抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用，使用eIF5A羟脯氨酸修饰特异性抑制剂Ciclopirox处理细胞后，可以抑制PRRSV的增殖。以PAMs、CRL

【技术实现步骤摘要】
抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用


[0001]本专利技术涉及一种抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用，属于动物疫病防控


技术介绍

[0002]猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)也称蓝耳病，1987年首先在北美发现，此后在世界范围内广泛传播。1995年我国首次报道PRRS以来，该病在国内长期流行，是影响我国养猪业的重大传染病之一。PRRS是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的一种以母猪流产和各年龄段猪呼吸障碍为主要特征的病毒性传染病。PRRSV是单股正链RNA病毒，属于套式病毒目(Nidovirales)，动脉炎病毒科(Arteriviridae)，动脉炎病毒属(Arteriviridae)，基因组全长为15.4kb。PRRS存在以下特征导致防控困难：一是存在持续性感染；二是病毒高度变异；三是抗体不能产生有效的免疫保护。由于PRRSV变异较快，基因型、亚基因型多，因此使用疫苗免疫防控效果并不理想。目前的防控手段多是从猪场环境消毒、提高生猪免疫力等方面来进行。因此，针对性开发相关防控治疗用药是十分紧迫的科研任务。
[0003]真核生物翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factors,eIFs)是一类在真核生物蛋白翻译过程中发挥重要作用的蛋白家族。大量研究表明，病毒可以通过调控eIFs表达及修饰，抑制核糖体对宿主mRNA招募，创造有利于自身复制的环境。已有研究证实真核生物翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factors5A,eIF5A)与病毒复制密切相关。艾滋病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)辅助因子Rev蛋白能够与eIF5A结合，持续的穿梭于宿主细胞的核质之间，介导了未完全剪接的病毒mRNA的核质运输，eIF5A功能缺失突变体阻断了Rev蛋白的核输出和HIV的复制。用酵母双杂交技术进一步发现HIV的Rev蛋白通过eIF5A与核糖体蛋白L5形成复合物而获得mRNA的核输出路径，用核糖体蛋白L5抗体处理细胞会导致病毒mRNA不能正常运输至细胞质，病毒结构蛋白不能正常表达。
[0004]eIF5A是目前唯一已知的具有羟脯氨酸修饰的蛋白。羟脯氨酸残基是eIF5A发挥生物学功能的重要基团，在病毒复制过程中也发挥重要作用。由于eIF5A羟脯氨酸修饰包含严格的赖氨酸聚合酶(Deoxyhypusine synthase，DHPS)和赖氨酸羟化酶(Deoxyhypusine hydroxylase，DOHH)两个酶催化步骤，化合物Ciclopirox(CPX)，中文名为环吡酮胺，能够抑制DOHH活性，从而抑制eIF5A羟脯氨酸修饰的形成。羟脯氨酸修饰抑制剂处理细胞导致HIV不能复制，埃博拉病毒滴度下降30％，这些结果提示eIF5A羟脯氨酸修饰是新型抗病毒药物靶标。PRRSV与HIV同为RNA病毒，但是，Ciclopirox是否会对PRRSV的复制产生影响目前尚未报道。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用。
[0008]所述抑制剂Ciclopirox为eIF5A羟脯氨酸修饰的特异性抑制剂。
[0009]所述的抑制剂Ciclopirox在制备抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的药物中的应用。
[0010]其中，抑制剂Ciclopirox处理细胞的浓度为5～10mmol/L；
[0011]优选的，抑制剂Ciclopirox处理细胞的浓度为10mmol/L。
[0012]本专利技术有益效果：
[0013]本专利技术涉及一种抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用，使用eIF5A羟脯氨酸修饰特异性抑制剂Ciclopirox处理细胞后，可以抑制PRRSV的增殖。本专利技术以MARC
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145细胞(非洲绿猴胚胎肾细胞)，猪肺泡巨噬细胞(Porcine Alveolar Macrophages,PAMs)和稳定表达CD163受体的猪肺泡巨噬细胞系CRL
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CD163细胞为例，利用eIF5A羟脯氨酸修饰的特异性抑制剂Ciclopirox处理细胞后接种PRRSV，通过检测PRRSVN蛋白的表达以及PRRSV滴度的变化情况，可知抑制剂Ciclopirox针对PRRSV的增殖具有抑制作用。基于这一结果，该抑制剂为PRRS的防控奠定技术基础，同时也为抗PRRSV新药的筛选提供新的思路和借鉴。
附图说明
[0014]图1不同浓度抑制剂Ciclopirox对细胞活力的影响。
[0015]图2Ciclopirox(CPX)处理细胞对PRRSV滴度的影响。
[0016]图3IFA检测Ciclopirox(CPX)处理细胞对PRRSV增殖的影响。
[0017]图4Western Blot验证Ciclopirox(CPX)处理细胞对PRRSV N蛋白表达的影响。
具体实施方式
[0018]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。如无特别说明，实施例中所涉及的仪器设备均为常规仪器设备；涉及试剂均为市售常规试剂；涉及试验方法均为常规方法。
[0019]涉及的生物材料：
[0020]HN07
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1株是PRRSV高致病性毒株，由河南省农业科学院动物免疫学重点实验室分离鉴定(GeneBank登陆号为：KX766378.1)并惠赠；MARC
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145细胞，一种常用实验细胞，可从公开渠道获得。PAMs采自4～6周无特定病原体仔猪(PRRSV、PCV2、PRV、CSFV、PPV等抗原、抗体检测均为阴性)。CRL
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CD163细胞为稳定表达CD163受体的猪肺泡巨噬细胞系，由西北农林科技大学惠赠。相关引物合成及测序，由生物工程(上海)股份有限公司提供和完成。
[0021]涉及的实验试剂：
[0022]eIF5A羟脯氨酸修饰特异性抑制剂Ciclopirox购自MCE公司。DMEM、RPMI1640培养基、EDTA
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胰蛋白酶、DEPC水、尿素、Trisbase、RIPA裂解液购自索莱宝生物科技有限公司，胎
牛血清购自杭州四季青公司，PVDF膜、DAPI(4,6
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diamidino
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phenylindole
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制剂Ciclopirox在猪繁殖与呼吸综合征中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂Ciclopirox为eIF5A羟脯氨酸修饰的特异性抑制剂。3.如权利要求1或2所述的抑制剂Ciclopirox在制备抑制猪繁殖与呼吸综合征病...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华玮，董青，杜娟，井汇源，马辉，赵孟孟，王旭英，
申请(专利权)人：河南牧业经济学院，
类型：发明
国别省市：