本发明专利技术公开一种慢性淋巴细胞白血病的细胞的遗传学检测方法，属于白血病检测技术领域。为了提供一种慢性淋巴细胞白血病的细胞的遗传学检测方法。本发明专利技术公开一种慢性淋巴细胞白血病的细胞的遗传学检测方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：步骤1：选取确诊为慢性淋巴细胞白血病患者的血液样本/骨髓，提取外周血/骨髓液作为待测试的样本；步骤2：对步骤1获得的外周血样本进行染色体核型分析；步骤3：对步骤1获得的外周血样本进行原位杂交技术分析；步骤4：将步骤2和步骤3获得的数据进行统计学分析会的率间数据。对于CLL患者的分子遗传学异常，FISH与染色体核型分析各有自己的优缺点，它们相辅相成、不可或缺。不可或缺。
【技术实现步骤摘要】
fluorescence in situ hybridization in the diagnosis and prognosis of chronic lymphocytic leukemia[J].Cancer Genetics&Cytogenetics,2005,158(1):88)，但是FISH不适合运用全基因组检测CLL细胞遗传学异常。本文应用FISH技术和染色体核型分析对CLL患者的细胞遗传学异常进行综合分析探讨，进一步了解CLL的遗传学特征，对比分析两种方法各自的优缺点，找出在临床应用中对CLL患者最佳的细胞遗传学检测方法，能更快速更准确的检测CLL细胞遗传学异常。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是为了提供一种慢性淋巴细胞白血病的细胞的遗传学检测方法。
[0005]本专利技术提供一种慢性淋巴细胞白血病的细胞的遗传学检测方法，所述方法的具体步骤如下：
[0006]步骤1：选取确诊为慢性淋巴细胞白血病患者的血液样本/骨髓，提取外周血/骨髓液作为待测试的样本；
[0007]步骤2：对步骤1获得的外周血样本进行染色体核型分析；
[0008]步骤3：对步骤1获得的外周血样本进行原位杂交技术分析；
[0009]步骤4：将步骤2和步骤3获得的数据进行统计学分析会的率间数据。
[0010]进一步地限定，步骤1中所述的外周血的总数是大于10
×
109个/L。
[0011]进一步地限定，步骤2中染色体核型分析的具体步骤如下：
[0012](1)取外周血或骨髓液接种于含有20％胎牛血清RPM1640培养基内，37℃培养72小时，收获前加秋水酰胺阻断剂，低渗法收集细胞；
[0013](2)制备气干法滴片，G显带技术、Giemsa染色，全自动染色体扫描采集优质图像，处理分析并记录结果。
[0014]进一步地限定，步骤3中原位杂交技术分析的具体步骤如下：
[0015](1)提取单个核细胞，低渗法收集细胞，制备气干法滴片；
[0016](2)选择标记探针78℃变性5分钟，37℃杂交过夜；
[0017](3)荧光显微镜观察；
[0018](4)建立阈值。
[0019]进一步地限定，步骤(3)的具体方法是：Isis Version5.4 FISH分析计数500个细胞并记录杂交信号。
[0020]进一步地限定，采用VYSIS单色标记RB
‑
1探针，RB
‑
1基因标记为红色，正常信号特征为2R,阳性信号特征为1R；单色标记CEP12探针，CEP12基因标记为红色，正常信号特征为2R，阳性信号特征为3R；双色分离标记IGH探针，5
’
IGH基因标记为绿色，3
’
IGH基因标记为红色，IGH基因显示为黄色或红绿叠加信号，正常信号特征为2F，阳性信号特征为1F1R1G。
[0021]进一步地限定，，采用双色标记TP53探针，TP53基因标记为红色，CEP17基因标记为绿色，正常信号特征为2R2G，阳性信号特征为2G1R，
‑
17为1R1G；双色标记ATM探针，ATM基因标记为红色，CEP11基因标记为绿色，正常信号特征为2R2G，阳性信号特征为2G1R，
‑
11为1R1G。
[0022]进一步地限定，步骤(4)的具体方法如下：每种探针均选取10例正常骨髓捐献者标本检查，计数至少500个间期细胞，正常参考区间为小于95％累计beta分布区间点，每种探
针的切割值：RB
‑
1的切割值<6.17％，TP53的切割值为<3.98％,ATM的切割值为<2.08％，TP12的切割值为<1.94％，IGH的切割值为<4.18％。
[0023]进一步地限定，步骤3所述的统计学分析是采用四格表卡方检验。
[0024]进一步地限定，P<0.05为差异。
[0025]有益效果：选取69例初诊慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)患者探讨能够检测其分子遗传学异常的两种方法的特点。方法回顾性分析采用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization，FISH)(CEP12、RB1、TP53、ATM、IGH探针)及染色体核型分析检测过的69例初诊患者的病例资料。分析CLL患者中分子遗传学的改变。结果69例CLL初诊患者中，FISH检测发现遗传学异常的有34例(49.28％)，染色体核型分析得出有明确遗传学异常的有18例(26.09％)(其中包括FISH没有检测出的其他复杂核型)，两者间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于CLL患者的分子遗传学异常，FISH与染色体核型分析各有自己的优缺点，它们相辅相成、不可或缺。
具体实施方式
[0026]实施例1.
[0027]1.1入选病例
[0028]选取2015年12月份至2017年3月份在医院住院和门诊收治的69例初诊CLL患者病例，其中男性39例，女性30例，年龄范围在38
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78岁之间，中位数年龄是59岁，所选病例均为按照多学科的综合诊断已确诊的CLL患者。
[0029]1.2方法
[0030]1.2.1主要试剂及仪器
[0031]RPM1640(Gibco公司)培养液、秋水酰胺溶液(上海生工)、RB1(13q14)、TP53(17q13)、ATM(11q22)、CEP12(12p11
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q11)、IGH(14q32)探针(美国VYSIS)、Metafer4.0全自动染色体扫描工作站(德国MetaSystems公司)、Ikaros Version5.4(德国MetaSystems公司)、杂交仪(美国Abbott公司)、Isis Version5.4 FISH分析软件(德国MetaSystems公司)
[0032]1.2.2标本的制备
[0033]CLL的核型分析和FISH检查以骨髓、外周血(总数>10*10^9/L)为主，选取2015年12月份至2017年3月份在天津血液病医院血液病研究所住院和门诊收治的69例初诊确诊CLL患者标本。
[0034]1.2.3染色体核型分析主要步骤
[0035](1)取外周血或骨髓液接种于含有20％胎牛血清RPM1640培养基内，37℃培养72小时，收获前加秋水酰胺阻断剂，低渗法收集细胞。
[0036](2)气干法滴片，G显带技术、Giemsa染色，全自动染色体扫描采集优质图像，处理分析并记录结果(结果应用ISCN2016命名规范描述)
[0037]1.2.4FISH主要步骤
[0038](1)提取单个核细胞，低渗法收集细胞，气干法滴片
[0039](2)选择标记本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种慢性淋巴细胞白血病的细胞的遗传学检测方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：步骤1：选取确诊为慢性淋巴细胞白血病患者的血液样本/骨髓，提取外周血/骨髓液作为待测试的样本；步骤2：对步骤1获得的外周血样本进行染色体核型分析；步骤3：对步骤1获得的外周血样本进行原位杂交技术分析；步骤4：将步骤2和步骤3获得的数据进行统计学分析会的率间数据。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在在于，步骤1中所述的外周血的总数是大于10
×
109个/L。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中染色体核型分析的具体步骤如下：(1)取外周血或骨髓液接种于含有20％胎牛血清RPM1640培养基内，37℃培养72小时，收获前加秋水酰胺阻断剂，低渗法收集细胞；(2)制备气干法滴片，G显带技术、Giemsa染色，全自动染色体扫描采集优质图像，处理分析并记录结果。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中原位杂交技术分析的具体步骤如下：(1)提取单个核细胞，低渗法收集细胞，制备气干法滴片；(2)选择标记探针78℃变性5分钟，37℃杂交过夜；(3)荧光显微镜观察；(4)建立阈值。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)的具体方法是：Isis Version5.4 FISH分析计数500个细胞并记录杂交信号。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用VYSIS单色标记RB
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1探针，RB
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1基因标记为红色，正常信号特征为2R,阳性...
【专利技术属性】
技术研发人员：林爱芝，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：
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