基于水凝胶微球的单细胞多组分核酸荧光定量分析方法技术

本发明专利技术公开了基于水凝胶微球的单细胞多组分核酸荧光定量分析方法，包括制备多种靶标核酸分子识别捕获探针；采用微流控芯片制备包裹单细胞且负载捕获探针的水凝胶微液滴；经紫外光照水凝胶微液滴固化成水凝胶微球，捕获探针被共价结合在水凝胶微球骨架上；细胞裂解，靶标核酸分子从细胞中释放，被捕获探针识别并原位引发催化发卡自组装反应，放大靶标核酸分子信号；经滚环扩增反应对靶标核酸分子信号二次放大；引入荧光标记的报告序列，对滚换扩增产物荧光标记；通过共聚焦断层扫描对水凝胶微球中的靶标核酸分子引起的荧光信号定量检测。本发明专利技术适用于共聚焦断层扫描荧光定量检测和流式细胞术检测，有望用于大量细胞单细胞多组分核酸荧光定量分析。分核酸荧光定量分析。

【技术实现步骤摘要】
基于水凝胶微球的单细胞多组分核酸荧光定量分析方法


[0001]本专利技术具体涉及一种基于水凝胶微球包裹封装单细胞进行原位裂解，利用水凝胶微球中负载的特异性检测探针对细胞裂解液中的目标核酸分子进行识别、捕获、信号放大检测的荧光定量分析方法，属于单细胞成分分析


技术介绍

[0002]单个细胞内多组分关键生物分子的准确定量分析，对于揭示细胞异质性，发现“罕见样本”，区分细胞亚型以及确定肿瘤细胞分型，甚至是癌症早期诊断都具有重要意义。
[0003]液滴微流控技术通过形成油包水的微液滴实现对单个目标细胞的分离与封装，避免了检测过程中目标细胞与外界环境接触对样品造成的污染，因此成为单细胞分析的有力工具。
[0004]Guo等人
[1]基于微流控平台与DNA自组装信号放大反应联用发展了一种高通量单细胞中单种miRNA荧光定量检测方法。单个细胞与细胞裂解液，靶标核酸分子的DNA检测探针共同封装在单分散的油包水微液滴中，细胞裂解后释放靶标miRNA，引起DNA检测探针的催化发卡自组装反应，产生荧光信号的恢复。利用实验室搭建的光路本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于水凝胶微球的单细胞多组分核酸荧光定量分析方法，其特征在于，包括：制备多种靶标核酸分子识别捕获探针；采用微流控芯片制备包裹单细胞且负载所述捕获探针的水凝胶微液滴；经紫外光照水凝胶微液滴固化成水凝胶微球，所述捕获探针被共价结合在水凝胶微球的骨架上；细胞裂解，靶标核酸分子从细胞中释放，被所述捕获探针识别并原位引发催化发卡自组装反应，放大靶标核酸分子的信号；经进一步的滚环扩增反应对靶标核酸分子信号二次放大；引入荧光标记的报告序列，对上述滚换扩增反应的产物荧光标记；通过共聚焦断层扫描实现对水凝胶微球中的靶标核酸分子引起的荧光信号的定量检测。2.如权利要求1所述的基于水凝胶微球的单细胞多组分核酸荧光定量分析方法，其特征在于，所述制备多种靶标核酸分子识别捕获探针：所述捕获探针与N3‑
PEG
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acrylate高分子，基于捕获探针末端修饰的DBCO与N3基团之间的点击反应共价连接，得到PEG
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acrylate化的捕获探针。3.如权利要求2所述的基于水凝胶微球的单细胞多组分核酸荧光定量分析方法，其特征在于，采用流动聚焦型微流控芯片制备包裹单细胞且负载所述捕获探针的PEG
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DA水凝胶前聚体溶液微液滴；经紫外光照该PEG
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DA水凝胶前聚体溶液微液滴中的PEG
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DA分子之间发生自由基聚合反应，形成三维网络结构，微液滴固化成水凝胶微球，所述PEG
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acryl...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘颖，鞠熀先，王莹菲，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：