外泌体制品与外泌体药剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及外泌体领域，公开了一种外泌体制品与外泌体药剂及其制备方法和应用，该制备方法包括：将外泌体、洋地黄皂苷和任选的助剂进行第一次孵育。用该制备方法制备的外泌体制品可以使得载药率提高至50％以上。品可以使得载药率提高至50％以上。品可以使得载药率提高至50％以上。

【技术实现步骤摘要】
外泌体制品与外泌体药剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及外泌体领域，具体涉及一种外泌体制品与外泌体药剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]药物的有效递送对于药物的功效以及减低毒副作用有着十分重要的影响。药物的递送手段影响的药物的吸收，代谢，体内的分布特点等等。随着美国食品药品监督管理局批准了可以mRNA为基础的脂质纳米粒(Lipid Nanoparticle，LNP)为载体的新型冠状病毒的疫苗。以LNP作为药物载体的方式再次获得了市场的关注。然而由于LNP可能造成的免疫反应，以及LNP在肠道内的不稳定性极大的增加了以LNP作为载药媒介的难度。
[0003]外泌体作为细胞间的交流媒介，具有天然的低免疫原性。在肠道内表现出远高于LNP的稳定性。给一些不能口服的药物提供了可以口服的路径。比如化疗药物多柔比星一般只能通过静脉注射的方式给药，极大的阻碍了患者能够治疗的时间和场所等。如果可以实现口服的多柔比星，将会便利可以给药的时间和场所，极大的便利广大的癌症患者。
[0004]目前市场上有一款使用LNP包裹多柔比星的药物DOXIL，Myocet，Lipo
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dox，国内的有里葆多(复旦张江)、立幸(常州金远)和多美素(石药欧意)。然而外泌体载多柔比星的药物目前在市场中未见报道，也没有其他载碱性药物的外泌体制剂药品。外泌体载药的方法目前集中于电转、超声以及和脂质体共孵育等手段。根据相关报道，这些方式的载药率最高不超过20％。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的以上问题，提供一种外泌体制品与外泌体药剂及其制备方法和应用，可以使得载药率提高至50％以上。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供一种外泌体制品的制备方法，其特征在于，该制备方法包括，将外泌体、洋地黄皂苷和任选的助剂进行第一次孵育。
[0007]本专利技术第二方面提供一种外泌体制品，其中，该外泌体制品由上述的方法制备。
[0008]本专利技术第三方面提供上述的外泌体制品在药物载体中的应用。
[0009]本专利技术第四方面提供一种外泌体药剂的制备方法，其中，该制备方法包括：将上述的外泌体制品与药物混合进行第二次孵育。
[0010]本专利技术第五方面提供一种外泌体药剂，其中，该外泌体药剂由上述的方法制备；或者，所述外泌体药剂包括上述的外泌体制品以及负载于所述外泌体制品内的药物。
[0011]通过上述技术方案，本专利技术能够显著提高外泌体的载药效率，使用本专利技术的方法得到的外泌体制品能够承载初始投药量的50％以上，实现了50％以上的载药效率。在优选的实施方式中，在60℃下将本专利技术的外泌体制品与药物共同孵育能够进一步提高载药效率，并且即使和碱性药物共同孵育，外泌体制品的结构也能保持完整，稳定性较高。
附图说明
[0012]图1是实施例1中外泌体载药后电镜下的颗粒情况；
[0013]图2是实施例1中外泌体载药后标志物的表达情况
[0014]图3是实施例1和2外泌体载药后过滤离心余液情况；
[0015]图4是对比例2和3外泌体载药后过滤离心余液情况。
具体实施方式
[0016]在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
[0017]本专利技术第一方面提供一种外泌体制品的制备方法，其中，该制备方法包括，将外泌体、洋地黄皂苷和任选的助剂进行第一次孵育。
[0018]本专利技术中，所述洋地黄皂苷结构式为
[0019]本专利技术中，所述外泌体与洋地黄皂苷的重量比没有限制，可以使得助剂进入外泌体内且不破坏在外泌体表面即可，优选的，外泌体与洋地黄皂苷的重量比为1：0.03
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0.4，可以为1：0.03、1：0.05、1：0.07、1：0.1、1：0.12、1：0.14、1：0.16、1：0.18、1：0.2、1：0.22、1：0.24、1：0.26、1：0.28、1：0.3、1：0.32、1：0.34、1：0.36、1：0.38、1：0.4以及以上任意两个数值形成的范围及范围内的值，既可以不会造成浪费，也可以打出足够的孔。
[0020]本专利技术中，所述外泌体和助剂的重量比没有限制，可以进入外泌体内部，并且可以使得外泌体内部形成酸性环境即可，优选的，外泌体与助剂的重量比为1：0
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70，可以为1：0、1：5、1：10、1：15、1：20、1：25、1：30、1：35、1：40、1：45、1：50、1：55、1：60、1：65、1：70以及以上任意两个数值形成的范围及范围内的值。
[0021]本专利技术中，所述第一次孵育的条件没有限制，可以使得足够多的助剂进入外泌体内即可，优选的，所述第一次孵育的条件包括：温度为15
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37℃，可以为15℃、17℃、19℃、21℃、23℃、25℃、27℃、29℃、31℃、33℃、35℃、37℃以及以上任意两个数值形成的范围及范围内的值，时间为10
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20min，可以为10min、12min、14min、16min、18min、20min以及以上任意两个数值形成的范围及范围内的值。
[0022]本专利技术中，对所述外泌体来源没有限制，可以为本领域常见的各种来源的外泌体，优选的，所述外泌体为牛奶外泌体和人胚肾细胞外泌体中的至少一种，更优选为牛奶外泌
体。
[0023]本专利技术中，所述助剂没有限制，可以涌入外泌体内，并且可以使得外泌体内部产生酸性环境即可，优选的，所述助剂为硫酸铵，在硫酸铵进入外泌体内后，铵离子可以转变成氨气离开外泌体内部，此时外泌体内部显酸性。优选的，所述第一次孵育在第一缓冲液中进行，更优选的，相对于1mg的外泌体，所述缓冲液的用量为0.25
‑
1mL，可以为0.25mL、0.3mL、0.35mL、0.4mL、0.45mL、0.5mL、0.55mL、0.6mL、0.65mL、0.7mL、0.75mL、0.8mL、0.85mL、0.9mL、0.95mL、1mL以及以上任意两个数值形成的范围及范围内的值。
[0024]本专利技术中，为了去除游离的洋地黄皂苷和多余的助剂，所述制备方法还包括：将第一次孵育产物进行第一次过滤离心，本专利技术的专利技术人发现，当所述第一次过滤离心力为2000
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4000g(可以为2000g、2500g、3000g、3500g、4000g以及以上任意两个数值形成的范围及范围内的值)，更优选的，第一次过滤离心的过滤网孔径5
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6nm(可以为5nm、5.1nm、5.2nm、5.3nm、5.4nm、5.5nm、5.6nm、5.7nm、5.8nm、5.9nm、6nm以及以上任意两个数值形成的范围及范本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体制品的制备方法，其特征在于，该制备方法包括：将外泌体、洋地黄皂苷和任选的助剂进行第一次孵育。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述外泌体、洋地黄皂苷和助剂的重量比为1：0.03
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0.4：0
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70；和/或，所述第一次孵育的条件包括：温度为15
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37℃，时间为10
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20min；和/或，所述外泌体为牛奶外泌体和人胚肾细胞外泌体中的至少一种；优选为牛奶外泌体；和/或，所述助剂为硫酸铵；和/或，所述第一次孵育在第一缓冲液中进行；优选的，相对于1mg的外泌体，所述第一缓冲液的用量为0.25
‑
1mL。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，所述制备方法还包括：将第一次孵育产物进行第一次过滤离心；优选的，所述第一次过滤离心的离心力为2000
‑
4000g；优选的，所述第一次过滤离心的时间为30
‑
60min；优选的，所述第一次过滤离心的过滤网孔径5
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6nm；优选的，所述制备方法还包括：取第一次过滤离心得到的余液与第二缓冲液混合，得到第一混合液；优选的，所述第一次过滤离心得到的余液与第二缓冲液中体积比为1：8
‑
12。4.一种外泌体制品，其特征在于，该外泌体制品由权利要求1
‑
3中任意一项所述的方法制备。5.权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐震，王承志，
申请(专利权)人：北京镁伽机器人科技有限公司，
类型：发明
国别省市：