NKT细胞培养基及培养方法技术

本发明专利技术涉及肿瘤浸润NKT细胞培养基及培养方法。本发明专利技术的肿瘤浸润淋巴细胞培养基包括细胞因子和细胞培养成分，其中，所述细胞因子包括TNF

【技术实现步骤摘要】
NKT细胞培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种NKT细胞培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]自然杀伤T细胞(Natural Killer T,NKT)是一类特异化的异质性T细胞，其表面同时具有T细胞受体又有NK细胞受体，能够接到先天性免疫和获得性免疫。CD1d限制性的NKT细胞主要分为I型和II型。近年来，NKT细胞，尤其是I型NKT用于肿瘤免疫治疗受到了越来越多的关注。目前在临床上通常是从分离的病人外周血PBMC中加入不同细胞因子组合进行培养扩增。为了获得能够用于临床级的具有肿瘤杀伤效果的NKT细胞，需要的数量通常较大。而外周血中I型NKT细胞所占的比例也通常较低，小于1％，体外扩增培养难度较大。除了血液PBMC，在肿瘤组织中也存在浸润的NKT细胞。对于部分瘤种，NKT的浸润可能预示了良好的预后。在实体瘤尤其是高度晚期的实体瘤组织中，浸润的NKT通常会被肿瘤微环境(TME)中的多个通路所抑制。此外，与肿瘤浸润NKT细胞相比，外周血NKT细胞缺少表达肿瘤归巢相关的趋化因子受体(如CXCR3、CCR5、CCR7等)，导致外周血来源的NKT细胞难以归巢至实体瘤并浸润至实体瘤内部，对实体肿瘤的杀伤效果十分有限。而实体瘤中天然状态下浸润的NKT细胞不但数量较少，而且还普遍处于被肿瘤微环境免疫抑制的状态。因此，如果能从实体瘤组织中离体扩增培养获得足够临床治疗用量的肿瘤浸润NKT细胞并将其由瘤内免疫抑制状态重新转变为激活状态，将可为NKT细胞用于肿瘤免疫临床治疗提供一项全新的选择。然而目前仍然缺乏有效离体扩增培养肿瘤浸润NKT细胞的方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术第一方面提供一种肿瘤浸润淋巴细胞培养基，包括细胞因子和细胞培养成分，其中，所述细胞因子包括TNF
‑
α和IFN
‑
γ中的一种或两种，和IL
‑
15。
[0004]在一个或多个实施方案中，所述培养基还包含刺激型抗体，所述刺激型抗体包括CD28抗体和/或CD137抗体。
[0005]在一个或多个实施方案中，所述肿瘤浸润淋巴细胞培养基为肿瘤浸润NKT细胞培养基。
[0006]在一个或多个实施方案中，所述肿瘤浸润淋巴细胞培养基用于培养肿瘤浸润NKT细胞。优选地，所述肿瘤浸润NKT细胞来自肿瘤组织或肿瘤体液。
[0007]在一个或多个实施方案中，肿瘤浸润NKT细胞是I型NKT细胞。
[0008]在一个或多个实施方案中，所述培养基为血清培养基或无血清培养基。在一个或多个实施方案中，所述培养基还含有血清。优选地，血清浓度为0
‑
10(v/v)％，更优选为3
‑
5(v/v)％。
[0009]在一个或多个实施方案中，所述细胞培养成分为淋巴细胞基础培养基。
[0010]在一个或多个实施方案中，所述培养基中IL
‑
15的浓度为1
‑
4000U/mL，优选100
‑
4000U/mL，更优选500
‑
4000U/mL，更优选1000
‑
3000U/mL，更优选1000
‑
2000U/mL。
[0011]在一个或多个实施方案中，所述培养基中TNF
‑
α的浓度为0
‑
500pg/mL，优选0
‑
200pg/mL，更优选5
‑
100pg/mL，更优选10
‑
50pg/mL，进一步更优选10
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20pg/mL。
[0012]在一个或多个实施方案中，所述培养基中IFN
‑
γ的浓度为0
‑
2000U/mL，优选100
‑
1000U/mL，更优选100
‑
500U/mL，进一步更优选100
‑
200U/mL。
[0013]在一个或多个实施方案中，所述培养基中CD28抗体的浓度为0
‑
200μg/mL，优选5
‑
100μg/mL，更优选5
‑
40μg/mL，进一步更优选5
‑
10μg/mL。
[0014]在一个或多个实施方案中，所述培养基中CD137抗体的浓度为0
‑
200μg/mL，优选5
‑
100μg/mL，更优选5
‑
25μg/mL，进一步更优选5
‑
10μg/mL。
[0015]在一个或多个实施方案中，所述细胞因子还包括GM
‑
CSF、IL
‑
4、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
18、IL
‑
21中的任一种或多种。
[0016]在一个或多个实施方案中，所述细胞因子还包括GM
‑
CSF和/或IL
‑
4。优选地，所述细胞因子还进一步包括IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
18、IL
‑
21中的任一种或多种。
[0017]在一个或多个实施方案中，所述培养基还包括选自以下任一组的细胞因子：(1)IL
‑
7，(2)GM
‑
CSF、IL
‑
4、IL
‑
7、IL
‑
21，(3)GM
‑
CSF、IL
‑
7、IL
‑
18。
[0018]在一个或多个实施方案中，所述培养基中GM
‑
CSF的浓度为0
‑
3000U/mL，优选100
‑
2000U/mL，更优选100
‑
1000U/mL，更优选100
‑
500U/mL或500
‑
1000U/mL。
[0019]在一个或多个实施方案中，所述培养基中IL
‑
4的浓度为0
‑
2000U/mL，优选100
‑
1000U/mL，更优选100
‑
500U/mL或500
‑
1000U/mL。
[0020]在一个或多个实施方案中，所述培养基中IL
‑
7的浓度为0
‑
2000U/mL，优选100
‑
1000U/mL，更优选100
‑
500U/mL或500
‑
1000U/mL。
[0021]在一个或多个实施方案中，所述培养基中IL
‑
12的浓度为0
‑
1500U/mL，优选100
‑
1000U/mL，更优选1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤浸润淋巴细胞培养基，包括细胞因子和细胞培养成分，其中，所述细胞因子包括TNF
‑
α和IFN
‑
γ中的一种或两种，和IL
‑
15，优选地，所述培养基还具有选自以下的一个或多个特征：所述培养基用于培养肿瘤浸润NKT细胞，所述细胞培养成分为淋巴细胞基础培养基，所述培养基还包含刺激型抗体，所述刺激型抗体包括CD28抗体和/或CD137抗体，所述培养基还包括α
‑
糖基神经酰胺或其类似物或衍生物，所述培养基中IL
‑
15的浓度为1
‑
4000U/mL，优选100
‑
4000U/mL，所述培养基中TNF
‑
α的浓度为0
‑
500pg/mL，优选0
‑
200pg/mL，所述培养基中IFN
‑
γ的浓度为0
‑
2000U/mL，优选100
‑
1000U/mL，所述培养基中CD28抗体的浓度为0
‑
200μg/mL，优选5
‑
100μg/mL，所述培养基中CD137抗体的浓度为0
‑
200μg/mL，优选5
‑
100μg/mL，所述培养基包含或不包含血清或血清替代成分。2.如权利要求1所述的肿瘤浸润淋巴细胞培养基，其特征在于，所述细胞因子还包括GM
‑
CSF、IL
‑
4、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
18、IL
‑
21中的任一种或多种，优选地，所述培养基中GM
‑
CSF的浓度为0
‑
3000U/mL，优选100
‑
2000U/mL，所述培养基中IL
‑
4的浓度为0
‑
2000U/mL，优选100
‑
1000U/mL，和/或所述培养基中IL
‑
7的浓度为0
‑
2000U/mL，优选100
‑
1000U/mL，和/或所述培养基中IL
‑
12的浓度为0
‑
1500U/mL，优选100
‑
1000U/mL，和/或所述培养基中IL
‑
18的浓度为0
‑
2000U/mL，优选200
‑
1500U/mL，和/或所述培养基中IL
‑
21的浓度为0
‑
2000U/mL，优选100
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1000U/mL。3.如权利要求1或2所述的肿瘤浸润淋巴细胞培养基，其特征在于，所述肿瘤浸润淋巴细胞培养基还包括共刺激抗体，所述共刺激抗体包括选自CD40抗体、OX
‑
40抗体和CD16抗体中的任一种、两种或三种，优选地，所述培养基中CD40抗体的浓度为0
‑
200μg/mL，优选10
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100μg/mL，和/或所述培养基中OX
‑
40抗体的浓度为0
‑
100μg/mL，优选1
‑
50μg/mL，和/或所述培养基中CD16抗体的浓度为0
‑
200μg/mL，优选10
‑
100μg/mL。4.如权利要求1或2所述的肿瘤浸润淋巴细胞培养基，其特征在于，所述培养基还包括免疫检查点抑制剂，优选地，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：金华君，何周，李甜甜，郭静，马星明，黄晨，
申请(专利权)人：上海君赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：