一种基于PCA3、PSA双基因的sgRNA引物、检测试剂及其应用制造技术

本申请涉及基因检测技术领域，公开了一种基于PCA3、PSA双基因的sgRNA引物、检测试剂及其应用，其检测试剂包括：恒温扩增体系试剂、CRISPR/Cas9试剂和免疫试纸条；恒温扩增体系试剂包括：含有标记分子1的PCA3基因扩增引物和含有标记分子2的PSA基因扩增引物，且标记分子1和标记分子2不同；免疫试纸条含有显色物质、基因探针以及两条检测线；显色物质选自胶体金、四氧化三铁、碳点、纳米硒、量子点、荧光分子中的任一种；两条检测线分别固定有与标记分子1和标记分子2结合的物质；CRISPR/Cas9试剂含有PCA3和PSA基因的sgRNA引物和cas9蛋白。解决了现有的基于PCA3、PSA双基因的检测方法具有临床操作不方便的缺陷。有临床操作不方便的缺陷。有临床操作不方便的缺陷。

【技术实现步骤摘要】
一种基于PCA3、PSA双基因的sgRNA引物、检测试剂及其应用


[0001]本申请涉及基因检测
，尤其是涉及一种基于PCA3、PSA双基因的sgRNA引物、检测试剂及其应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌是男性第二大常见癌症，基于PCA3、PSA双基因检测为前列腺癌的主要检测方法之一。PSA是前列腺抗原而非前列腺癌抗原，有着高灵敏性、低特异性的特点，因此其既不能区分恶性肿瘤与非恶性肿瘤，也不能区分低级别和高级别的恶性癌症，往往导致不必要的活检与广泛的过度治疗。前列腺癌抗原3(PCA3)是一种非编码长链RNA，在前列腺癌中高度过表达。且已经有研究对PCA3在前列腺癌检测概率方面的表现进行了探索。由于其高灵敏度(52％到58％)和特异度(72％到87％)，美国食品和药物管理局(US Food And Drug Administration)于2012年2月将PCA3确定为前列腺癌早期诊断的肿瘤标志物，用于促进既往前列腺活检阴性男性的活检决策。
[0003]目前不管是在临床还是科研中，针对PCA3与PSA的研究都是检测其在病人血液、尿液中的表达。而这些研究的操作方法均需要专业的人员对大型仪器进行长时间的专业操作，给临床上的应用带来了很多不便，这也是PCA3一直未能广泛应用于临床的主要原因之一。
[0004]针对上述相关技术，现有的基于PCA3、PSA双基因的检测方法具有需要专业的人员对大型仪器进行长时间的专业操作，临床操作不方便的缺陷。

技术实现思路

[0005]为了解决现有的基于PCA3、PSA双基因的检测方法具有需要专业的人员对大型仪器进行长时间的专业操作，临床操作不方便的缺陷，本申请提供了一种基于PCA3、PSA双基因的sgRNA引物、检测试剂及其应用。
[0006]第一方面，本申请提供一种基于PCA3、PSA双基因的检测试剂/试剂盒。
[0007]本申请是通过以下技术方案得以实现的：一种基于PCA3、PSA双基因的检测试剂/试剂盒，包括：
[0008]恒温扩增体系试剂、CRISPR/Cas9试剂和免疫试纸条；
[0009]所述恒温扩增体系试剂包括：含有标记分子1的PCA3基因扩增引物和含有标记分子2的PSA基因扩增引物，且所述标记分子1和所述标记分子2不同；所述恒温扩增的产物包含所述CRISPR/Cas9试剂识别所需的PAM位点；
[0010]所述恒温扩增体系试剂的恒温扩增方法选自重组酶介导恒温核酸扩增(RT
‑
RAA)、环介导恒温扩增(RT
‑
LAMP)和超分支滚环扩增(HRCA)恒温扩增方法中任一种；
[0011]所述免疫试纸条含有显色物质、基因探针以及两条检测线；所述显色物质选自胶体金、四氧化三铁、碳点、纳米硒、量子点和荧光分子中的任一种；两条所述检测线分别固定有与所述标记分子1和所述标记分子2结合的特异性识别物质
[0012]所述CRISPR/Cas9试剂含有PCA3和PSA基因的sgRNA引物和cas9蛋白；所述CRISPR/Cas9试剂合成的sgRNA含有与所述基因探针结合的序列。
[0013]本申请在一较佳示例中可以进一步配置为：所述PCA3恒温基因扩增引物和所述PSA恒温基因扩增引物选自以下：
[0014]PCA3
‑
F CATACTGGTCACTTATCTCAAC(SEQ ID No.1)
[0015]PCA3
‑
R GCTCTTAACAACTGGTCCT(SEQ ID No.2)
[0016]PSA
‑
F AGCATTGAACCAGAGGAGTT(SEQ ID No.3)
[0017]PSA
‑
R GAAGCACACCATTACAGACA(SEQ ID No.4)。
[0018]本申请在一较佳示例中可以进一步配置为：所述标记分子1和所述标记分子2独立地选自：cy3、cy5、cy7、FITC、FAM、Alexa Fluor、Bio、Dig、Methylene Blue中的任一种。
[0019]本申请在一较佳示例中可以进一步配置为：PCA3和PSA基因的sgRNA引物优选自以下：
[0020]PCA3
‑
sgRNA
‑
F 5
’‑
CCTCTAATACGACTCACTATAGGGCACTCTTGTGAGCCACT
[0021]TTGTTTAAGAGCTATGCTGGAAAAAAGAAAAATGCAAGTGGAATACCAAAAAGA
‑3’
(SEQ ID No.5)
[0022]PCA3
‑
sgRNA
‑
R 5'
‑
AAGAAAAAAAGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGAT
[0023]AACGGACTAGCCTTATTTAAACTTGCTATGCTGTTTTTTTCTTTTTGGTATTCC
‑3’
(SEQ ID No.6)
[0024]PSA
‑
sgRNA
‑
F 5
’‑
CCTCTAATACGACTCACTATAGGACCAAGTTCATGCTGTGT
[0025]GCGTTTAAGAGCTATGCTGGAAAAAAGAAAAATGCAAGTGGAATACCAAAAAGA
‑3’
(SEQ ID No.7)
[0026]PSA
‑
sgRNA
‑
R 5'
‑
AAGAAAAAAAGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGAT
[0027]AACGGACTAGCCTTATTTAAACTTGCTATGCTGTTTTTTTCTTTTTGGTATTCC
‑3’
(SEQ ID No.6)。
[0028]本申请在一较佳示例中可以进一步配置为：优选地，所述CRISPR/Cas9试剂还含有DNA和/或RNA纯化试剂，T7聚合酶。
[0029]本申请在一较佳示例中可以进一步配置为：所述基因探针选自金纳米颗粒基因探针、链霉亲和素修饰纳米基因探针、羧基修饰纳米基因探针中的任一种。
[0030]本申请在一较佳示例中可以进一步配置为：所述基因探针选自金纳米颗粒基因探针。
[0031]本申请在一较佳示例中可以进一步配置为：所述免疫试纸条含有：样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫；
[0032]所述样品垫用于接收待检测样品；
[0033]所述结合垫含有所述基因探针；
[0034]所述NC膜上含有两条所述检测线以及质控线；
[0035]所述质控线含有捕获探针，所述捕获探针为与所述基因探针互补的核酸探针。
[0036]第二方面，本申请还提供一种基于PCA3、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于PCA3、PSA双基因的检测试剂/试剂盒，其特征在于，包括：恒温扩增体系试剂、CRISPR/Cas9试剂和免疫试纸条；所述恒温扩增体系试剂包括：含有标记分子1的PCA3恒温基因扩增引物和含有标记分子2的PSA恒温基因扩增引物，且所述标记分子1和所述标记分子2不同；恒温扩增的产物包含所述CRISPR/Cas9试剂识别所需的PAM位点；所述免疫试纸条含有显色物质、基因探针以及两条检测线；所述显色物质选自胶体金、四氧化三铁、碳点、纳米硒、量子点和荧光分子中的任一种；两条所述检测线分别固定有与所述标记分子1和所述标记分子2结合的特异性识别物质；所述CRISPR/Cas9试剂含有PCA3和PSA基因的sgRNA引物和cas9蛋白；所述CRISPR/Cas9试剂合成的sgRNA含有与所述基因探针结合的序列。2.根据权利要求1所述的基于PCA3、PSA双基因的检测试剂/试剂盒，其特征在于：所述PCA3恒温基因扩增引物和所述PSA基因恒温扩增引物选自以下：PCA3
‑
FCATACTGGTCACTTATCTCAAC(SEQ ID No.1)PCA3
‑
R GCTCTTAACAACTGGTCCT(SEQ ID No.2)PSA
‑
FAGCATTGAACCAGAGGAGTT(SEQ ID No.3)PSA
‑
RGAAGCACACCATTACAGACA(SEQ ID No.4)。3.根据权利要求1所述的基于PCA3、PSA双基因的检测试剂/试剂盒，其特征在于：所述标记分子1和所述标记分子2独立地选自：cy3、cy5、cy7、FITC、FAM、AlexaFluor、Bio、Dig、Methylene Blue中的任一种。4.根据权利要求1所述的基于PCA3、PSA双基因的检测试剂/试剂盒，其特征在于：PCA3和PSA基因的sgRNA引物选自以下：PCA3
‑
sgRNA
‑
F 5
’‑
CCTCTAATACGACTCACTATAGGGCACTCTTGTGAGCCACTTTGTTTAAGAGCTATGCTGGAAAAAAGAAAAATGCAAGTGGAATACCAAAAAGA
‑3’
(SEQ ID No.5)PCA3
‑
sgRNA
‑
R 5'
‑
AAGAAAAAAAGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGATAACGGACTAGCCTTATTTAAACTTGCTATGCTGTTTTTTTCTTTTTGGTATTCC
‑3’
(SEQ ID No.6)PSA
‑
sgRNA
‑
F 5
’‑
CCTCTAATACGACTCACTATAGGACCAAGTTCATGCTGTGTGCGTTTAAGAGCTATGCTGGAAAAAAGAAAAATGCAAGTGGAATACCAAAAAGA
‑3’
(SEQ ID No.7)PSA
‑
sgRNA
‑
R 5'
‑
AAGAAAAAAAGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGA...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾国华，刘宏星，古迪，陈文哲，吴思丞，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院广州呼吸中心，
类型：发明
国别省市：