素的分泌，并提高NK细胞对靶细胞Yac
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1和K562的杀伤作用，从而提高NK细胞的抗肿瘤功能。
附图说明
[0022]图1为添加不同浓度血红素加氧酶1抗体后各组NK细胞的吸光度；
[0023]图2为体外培养基处理后各组NK细胞的颗粒酶B及穿孔素分泌情况；
[0024]图3为各组NK细胞对Yac
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1细胞及K562细胞的杀伤情况；
[0025]图4为小鼠体内处理后各组NK细胞的颗粒酶B及穿孔素分泌情况。
具体实施方式
[0026]为了让本领域技术人员更加清楚明白本专利技术所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本专利技术要求的保护范围不构成限制作用。
[0027]以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
[0028]实施例1
[0029]一种提高NK细胞杀伤功能的方法。
[0030](1)配制药液：配置NK细胞培养基，1L DMEM培养基中加入100ml胎牛血清(FBS)和1
×
106U IL
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2；配置含血红素加氧酶1抗体的NK细胞培养基，将血红素加氧酶1抗体加入至NK细胞培养基中，所述血红素加氧酶1抗体的克隆号为：EP1391Y，抗体购于Abcam；终浓度为10μg/ml，此药液即可用于处理NK细胞。配制空白组药液，配置NK细胞培养基，1L DMEM培养基中加入100ml胎牛血清(FBS)和1
×
106U IL
‑
2；
[0031](2)分选小鼠脾脏NK细胞：取8周龄的C57/BL6小鼠，通过颈脱位处死，用75％酒精浸泡5min，在生物安全柜中摘取脾脏，研磨获取的单个淋巴细胞，加入6ml PBS,1500rpm离心5min，去上清，加入2ml红细胞裂解液重选细胞，并在冰上裂解5min，加入4ml PBS终止裂解，1500rpm离心5min，去上清，加入1ml NK细胞培养基重悬细胞，过100目细胞筛。使用流式抗体对细胞染色，每1x106cell加入1μgCD3
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Percp
‑
cy5.5和NK1.1
‑
APC抗体，混合，在4℃中避光孵育1h。孵育完成后，加入PBS终止染色，1500rpm离心5min，弃上清，用1ml NK细胞培养基重悬细胞。采用BD公司的Arial II流式细胞分选仪分选NK细胞，选用70μm的喷嘴，选择Purity模式分选CD3
‑
NK1.1
+
NK细胞于96孔板中；
[0032](3)按照每孔100μl培养基，将5000个小鼠脾脏NK细胞接种于24孔板，分组分别为0μg/ml组(空白组)和10μg/ml组，每组设置6个复孔；
[0033](4)过夜培养后，收集细胞更换培养基，0μg/ml组更换为新的NK细胞培养基，10μg/ml组更换为含10μg/ml HO
‑
1抗体终浓度的NK细胞培养基；
[0034](5)处理48h后，每孔加入10μl CCK
‑
8试剂，培养箱中孵育4h后，检测各组在450nm
下的吸光度。
[0035]实验所得结果如图1所示，0μg/ml组(空白组)的OD值为0.343
±
0.050，10μg/ml组OD值为0.513
±
0.052。
[0036]对比例1
[0037]一种提高NK细胞杀伤功能的方法。
[0038]对比例1与实施例1不同之处在于，步骤(1)将血红素加氧酶1抗体加入至NK细胞培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高NK细胞杀伤功能的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将血红素加氧酶1抗体加入NK细胞培养基，制得抗体培养基；(2)将抗体培养基进行无菌过滤处理；(3)分离NK细胞置于抗体培养基中培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述血红素加氧酶1抗体的克隆号为EP1391Y。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述抗体培养基中血红素加氧酶1抗体的浓度为9.5μg/ml
‑
10.5μg/ml。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述NK细胞培养基为DMEM培养基中加入10％胎...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾小康，姚婕，
申请(专利权)人：南方医科大学顺德医院佛山市顺德区第一人民医院，
类型：发明
国别省市：