一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用，本发明专利技术以来自海洋未培养微生物来源的酰基辅酶A合成酶为基础，通过Funclib设计突变位点后全基因合成，获得突变基因。含有突变质粒的工程菌诱导表达后，获得比酶活提高且稳定性提升的酰基辅酶A合成酶。以棕榈酸为底物时，突变体的比酶活提高了4.4倍。在比活力提高的同时，突变体的稳定性也得到了提升，该突变体在酶法检测游离脂肪酸体外诊断试剂盒中具有潜在应用价值。酸体外诊断试剂盒中具有潜在应用价值。酸体外诊断试剂盒中具有潜在应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种酰基辅酶A合成酶突变体、其编码基因、表达菌株及其应用。

技术介绍

[0002]游离脂肪酸(NEFA)是一类有机酸，又称非酯化脂肪酸。NEFA是中性脂肪分解成的物质之一，主要由油酸，软脂酸，亚油酸等组成，大部分NEFA与白蛋白结合，存在于血液中。NEFA与氧化应激直接相关，而氧化应激可通过损伤胰岛细胞和降低外周组织对胰岛素的敏感性，导致糖尿病的发生。NEFA的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、甲状腺功能亢进等疾病而升高，临床检测NEFA有利于辅助诊断疾病的发生。目前，临床上检测NEFA的主要方法有气相色谱法和酶法，其中酶法检测由于操作简单、快速，特别是可以适应于全自动生化仪的批量分析。
[0003]游离脂肪酸检测试剂盒的主要原理为，样品中的NEFA在辅酶A(CoA)与ATP的存在下，受酰基辅酶A合成酶(ACS)作用，生成的酰基
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CoA在酰基辅酶A氧化酶(ACOD)的作用下被氧化，同时生成过氧化氢，生成的过氧化氢在过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酰基辅酶A合成酶突变体，其特征在于：所述酰基辅酶A合成酶突变体的氨基酸序列为SEQ ID No：1所示的酰基辅酶A合成酶的氨基酸序列中第311位的丝氨酸突变为丙氨酸，第314位的天冬酰胺突变为丝氨酸，第436位的谷氨酸突变为蛋氨酸，第438位的精氨酸突变为组氨酸，且第479位的谷氨酰胺突变为谷氨酸。2.编码权利要求1所述的酰基辅酶A合成酶突变体的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。3.一种表达权利要求1所述的酰基辅酶A合成酶突变体的工程菌株，其特征在于：所述工程菌株的分类命名为Escherichia coli BL21(DE3)/pET28a(+)
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ACS
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K33，已送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：房伟，章文霞，杨孝宇，张学成，肖亚中，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：