不对称菁类荧光染料,组合物及在生物样品染色中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种式Ⅰ表示的不对称菁类荧光染料，其中Ｘ、ｎ、Ｒ↓［１］、Ｒ↓［２］、Ｒ↓［３］、Ｒ↓［４］和Ｙ↑［－］如说明书中的定义。该类染料可以作为优秀的核酸染色剂，其光谱在６００～９００ｎｍ的近红外区，没有背景荧光的干扰。同时该类染料可以利用小型红色半导体激光器作为光源（６３３ｎｍ）。本发明专利技术还提供包含这种荧光染料的组合物和使用这种荧光染料或其组合物进行生物染色的方法。

【技术实现步骤摘要】
,组合物及在生物样品染色中的用途的制作方法
本专利技术涉及焚光染料，具体地讲，本专利技术涉及适合用于生物样品染色的，包含所述荧光染料的组合物及其在生物样品染色中的用途。
技术介绍
荧光分析技术由于激光、孩i处理机和电子学等一些新的科学技术的引入和飞速发展，极大地推动了荧光分析的广泛应用。尤其近年来以荧光染料为标识剂的生物芯片的出现，使该技术在细胞免疫学、微生物学、分子生物学、分子遗传学、病理学、临床检验学、植物学等方面具有广阔的应用前景。荧光染料的开发是发展焚光分析技术的具有决定性作用的因素。早期应用的染料包括新亚曱蓝(NMB)、亮曱苯蓝(BCB)、派诺宁Y、溴乙锭等。它们通过嵌入或静电吸引与核酸分子形成复合物，从而可以在显微镜下观察增强后的荧光。但是这些染料自身也可以形成染料复合物，不能明显区别于染料与核酸形成的复合物，造成高的荧光背景干扰。同时，这些染料的焚光量子效率较低，降低了荧光增强的程度，影响检测结果的准确性。吖啶橙也应用在荧光分析中，可以和核酸形成复合物，使荧光增强。这类染料分子相互之间在能量传递的过程中可能会导致光淬灭，使得染料核酸复合物没有荧光发出，影响检测结果真实性。同时在流式细胞分析仪中，吖啶橙和塑料管路有较强的作用，会增加背景焚光强度。为了清除测试后残留的染料和保证测试结果的准确性，需要仪器进行长时间的管路清洗，这就降低了仪器的分析效率。美国专利4957870提出了 一类p塞唑蓝染料用于;f企测核酸和血液中的网织红细胞。该类染料使用的激发波长在488nm，需要使用价格高昂的激光器做光源，增加了仪器的使用成本。同时，这类染料需要较长的孵育时间，才能和核酸较好的结合。美国专利5994138公开了一种用于血液中网织红细胞染色的染料，它需要在35'C以上的反应条件下才能得到良好的检测结果，对仪器的使用条件提出了较高的要求。目前使用的菁类荧光染泮+，如TOTAB、 TOTIN、 TO-PRO-3、PO-PRO-2和BO-PRO謹2等，它们的吸收和发射都在近红外区(670-1000 nm),但这类染料的分子结构比较复杂，合成路线较长，收率较低，因而价格高，限制了其使用范围。因此，需要开发新的荧光染料，该荧光染料优选具有以下性质无核酸时染料自身不发荧光，与核酸形成复合物后时具有良好的荧光量子产率，光谱在近红外区，避免背景荧光的干扰；可以在633nm附近被激发，从而可以使用价格4氐廉的激光器作为激发光源；具有一定水平的水溶性，同时具有一定的穿过细胞膜的能力。
技术实现思路
因此，本专利技术一方面提供了 一种具有以下通式I结构的化合物:其中n为1、 2或3;X为C(CH3)2、 O、 S或Se;R1和R2各自独立选自H、 OH、 Cw8烷基、d-6烷基ORs、 d-8烷基磺酸基、苯基或卣素；R3、 R4各自独立选自d—化烷基COOR6、 Cws烷基OR6、千基，其中苄基由选自以下的取代基任选取代卣素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、杂环基、由代烷基、氨基、烷基氨基、酰氨基、羧基，条件是R3和R4不同时为千基；且R3为千基时R4不为Cw8烷基OR6;Rs为Cw8烷基或者H;R6为Cw8烷基、H或者苯基，其中苯基由选自以下的取代基任选取代卣素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、杂环基、面代烷基、氨基、烷基氨基、酰氨基、羧基；Y—为负离子。本专利技术还一方面提供一种缀合物，所述缀合物包含上述式I化合物。本专利技术另一个方面还提供用于生物样品染色的组合物，所述组合物包含上述式I化合物或其缀合物。本专利技术再一方面还提供了本专利技术式I化合物或其缀合物或组合物在对生物样品进行染色中的用途。本专利技术的化合物、缀合物或组合物对生物样品如核酸、白细胞、有核红细胞、网织红细胞等具有良好的染色作用，其形成的复合物发射波长在近红外区，避免了生物自身的荧光背景干扰，有助于提高检测结果的精确度，同时可在流式细胞分析仪上用作各种生物样品的染色剂。本专利技术的这些特征和优点以及其他特征和优点在参考以下附图和本专利技术的具体实施方式之后将变得显而易见。附图说明图1是Dye-l与含不同浓度鮭鱼精DNA结合后在磷酸盐緩冲液(PBS)中的荧光发射光谱。图2是Dye-1在PBS中与鲑鱼精DNA结合前后的荧光发射光谱。 图3是Dye-l与含不同浓度曱鱼肝RNA结合后在磷酸盐緩冲液(PBS)中的荧光发射光谱。图4是Dye-l在PBS中与曱鱼肝RNA结合前后的荧光发射光谱。 图5是Dye-2与含不同浓度鲑鱼精DNA结合后在磷酸盐緩冲液(PBS)中的荧光发射光谱。图6是Dye - 2与含不同浓度曱鱼肝RNA结合后在磷酸盐緩冲液(PBS)中的荧光发射光谱。图7是Dye-2在PBS中与鲑鱼精DNA结合前后的荧光发射光谱。 图8是Dye-2在PBS中与曱鱼肝RNA结合前后的荧光发射光谱。 图9是Dye-3在PBS中与鲑鱼精DNA结合前后的荧光发射光i普。 图0是Dye-3在PBS中与曱鱼肝RNA结合前后的荧光发射光谱。图11是Dye-0, Dye-1和Dye-2在PBS中与甲鱼肝RNA结合后的荧光发射光i普对比。具体实施例方式定义除另有说明外，本文中使用的术语具有以下含义。 本文中使用的术语"烷基，，，无论是单独使用还是与其他基团结 合使用，指包含1-18、优选1-12、更优选1-8、最优选l-6个碳原子 的直链烷基和支链烷基。如提及单个烷基如"正丙基，，，则只特指直 链烷基，如提及单个支链烷基如"异丙基"，则只特指支链烷基。例 如，"C"6烷基，，包括C"烷基、Cw烷基、曱基、乙基、正丙基、异 丙基和叔丁基。类似的规则也适用于本说明书中使用的其它基团。本文中使用的术语"烷氧基"是指与基团-O-结合的上述定义的 "烷基"，其中所述"烷基"包含1-18、优选1-12、更优选l-8、最优选l-6个碳原子，例如曱氧基、乙氧基、丙氧基等。 本文中使用的术语"闺素"包括氟、氯、溴和碘。本文中使用的术语"千基"是指-CH2-Ph基团。当用"任选取代"修饰千基时，指该千基可以未取代的形式存在，或者可被合适的取代 基在任何合适的位置取代。合适的取代基包括但不限于自素、羟基、 巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、杂环基、卣代烷基、氨基、 烷基氨基、酰氨基、羧基等，只要最终形成的化合物具有本专利技术期望 的性质。优选千基由囟素、羟基、巯基、氰基、硝基或氨基任选取代。本文中使用的术语"杂环基"是指包含3-14、优选3-10、更优选 3-6个环成员并包含一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子的单环或稠 环体系。本文中使用的术语"生物样品，，包括但不限于核酸、血液中的白 细胞、有核红细胞、网织红细月包等。本专利技术的化合物本专利技术提供了 一种具有以下通式I结构的化合物其中n为1、 2或3;X为C(CH3)2、 O、 S或Se;Ri和R2各自独立选自H、 OH、 Cw8烷基、Q—6烷基ORs、 d-烷基磺酸基、苯基或卣素；R3、 R4各自独立选自Cw8烷基COOR6、 18烷基0116、千基,其中千基由选自以下的取代基^f壬选取代卣素、羟基、巯基、氰基、 硝基、烷基、芳基、烷氧基、杂环基、由代烷基、氨基、烷基氨基、 酰氨基、羧基，条件是R3和R4不同时为苄基，且R3为千基时R4不为Cw8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有通式Ⅰ结构的化合物：　＊＊＊　Ⅰ　其中　ｎ为１、２或３；　Ｘ为Ｃ（ＣＨ↓［３］）↓［２］、Ｏ、Ｓ或Ｓｅ；　Ｒ↓［１］和Ｒ↓［２］各自独立选自Ｈ、ＯＨ、Ｃ↓［１－１８］烷基、Ｃ↓［１－６］烷基ＯＲ↓［５ ］、Ｃ↓［１－１８］烷基磺酸基、苯基或卤素；　Ｒ↓［３］、Ｒ↓［４］各自独立选自Ｃ↓［１－１８］烷基ＣＯＯＲ↓［６］、Ｃ↓［１－１８］烷基ＯＲ↓［６］、苄基，其中苄基由选自以下的取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基 、烷氧基、杂环基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰氨基、羧基，条件是Ｒ↓［３］和Ｒ↓［４］不同时为苄基，且Ｒ↓［３］为苄基时Ｒ↓［４］不为Ｃ↓［１－１８］烷基ＯＲ↓［６］；　Ｒ↓［５］为Ｃ↓［１－１８］烷基或者Ｈ；　Ｒ↓［６］为Ｃ↓ ［１－１８］烷基、Ｈ或者苯基，其中苯基由选自以下的取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、杂环基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰氨基、羧基；　Ｙ↑［－］为负离子。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邵建辉，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]