免疫疗法组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含自然杀伤(NK)细胞和γδT细胞的特别用于过继性免疫疗法的组合物。本发明专利技术还提供了用于制备此类组合物的方法，其包括使样品与抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体接触。使样品与抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体接触。使样品与抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体接触。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫疗法组合物


[0001]本专利技术涉及包含自然杀伤(NK)细胞和γδT细胞的特别用于过继性免疫疗法的组合物。本专利技术还提供了用于制备此类组合物的方法，其包括使样品与抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体接触。

技术介绍

[0002]非细胞免疫疗法(如，免疫检查点抑制剂)和细胞免疫疗法(如，靶向αβCAR
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T细胞的CD19)的近期成功促进了利用未修饰的和基因工程化的Treg、iNK
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T、γδT细胞、NK细胞和巨噬细胞来开发新型免疫治疗方法。制造此类先进的治疗药物产品(ATMP)需要复杂的过程，所述过程利用各种细胞因子、培养基、刺激珠和饲养细胞的组合。由于复杂的制造过程和潜在的后勤挑战，目前这些疗法的广泛应用既麻烦又昂贵。
[0003]例如，绝大多数CAR修饰的αβT细胞疗法仅限于自体环境，并且制造运行的成功很大程度上预先取决于供体材料的质量。存在与这些疗法相关的若干个缺点。第一，αβT细胞受MHC限制，从而导致在同种异体环境中发生致命的移植物抗宿主病。第二，大多数CAR
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T疗法都与不需要的副作用有关，诸如细胞因子释放综合征、神经毒性、中靶脱瘤毒性。第三，αβT细胞向实体瘤部位的迁移不良阻碍了实体瘤靶向方法的治疗效果。
[0004]为了帮助在同种异体环境中使用这种突破性技术，科学领域正在寻求两种主要策略：(1)通过使用复杂的基因编辑方法(如通过敲除天然αβTCR)使T细胞不受MHC限制或(2)利用固有的不受MHC限制的细胞类型(即NK细胞和γδT细胞)作为递送媒介物来产生真正的同种异体细胞产品。这两种方法都有其自身的挑战：基因编辑使制造过程和质量控制步骤具有挑战性，而不受限制的细胞类型的培养则需要明确定义的细胞因子环境和/或饲养细胞系统。虽然存在从血源或细胞系中培养NK细胞的确立方法，但这些方法中的大多数都包括使用同种异体饲养细胞，所述饲养细胞需要被辐照并且在之后去除。大多数方法甚至使用辐照的肿瘤细胞系(K562)，这些细胞系在制造期间使用遗传引入的膜结合细胞因子和共刺激分子作为饲养层。在一些情况下(即，NK细胞疗法)，所述疗法的广泛、现成的应用受到细胞产品的较差的低温保存和随后降低的细胞毒性潜能的阻碍。
[0005]先前已使用添加外源细胞因子描述了γδT细胞的扩增方法，例如参见WO2017/072367和WO2018/212808。还描述了使用药理学修饰形式的羟甲基丁
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烯基焦磷酸酯(HMBPP)或临床批准的氨基双膦酸酯来扩增患者自身γδT细胞的方法。通过这些方法，超过250名癌症患者得到了治疗，看似安全，但只有罕见发生完全缓解。仍然需要能够扩增大量γδT细胞的方法。
[0006]NK细胞和γδT细胞是特别有吸引力的免疫治疗剂，因为它们不受MHC限制，并且它们的激活不依赖于MHC结合抗原的识别。尽管它们共享一些特定特征(例如，区分健康细胞和恶性细胞的能力、天然细胞毒性受体的存在等)，但它们在进化上也是保守的，并且每种细胞类型都具有独特的免疫学性质。这包括但不限于每种细胞类型的独特作用机制，诸如缺失通过NK细胞的自身和NCR配体识别的概念，以及它们与抗体合作执行抗体介导的细胞
细胞毒性(ADCC)的潜力。除了NCR，Vδ1细胞还使用不受MHC限制的TCR来识别肿瘤相关抗原并迁移到特定组织部位。Vδ2 T细胞具有独特的不变TCR，使它们能够通过感知甲羟戊酸途径代谢活性的增加来识别恶性细胞，这一特征与具有突变的p53癌基因的恶性细胞有关。除了广谱的靶标识别和细胞毒性模式之外，先天性淋巴细胞还将炎症与持续的适应性响应联系起来。例如，γδT细胞可以与B细胞相互作用并且促进免疫球蛋白(IG)类别转换，从而导致对肿瘤抗原的抗体响应改善。NK和γδT细胞两者都吸引抗原呈递细胞并且使抗原呈递细胞成熟，从而正式将供体细胞与患者自身的免疫系统联系起来，并有可能启动持久的免疫响应。NK细胞和γδT细胞产生的炎性环境进一步吸引并且激活了常规的αβT细胞。
[0007]虽然NK细胞非常有效地对抗感染性疾病(例如，由病毒、细菌或真菌引起)，但Vδ1γδT细胞是用于识别和防止CMV再激活的基础(免疫受损患者，例如移植受者和接受过重度治疗的癌症患者的重要问题)。此外，CMV激活的Vδ1γδT细胞显著降低了移植后接受免疫抑制剂治疗的患者中继发性恶性肿瘤的风险。
[0008]Vδ2γδT细胞通过识别HMBPP(非甲羟戊酸途径的一种非常高亲和力的中间体，主要由原核生物和一些真核细胞类型使用)，在识别和消除分枝杆菌感染(mycobacterial infection)方面是至关重要的。Vδ2细胞也识别原生动物，并极大地促进针对疟疾感染的免疫响应。
[0009]理想情况下，现成的同种异体细胞疗法产品将组合上述每种细胞类型所独有的所有有点：增强对恶性细胞的细胞毒性、对病毒和细菌感染的广泛保护等；并且同时减轻每种单一细胞产品的限制，从而降低抗原漂移、肿瘤逃逸或免疫抑制的风险。目前这种组合疗法是不可用的，并且将需要对每种细胞类型进行单独的制造运行，然后以预定比例混合细胞。本专利技术旨在克服这个主要的制造挑战。

技术实现思路

[0010]根据本专利技术的第一方面，提供了包含自然杀伤(NK)细胞和γδT细胞的经经分离的组合物，其中组合物中存在的γδT细胞的至少40％是CD56
亮
。
[0011]根据本专利技术的另一方面，提供了包含NK细胞和γδT细胞的经经分离的组合物，其中组合物中存在的γδT细胞的至少50％表达CD56。
[0012]根据本专利技术的另一方面，提供了包含细胞的经经分离的组合物，其中至少90％的细胞由NK细胞和γδT细胞组成，其中至少10％的细胞是Vδ1 T细胞，至少5％的细胞是Vδ2 T细胞，并且至少30％的细胞是NK细胞。
[0013]根据本专利技术的另一方面，提供了扩增不受MHC限制的非γδ+淋巴细胞的方法，其包括在存在白介素
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15(IL
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15)和不存在白介素
‑
4(IL
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4)的情况下，使用抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体或其片段来刺激包含γδT细胞和NK细胞的混合细胞群，并且培养混合细胞群。
[0014]根据本专利技术的另一方面，提供了制备包含细胞群的组合物的方法，所述细胞群富集不受MHC限制的淋巴细胞，其中所述方法包括：
[0015](1)在不存在IL
‑
4的情况下，在所述培养的第一天，在以下物质的存在下，培养从受试者获得的样品：
[0016](i)抗Vδ1抗体或其片段；和
[0017](ii)IL
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15；以及
[0018](2)分离从样品中培养的细胞群。
[0019]根据本专利技术的另一方面，提供了可通过如本文所定义的方法获得的组合物。
[0020]根据本专利技术的另一方面，提供了通过如本文所定义的方法获得的组合物。
[0021]根据本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含自然杀伤(NK)细胞和γδT细胞的经分离的组合物，其中所述组合物中存在的所述γδT细胞的至少40％是CD56
亮
。2.一种包含NK细胞和γδT细胞的经分离的组合物，其中所述组合物中存在的所述γδT细胞的至少50％表达CD56。3.如权利要求1或权利要求2所述的经分离的组合物，其中所述组合物中存在的所述细胞的至少90％由NK细胞和γδT细胞组成。4.如权利要求1至3中任一项所述的经分离的组合物，其中所述组合物中存在的所述细胞的至少30％是γδT细胞。5.如权利要求1至4中任一项所述的经分离的组合物，其中所述γδT细胞包含Vδ1T细胞和Vδ2T细胞。6.如权利要求1至5中任一项所述的经分离的组合物，其中所述组合物中存在的所述细胞的至少30％是NK细胞。7.一种包含细胞的经分离的组合物，其中所述细胞的至少90％由NK细胞和γδT细胞组成，其中所述细胞的至少10％是Vδ1T细胞，所述细胞的至少5％是Vδ2T细胞，并且所述细胞的至少30％是NK细胞。8.如权利要求7所述的经分离的组合物，其中所述组合物中存在的所述γδT细胞的至少40％表达CD56。9.如权利要求1至8中任一项所述的经分离的组合物，其中所述γδT细胞包含Vδ1T细胞，并且所述Vδ1T细胞的至少15％表达NKp30。10.如权利要求1至9中任一项所述的经分离的组合物，其中所述γδT细胞包含Vδ1T细胞，并且所述Vδ1T细胞的少于50％表达CD27。11.如权利要求1至10中任一项所述的经分离的组合物，其中所述经分离的组合物包含工程化NK细胞和γδT细胞。12.如权利要求1至11中任一项所述的经分离的组合物，其用于治疗。13.如权利要求1至12中任一项所述的经分离的组合物，其用于治疗癌症、感染性疾病或炎性疾病的方法。14.一种扩增不受MHC限制的非γδ+淋巴细胞的方法，其包括在存在白介素
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15(IL
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15)和不存在白介素
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4(IL
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4)的情况下，使用抗TCRδ可变1(抗Vδ1)抗体或其片段来刺激包含γδT细胞和NK细胞的混合细胞群，并且培养所述混合细胞群。15.一种制备包含细胞群的组合物的方法，所述细胞群富集不受MHC限制的淋巴细胞，其中所述方法包括：(1)在不存在IL
‑
4的情况下，在所述培养的第一天，在以下物质的存在下，培养从受试者获得的样品：(i)抗Vδ1抗体或其片段；和(ii)IL
‑
15；以及(2)分离从所述样品中培养的细胞群。16.如权利要求15所述的方法，其中所述方法的步骤(1)包括将所述样品培养至少7天，诸如至少14天。17.如权利要求15或权利要求16所述的方法，其中步骤(2)中分离的所述细胞群中存在
的所述不受MHC限制的淋巴细胞的至少70％表达CD56。18....

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：伽玛德治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：