CtSDR反应系统、基于CRISPR的RNA原位成像方法、研究方法及应用技术方案

本发明专利技术公开了CtSDR反应系统、基于CRISPR的RNA原位成像方法、研究方法及应用，涉及生物化学技术领域，CtSDR反应系统包括以下原料：Cas12a，crRNA，靶标，ds探针，F

【技术实现步骤摘要】
CtSDR反应系统、基于CRISPR的RNA原位成像方法、研究方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物化学
，具体为CtSDR反应系统、基于CRISPR的RNA原位成像方法、研究方法及应用。

技术介绍

[0002]原位杂交技术(in situ hybridization，ISH)是细胞内或者组织中DNA或者RNA成像检测的技术，自开发以来以实现了广泛的使用。其主要工作流程包括：使用地高辛标记的核酸探针于组织、细胞或染色体中的DNA进行杂交，再使用抗地高辛的一抗进行孵育。接着使用标记了HRP酶的二抗与一抗进行结合。反应完成后滴加催化底物3，3
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二氨基联苯胺(diaminobezidin，DAB)。HRP能够催化DAB生成褐色产物原位沉积在细胞上，以达到原位成像RNA的目的。
[0003]但是其存在以下弊端：1、检测过程需要多步流程，操作繁琐；2、检测总耗时较长；3、使用的DAB显色物质是一种致癌物，易引起肺癌、膀胱癌等。
[0004]DNA不仅作为编码遗传信息的容器，而且是工程纳米技术的强大而通用的生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CtSDR反应系统，其特征在于，CtSDR反应系统包括以下原料：Cas12a，crRNA，靶标，ds探针，F
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Q报告探针，RNase抑制剂和NEBuffer。2.根据权利要求1所述的CtSDR反应系统，其特征在于，CtSDR反应系统中，采用miRNA
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21作为靶标。3.根据权利要求1所述的CtSDR反应系统，其特征在于，CtSDR反应系统中，Cas与crRNA的摩尔比为2:1；采用NEBuffer3.0；反应时间控制在60min。4.根据权利要求1所述的CtSDR反应系统，其特征在于，CtSDR反应系统中，TS和NTS链在NEBuffer3.0的离子环境下变性退火形成ds探针，即dsDNA
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1，crRNA用于结合Cas12a蛋白和dsDNA
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1。5.一种基于权利要求1～4任一所述的CtSDR反应系统用于组织中病毒相关致癌RNA成像。6.一种基于CRISPR的RNA原位成像方法，其特征在于，步骤如下：A、将MCF
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7和MCF
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10A细胞在室温下用固定溶液固定；B、固定后，将细胞用含有Triton
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X 100的PBS进行透化；然后用PBS洗涤细胞；C、将权利要求1～4任一所述的CtSDR反应系统与细胞进行孵育；D、孵育后使用DAPI对细胞核进行染色，再进行共聚焦成像。7.一种基于CRISPR的RNA原位成像研究方法，其特征在于，步骤如下：一、研究Cas12a对促进链置换反应效率的效果，提出权利要求1～4任一所述的CtSDR反应系统；二、构建基于CtSDR的液相进行RNA检测方法；三、优化实验参数，并在优化条件下评估多目标检测方法对多重靶标的分析检测性能；四、进行交叉反应以验证多重靶标...

【专利技术属性】
技术研发人员：程伟，丁世家，程小雪，张德才，杜丽，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：