一种二肽合成酶突变体、其重组体及在高浓度底物连续循环催化中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种二肽合成酶突变体、其重组体及在高浓度底物连续循环催化中的应用，通过二肽合成酶突变基因与辅助侵染蛋白残基突变体的基因的融合表达，构建出外泌的固定化酶，所述辅助侵染蛋白残基突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述二肽合成酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；该酶可在中性pH和室温下与其生产细胞结合，完成一步纯化

【技术实现步骤摘要】
一种二肽合成酶突变体、其重组体及在高浓度底物连续循环催化中的应用


[0001]本专利技术涉及一种生物酶固定化
，特别涉及一种二肽合成酶突变体、其重组体及在高浓度底物连续循环催化中的应用。

技术介绍

[0002]催化剂的发现为工业化生产加速，生物酶作为一种天然高分子催化剂，具有催化效率高、特异性强，反应条件温和、无有机试剂污染的特点。然而，由于游离生物酶的物理化学性质不稳定，导致在实际应用过程中生物酶无法长期保持催化活性，也就无法发挥其最大的催化性能。生物酶固定化技术的出现不仅实现了酶的重复利用，而且可以改善酶的催化性能及活性。
[0003]L
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肌肽是由β
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丙氨酸和L
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组氨酸缩合得到的活性二肽，被广泛用作于化妆品、药品和保健品添加剂。目前工业上肌肽的制备主要通过提取法和化学法完成，其中邻苯二甲酸酐法技术相对成熟，应用比较广泛，但此法溶剂消耗较大，副产物较多，环境污染较严重。已报道的生物酶法合成肌肽的技术，主要以β
‑
丙氨酰胺与L
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组氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种二肽合成酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.一种二肽合成酶重组质粒，其特征在于：所述重组质粒为将辅助侵染蛋白残基突变体的基因与二肽合成酶突变体的基因重组；其中，所述辅助侵染蛋白残基突变体的基因，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述二肽合成酶突变体的基因，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种外泌二肽合成酶重组菌体，其特征在于：所述外泌二肽合成酶重组菌体是通过将辅助侵染蛋白残基突变体的基因与二肽合成酶突变体的基因进行融合表达而得，所述辅助侵染蛋白残基突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述二肽合成酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.根据权利要求3所述外泌二肽合成酶重组菌体，其特征在于：所述二肽合成酶重组菌体的宿主选自谷氨酸棒杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌或乳酸菌中的一种。5.如权利要求3所述二肽合成酶重组菌体在高浓度底物连续循环催化中的应用；其特征在于：包括利用所述重组菌体发酵获得的二肽合成酶在其生产菌株上的自固定化过程，发酵过程中的底物溶液包括L
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组氨酸与β
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丙氨酸以(150
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450mM)：(200
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550mM)计。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述底物溶液I包括：L
‑
组氨酸150
‑
450mM、β
‑
丙氨酸200
‑
550mM、MgSO4·
7H2O 100
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200mM、ATP 100
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350mM，pH＝7.0
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9.5，温度25
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35℃。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述自固定化过程还包括：所述重组菌体发酵所得的二肽合成酶在其生产菌株上自固定化得二肽合成酶固定化载体后，进行发酵培养，发酵过程中的二肽合成酶固定化载体浓度为40
‑
100g/50L...

【专利技术属性】
技术研发人员：范超，齐佳琨，洪皓，刘军，刘明，吴文忠，
申请(专利权)人：大连医诺生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：