【技术实现步骤摘要】
用于CRISPR级联核酸检测系统的核酸分子及应用
[0001]本专利技术涉及生物检测领域,特别是涉及用于CRISPR级联核酸检测系统的核酸分子及应用。
技术介绍
[0002]核酸体外扩增技术在分子生物和生物分析等领域是一项重要的技术,可用于定性、定量地分析和检测微量核酸,其在临床医学、检验医学、分子生物学、基因组学及食品安全等相关的各个领域发挥着重要的作用,是生命科学发展不可或缺的一种重要检验方法。随着生物技术在临床和现场检测方面要求的不断提升,越来越多的研究人员开始把目光专注于核酸体外扩增新技术的研究。聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)由于其特异性强,灵敏度高等优点,是目前应用最为广泛的核酸体外扩增技术。基于PCR反应进一步发展出的各种各样的荧光定量PCR方法,正是使用荧光探针整合到扩增反应中,通过荧光的强度或者时间分辨来实时或者最终反映体系中核酸的产量,是目前应用最广和最稳定、工业化程度最高的核酸检测手段。
[0003]虽然PCR技术已经应用于分子生物学等各个领域,但是该技术需要通过循环多次的温度升降变化才能实现核酸扩增,因此,热循环仪是不可或缺的设备。然而,由于热循环仪对升降温速度要求高、体积大、价格较高、维护较精细等,使其在需要迅速出结果的基层的推广和现场检测中受到了明显的限制。因此,陆续出现了不同的等温和低温扩增技术,这些技术反应温度单一,不受热循环仪的制约,正逐渐弥补PCR无法覆盖的现场应用场景。
[0004]无论是PCR还是等温扩增技术,都是基于 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于CRISPR级联核酸检测系统的核酸分子,其特征在于,该核酸分子包括聚合酶结合前导区、触发核酸酶切割区和外切聚合封闭区;所述聚合酶结合前导区具有DNA聚合酶结合位点,所述触发核酸酶切割区为具有反式核酸内切酶结合切割位点的单链核酸序列,所述外切聚合封闭区的3
’
端被修饰以避免发生非特异性外切聚合反应;所述触发核酸酶切割区被切割后,所述聚合酶结合前导区和所述外切聚合封闭区连接,结合于所述聚合酶结合前导区的DNA聚合酶可使外切聚合封闭区由5
’
端向3
’
端延伸,合成可被CRISPR报告系统的报告sgRNA识别的靶序列。2.根据权利要求1所述的核酸分子,其特征在于,所述触发核酸酶切割区可被CRISPR触发系统的Cas酶切割,所述CRISPR触发系统中的触发sgRNA的靶向结构域与待测靶标核酸互补。3.根据权利要求1所述的核酸分子,其特征在于,所述聚合酶结合前导区选自以下序列:CCTCCTCGTCGACGAGGAGG
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(SEQ ID NO:18)GCAAACACCGCGGTGTTTGC
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(SEQ ID NO:19)AATCCCAATCCCATGGGATTGGGATT
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(SEQ ID NO:20)。4.根据权利要求1所述的核酸分子,其特征在于,所述触发核酸酶切割区选自以下序列:TTTTTTT,TTTTTTTTT,GACTTTTTTTTTGTT(SEQ ID NO:21),或CGTTAGGGTTAGGGTTAGGG(SEQ ID NO:22)。5.根据权利要求4所述的核酸分子,其特征在于,所述触发核酸酶切割区为TTTTTTT时,由5
’
端向3
’
端的第4位碱基T被修饰为dU;所述触发核酸酶切割区为TTTTTTTTT时,由5
’
端向3
’
端的第3位碱基T被修饰为dU;所述触发核酸酶切割区为GACTTTTTTTTTGTT(SEQ ID NO:21)时,由5
’
端向3
’
端的第6位碱基T被修饰为dU。6.根据权利要求5所述的核酸分子,其特征在于,所述触发核酸酶切割区为GACTTTTTTTTTGTT(SEQ ID NO:21),由5
’
端向3
’
端的第6位碱基T被修饰为dU,所述聚合酶结合前导区为GCAAACACCGCGGTGTTTGC(SEQ ID NO:19)。7.根据权利要求1所述的核酸分子,其特征在于,所述外切聚合封闭区的序列长度≤15nt。8.根据权利要求7所述的核酸分子,其特征在于,所述外切聚合封闭区选自以下序列:CGCAGCACATCCC
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(SEQ ID NO:6)CGCAGCACATCCCTT
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(SEQ ID NO:7)。9.根据权利要求8所述的核酸分子,其特征在于,所述外切聚合封闭区的3
’
端具有以下修饰:ddNTP修饰,invert
‑
dT修饰,或C3
‑
spacer修饰。10.根据权利要求1所述的核酸分子,其特征在于,所述外切聚合封闭区的5
’...
【专利技术属性】
技术研发人员:潘伟业,彭琼芳,刘敏,樊硕,孙阳,陈重建,
申请(专利权)人:北京迅识生物科技有限公司浙江迅识生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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