抗TIGIT-抗PD-L1双特异性抗体、其药物组合物及用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，本发明专利技术属于医药领域，涉及一种抗TIGIT

【技术实现步骤摘要】
抗TIGIT
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抗PD
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L1双特异性抗体、其药物组合物及用途


[0001]本专利技术属于医药领域，涉及一种抗TIGIT
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抗PD
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L1双特异性抗体、其药物组合物及用途。

技术介绍

[0002]T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains,TIGIT,又称WUCAM、Vstm3、VSIG9)是一种新型免疫抑制性受体，由活化的CD8
+
T和CD4
+
T细胞、自然杀伤(NK)细胞、调节性T细胞(Tregs)和滤泡辅助性T细胞表达。
[0003]TIGIT在肿瘤免疫中参与了一个复杂的调控网络，涉及多个免疫抑制受体(例如，CD96/TACTILE，CD112R/PVRIG)、一个竞争性共刺激受体(DNAM
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1/CD226)和多个配体(例如，CD155(PVR/NECL
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5)，CD112(Nectin
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2/PVRL2))。DNAM
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1、TIGIT和CD96在T细胞和NK细胞上表达，并以配体形式共享CD155。
[0004]TIGIT在肿瘤免疫抑制中的作用和PD
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1/PD
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L1类似，目前的研究已经提出了几种TIGIT介导的效应T细胞和NK细胞抑制作用的机制:(1)T/NK细胞表面TIGIT与CD155结合，使TIGIT胞内的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)磷酸化，直接转导抑制性信号；(2)TIGIT通过与DCs上的CD155结合，促进形成免疫耐受性DCs，降低白细胞介素(IL)
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12的产生和IL
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10的增加，间接抑制T细胞应答；(3)具有抑制作用的TIGIT以比共刺激受体CD226更高的亲和力竞争结合CD155，从而限制CD226介导的激活。另外，TIGIT还直接在细胞上顺式结合CD226，破坏其与CD155的同源二聚体的结合能力；(4)表达TIGIT的Tregs具有高度抑制性，TIGIT+Tregs激活后产生IL
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10和纤维蛋白原样蛋白2(Fgl2)，介导T细胞抑制；(5)来自核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,一种与结直肠癌相关的厌氧革兰氏共生菌)的Fap2蛋白，可直接与TIGIT结合，但不与CD226结合，从而抑制NK细胞和T细胞介导的肿瘤免疫，调节先天免疫反应。
[0005]程序性死亡因子1配体1(programmed death 1ligand 1，PD
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L1)又称CD274，为B7家族成员，是PD
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1的配体。PD
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L1属于I型跨膜蛋白，共290个氨基酸，包含1个IgV样区、1个IgC样区、1个跨膜疏水区和1个由30个氨基酸组成的胞内区。与其他B7家族分子不同的是，PD
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L1具有负向调节免疫应答的作用。研究发现，PD
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L1主要表达于活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞等，除淋巴细胞外，PD
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L1也表达于其它多种组织如胸腺、心脏、胎盘等的内皮细胞，以及各类非淋巴系如黑色素瘤、肝癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、头颈癌等(Akintunde Akinleye&Zoaib Rasool，Journal of Hematology&Oncology volume 12,Article number:92(2019))。PD
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L1在调节自身反应性T、B细胞和免疫耐受方面具有一定广泛性，并且在外周组织T和B细胞应答起作用。PD
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L1在肿瘤细胞上的高表达与癌症患者的不良预后相关。
[0006]双特异性抗体虽然是抗体药物研发的一个方向，但面临诸多挑战，比如临床前评价模型、表达量低、稳定性差、工艺复杂、质控差异性大等问题，因此一直以来双特异性抗体的研发困难重重。
[0007]因此，需要开发一种特异性佳、疗效好且易于制备的针对TIGIT和PD
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L1两个靶点的双特异性抗体。

技术实现思路

[0008]本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种抗TIGIT抗体，并基于该抗体构建了抗TIGIT
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抗PD
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L1的双特异性抗体。本专利技术人惊奇地发现，本专利技术的抗TIGIT抗体(也简称为抗体或本专利技术的抗体)和抗TIGIT
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抗PD
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L1双特异性抗体(也简称为双特异性抗体或本专利技术的双特异性抗体)与PD
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L1和TIGIT的结合亲和力高(甚至在一个或多个方面优于阳性对照抗体该双特异性抗体)，可以分别阻断PD
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L1与其配体PD
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1的结合以及TIGIT与其配体CD155/CD112的结合，减少或消除传递至细胞的抑制信号，在动物模型中施用本专利技术的抗体可以显著抑制肿瘤生长。由此提供了下述专利技术：
[0009]本专利技术的一个方面设计一种双特异性抗体，其包括：
[0010]靶向TIGIT的第一蛋白功能区，和
[0011]靶向不同于TIGIT的靶点(例如PD
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L1)的第二蛋白功能区；
[0012]其中：
[0013]所述第一蛋白功能区为抗TIGIT免疫球蛋白或其抗原结合片段；
[0014]所述抗TIGIT免疫球蛋白的重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的HCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的HCDR2以及氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的HCDR3；并且
[0015]所述抗TIGIT免疫球蛋白的轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的LCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示的LCDR2以及氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示的LCDR3。
[0016]轻链和重链的可变区决定抗原的结合；每条链的可变区均含有三个高变区，称互补决定区(CDR)，其中重链(H)的CDR包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，轻链(L)的CDR包含LCDR1、LCDR2、LCDR3。本专利技术的抗体或其抗原结合片段含有的CDR可根据本领域已知的各种编号系统确定。在某些实施方案中，本专利技术的抗体或其抗原结合片段含有的CDR优选地通过Kabat、Chothia，AbM HVR或IMGT编号系统确定。除非另有说明，否则本专利技术中抗体或其抗原结合片段含有的CDR优选地通过Kabat编号系统(kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5
th Ed.Public Health Service,National 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体，其包括：靶向TIGIT的第一蛋白功能区，和靶向不同于TIGIT的靶点(例如PD
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L1)的第二蛋白功能区；其中：所述第一蛋白功能区为抗TIGIT免疫球蛋白或其抗原结合片段；所述抗TIGIT免疫球蛋白的重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示的HCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示的HCDR2以及氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示的HCDR3；并且所述抗TIGIT免疫球蛋白的轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示的LCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示的LCDR2以及氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示的LCDR3。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接；优选地，所述连接片段为(GGGGS)m，m为正整数，例如1、2、3、4、5或6；优选地，所述连接片段为(GGGGS)nG，n为正整数，例如1、2、3、4、5或6；优选地，所述连接片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。3.根据权利要求1至2中任一权利要求所述的双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区为抗TIGIT免疫球蛋白或其抗原结合片段，并且所述第二蛋白功能区为靶点不同于TIGIT的单域抗体或单链抗体；优选地，所述单域抗体为抗PD
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L1单域抗体；优选地，所述单链抗体为抗PD
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L1单链抗体。5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区为抗TIGIT单链抗体，并且所述第二蛋白功能区为靶点不同于TIGIT的免疫球蛋白或其抗原结合片段；优选地，靶点不同于TIGIT的免疫球蛋白为抗PD
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L1免疫球蛋白。6.根据权利要求5所述的双特异性抗体，其中，所述抗PD
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L1单域抗体包含一个重链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示的HCDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示的HCDR2以及氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示的HCDR3；优选地，所述抗PD
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L1单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的双特异性抗体，其中，所述抗TIGIT免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示，并且其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示；优选地，所述抗TIGIT免疫球蛋白的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的双特异性抗体，其中，所述抗TIGIT免疫球蛋白或者靶点不同于TIGIT的免疫球蛋白的恒定区来自人抗体；
优选地，所述恒定区选自人IgG1、...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴爽，翟天航，黄威峰，彭绍岗，孙左宇，
申请(专利权)人：普米斯生物技术珠海有限公司，
类型：发明
国别省市：