一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统及应用技术方案

本发明专利技术提供一种检测尿嘧啶

【技术实现步骤摘要】
一种检测尿嘧啶
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DNA糖基化酶的熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统及应用


[0001]本专利技术属于酶检测
，具体涉及一种检测尿嘧啶
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DNA糖基化酶的熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统及应用。

技术介绍

[0002]本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]灵敏和准确监测活细胞内源性尿嘧啶
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DNA糖基化酶(UDG)对了解DNA修复途径和发现抗癌药物至关重要。传统的UDG活性测定方法包括凝胶电泳法、放射自显影和质谱(MS)，这些方法存在着放射性污染、仪器昂贵和灵敏度差的问题。此外，一些蛋白酶介导的等温信号扩增策略，如指数扩增反应(EXPAR)、滚环扩增(RCA)、外切酶介导的信号扩增、CRISPR/Cas12a催化的信号扩增等方法也用于UDG活性的检测，但是这些酶促反应往往受到狭窄的pH范围和离子浓度的限制，而且蛋白质酶容易受到周围微环本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测尿嘧啶
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DNA糖基化酶的熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统，其特征在于，所述熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统，所述系统至少包括双链检测底物，三链底物复合物，以及燃料探针和报告探针；其中，所述双链检测底物由检测探针和触发探针互补构成，所述检测探针其核苷酸序列中修饰有尿嘧啶；当检测体系中存在UDG时，其识别尿嘧啶碱基，并通过水解尿嘧啶碱基和DNA磷酸骨架之间的N
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糖苷键将其从双链检测底物中分离出来，从而产生一个脱嘌呤/脱嘧啶位点；随后，检测体系中的APE1切割检测底物中的AP位点，释放触发探针；所述三链底物复合物由连接探针、辅助探针1以及辅助探针2构成；所述连接探针和燃料探针均包含结构域b和结构域g，结构域b和g为具有催化活性的DNAzyme单元；所述报告探针至少包含一个腺苷核糖核苷酸，且报告探针两侧标记有荧光基团和猝灭基团。2.如权利要求1所述的检测尿嘧啶
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DNA糖基化酶的熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统，其特征在于，释放的自由的触发探针与上述连接探针的趾端区域b结合，并通过趾端驱动链置换将辅助探针1从连接探针上置换下来，形成一个新的三链中间体，同时暴露连接探针的立足点区域d；然后，燃料探针与连接探针上新暴露的立足点区域d结合启动新的立足点辅助的分支迁移反应，导致辅助探针2和触发探针的释放以及连接探针和燃料探针的组装；释放的自由触发探针可以与新的连接探针结合，启动循环链置换反应，从而使连接探针/辅助探针1/辅助探针2复合物分解，产生丰富的连接探针/燃料探针双链；所述连接探针/燃料探针双链的两端包含结构域b和结构域g。3.如权利要求1所述的检测尿嘧啶
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DNA糖基化酶的熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统，其特征在于，所述荧光基团为6
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羧基荧光素，所述猝灭基团为黑洞猝灭剂1。4.如权利要求1所述的检测尿嘧啶
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DNA糖基化酶的熵驱动哑铃型DNAzyme组装回路系统，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琛琛，吕福慧，罗细亮，
申请(专利权)人：青岛科技大学，
类型：发明
国别省市：