用于检测目标RNA或单链DNA的组合物及其应用制造技术

本申请提供一种用于检测目标RNA或单链DNA的组合物及其应用，该组合物包括第一发夹探针和第二发夹探针；当目标RNA或单链DNA从3

【技术实现步骤摘要】
用于检测目标RNA或单链DNA的组合物及其应用


[0001]本申请涉及医学、生物、纳米
，尤其涉及用于检测目标RNA或单链DNA的组合物及其应用。

技术介绍

[0002]人体内生物标志物的检测，一直以来作为疾病诊断的标准之一，随着生物信息技术的发展，越来越多的肿瘤相关指标被提出，miRNA作为一种非编码RNA，被发现在多种癌症患者中含量上升，但RNA的易降解性导致很难迅速快捷进行人体内的miRNA定量检测分析，如何快速简便的检测miRNA并提高检测效率以及对其精准定量成为了miRNA检测在临床应用中的难题，为了解决这一问题，出现了利用基于DNA链置换进行miRNA荧光检测的技术，DNA链置换反应是利用DNA分子杂交的自由能差异，以一条单链序列将另一条单链从杂交DNA双螺旋结构中取代下来用于后续反应，具有精确的序列正交性。但现有的DNA链置换技术操作复杂、耗时长，不利于大面积用于临床筛查，检测效率低且无法定量。

技术实现思路

[0003]针对现有的DNA链置换技术存在的问题，本申请提供一种用于检测目标RNA或单链DNA的组合物及其应用。
[0004]第一方面，本申请提供一种用于检测目标RNA或单链DNA的组合物，所述目标RNA或单链DNA从3
’
端起包括连续的序列a、序列b、序列c，该组合物包括：
[0005]第一发夹探针；所述第一发夹探针包括第一环部、第一茎部和第一尾部单链，两端分别设有淬灭剂和荧光基团，第一茎部未打开时，荧光基团受到淬灭剂抑制，不发光；第一环部包含与序列a互补的序列a1，第一茎部一侧为与序列b互补的序列b1，第一尾部单链包含与序列c互补的序列c1，序列a1、b1、c1组成连续序列；和
[0006]第二发夹探针；所述第二发夹探针包括第二环部、第二茎部和第二尾部单链d；第二茎部与第二尾部单链连接的一侧与第一环部互补，第二环部包含序列b；所述第一茎部与序列b1相对的一侧包含与所述第二尾部单链d互补的序列d1。
[0007]在本申请的一些实施方式中，所述目标RNA或单链DNA的长度为15～30个碱基；优选的，所述目标RNA或单链DNA为miRNA，从3
’
端起由连续的序列a、序列b、序列c组成。
[0008]在本申请的一些实施方式中，第一尾部单链位于第一发夹探针的3
’
端；第二尾部单链d位于第二发夹探针的3
’
端。
[0009]在本申请的一些实施方式中，所述第一尾部单链包含3～5个碱基。
[0010]在本申请的一些实施方式中，序列a1包含6～8个碱基。
[0011]在本申请的一些实施方式中，第二尾部单链包含7～10个碱基。
[0012]第二方面，本申请提供上述用于检测目标RNA或单链DNA的组合物的应用，其特征在于，该应用包括：
[0013]A)定量检测目标RNA或单链DNA的非疾病治疗和/或诊断的应用；或
[0014]B)在制备目标RNA或单链DNA治疗和/或诊断产品中的应用。
[0015]第三方面，本申请提供一种适用于目标RNA或单链DNA定量检测的试剂盒，包括上述组合物。
[0016]第四方面，本申请提供一种非疾病诊断目的的目标RNA或单链DNA定量检测方法，包括：
[0017]获取受试者样本；
[0018]采用上述组合物处理样本，持续激发荧光；
[0019]获取荧光信号强度随时间的变化关系曲线，通过荧光信号强度随时间的变化关系曲线计算样本的含量。
[0020]第五方面，本申请提供一种用于定量检测目标RNA或单链DNA的系统，包括：
[0021](1)采集模块：获取受试者样本；
[0022](2)反应模块：采用上述组合物与样本进行反应；
[0023](3)检测模块：获取荧光信号强度随时间的变化关系曲线，通过荧光信号强度随时间的变化关系曲线计算样本的含量。
[0024]与现有技术相比，本申请具有以下优点和有益效果：
[0025]本申请提供的组合物在目标RNA或单链DNA存在的情况下，能够发生两步链置换反应，持续激发荧光，基于此组合物的RNA定量检测方法操作简单、检测效率高。
附图说明
[0026]附图用来提供对本申请技术方案的理解，并且构成说明书的一部分，与本申请的实施例一起用于解释本申请的技术方案，并不构成对本申请技术方案的限制。
[0027]图1为本申请组合物与目标RNA或单链DNA的反应原理图。
[0028]图2为本申请双立足点的HP1
‑
FAM/BHQ与传统单立足点的HP1
#
‑
FAM/BHQ与目标RNA或单链DNA的反应速率对比图；其中：Blank
‑1#
为传统单立足点HP1
#
‑
FAM/BHQ不加入miRNA时荧光强度；Blank
‑2#
为本申请双立足点的HP1
‑
FAM/BHQ不加入miRNA时荧光强度；miR21
‑1#
为传统单立足点HP1
#
‑
FAM/BHQ加入miRNA(Mimic
‑
miR21)时的荧光强度；miR21
‑2#
为本申请双立足点的HP1
‑
FAM/BHQ加入miRNA(Mimic
‑
miR21)时的荧光强度。
[0029]图3为本申请实施例1加入HP1
‑
FAM/BHQ和HP2后某浓度的Mimic
‑
miR21测试样本的荧光强度随时间的变化曲线。
[0030]图4、图5为不同浓度(单位为nM)的Mimic
‑
miR21测试样本的荧光强度变化曲线。
[0031]图6为本申请的凝胶电泳图；其中：从左到右计，条带上的物质依次为:Marker(标准条带)；HP1
‑
FAM/BHQ；HP2；Mimic
‑
miR21；HP1
‑
FAM/BHQ+HP2；HP1
‑
FAM/BHQ+Mimic
‑
miR21；HP1
‑
FAM/BHQ+HP2+Mimic
‑
miR21。
具体实施方式
[0032]为了使本
的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范
围。
[0033]本申请的说明书和权利要求书及所述附图中的术语“第一”、“第二”、“第三”和“第四”等是用于区别不同对象，而不是用于描述特定顺序。此外，术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测目标RNA或单链DNA的组合物，所述目标RNA或单链DNA从3
’
端起包括连续的序列a、序列b、序列c，其特征在于，所述组合物包括：第一发夹探针；所述第一发夹探针包括第一环部、第一茎部和第一尾部单链，两端分别设有淬灭剂和荧光基团，第一茎部未打开时，荧光基团受到淬灭剂抑制，不发光；第一环部包含与序列a互补的序列a1，第一茎部一侧为与序列b互补的序列b1，第一尾部单链包含与序列c互补的序列c1，序列a1、b1、c1组成连续序列；和第二发夹探针；所述第二发夹探针包括第二环部、第二茎部和第二尾部单链d；第二茎部与第二尾部单链连接的一侧与第一环部互补，第二环部包含序列b；所述第一茎部与序列b1相对的一侧包含与所述第二尾部单链d互补的序列d1。2.根据权利要求1所述的用于检测目标RNA或单链DNA的组合物，其特征在于：所述目标RNA或单链DNA的长度为15～30个碱基。3.根据权利要求2所述的用于检测目标RNA或单链DNA的组合物，其特征在于：所述目标RNA为miRNA，从3
’
端起由连续的序列a、序列b、序列c组成。4.根据权利要求1所述的用于检测目标RNA或单链DNA的组合物，其特征在于：第一尾部单链位于第一发夹探针的3
’
端；第二尾部单链位于第二发夹探针的3
’

【专利技术属性】
技术研发人员：李新，谷传奇，韩丽婷，孙格格，王鑫宇，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：