检测湿疹-血小板减少性紫癜的引物组合、试剂和试剂盒、WASP基因突变体及应用制造技术

本发明专利技术属于医学诊断技术领域，具体涉及检测湿疹

【技术实现步骤摘要】
检测湿疹
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血小板减少性紫癜的引物组合、试剂和试剂盒、WASP基因突变体及应用


[0001]本专利技术属于医学诊断
，具体涉及检测湿疹
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血小板减少性紫癜的引物组合、试剂和试剂盒、WASP基因突变体及应用。

技术介绍

[0002]湿疹
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血小板减少性紫癜(MIM 301000)，是一种X连锁隐性遗传性疾病，以血小板减少伴血小板体积减小、湿疹、免疫缺陷三联征为主要表现，同时患者易患自身免疫性疾病和淋巴瘤。如不经造血干细胞移植，WASP蛋白表达阴性患者平均生存期仅15岁左右。根据WASP基因不同突变形式，临床可表现为典型型、X连锁血小板减少症(X
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linked thrombocytopenia，XLT)、间歇性X连锁血小板减少症(intermittent X
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linked thrombocytopenia，IXLT)和X连锁粒细胞减少症(X
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linked neutrapenia，XLN)几种不同临床类型。其中XLN无血小板减少和血小板体积减小等特点，主要表现为先天性中性粒细胞减少。目前该病的估计发病率约1/100000活产儿，该病几乎只影响男性，北美地区发病率为1/250000活产男婴。
[0003]湿疹
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血小板减少性紫癜致病基因WASP(MIM 300392)定位于染色体Xp11.23
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p11.22，基因全长7.6kb，包含12个外显子和11个内含子，编码502个氨基酸组成的的WASP蛋白(WASP)。WASP通过发夹状结构呈非活化状态。多种信号可活化WASP，打开发夹结构，促进下游肌动蛋白的多聚化和细胞骨架重塑。WASP是一种造血系统特异表达的细胞内信号传导分子和骨架蛋白，调节肌动蛋白多聚化，促进细胞骨架及免疫突触形成。目前已有超过300种WASP基因致病突变报道。错义突变是最常见的突变类型，其次为拼接位点突变、缺失突变、无义突变、插入突变和复合突变。大多数错义突变位于第1
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4外显子，拼接位点突变多位于第6
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10内含子，无义突变和插入/缺失、复合突变分布于整个WASP基因。
[0004]基因突变是导致湿疹
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血小板减少性紫癜发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊湿疹
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血小板减少性紫癜的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断，研发检测方法，确定突变位点，助力湿疹
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血小板减少性紫癜基因突变的筛查和诊断，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗，具有中药意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供检测湿疹
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血小板减少性紫癜的引物组合、试剂和试剂盒、WASP基因突变体及应用，丰富湿疹
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血小板减少性紫癜的致病突变谱，精准判断湿疹
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血小板减少性紫癜，用于湿疹
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血小板减少性紫癜的遗传学诊断以指导治疗，以及胚胎植入前遗传学诊断和优生优育。
[0006]本专利技术提供了一种检测湿疹
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血小板减少性紫癜的引物组合，所述引物组合包括扩增引物和测序引物；
[0007]所述扩增引物包括扩增引物1和/或扩增引物2；
[0008]所述扩增引物1包括上游引物WASP
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1F和下游引物WASP
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1R；所述WASP
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1F包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；所述WASP
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1R包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
[0009]所述扩增引物2包括上游引物WASP
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2F和下游引物WASP
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2R；所述WASP
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2F包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；所述WASP
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2R包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
[0010]优选的，所述测序引物包括测序引物1和/或测序引物2；
[0011]所述测序引物1包括上游引物WASP
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Seq1F和下游引物WASP
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Seq1R；所述WASP
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Seq1F包括如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；所述WASP
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Seq1R包括如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；
[0012]所述测序引物2包括上游引物WASP
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Seq2F和下游引物WASP
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Seq2R；所述WASP
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Seq2F包括如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列；所述WASP
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Seq2R包括如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。
[0013]本专利技术还提供了上述技术方案所述的引物组合在制备检测湿疹
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血小板减少性紫癜的试剂中的应用。
[0014]优选的，所述试剂包括检测WASP基因突变体的试剂；所述WASP基因突变体包括c.132+1G>A和/或c.1110delA。
[0015]本专利技术还提供了一种WASP基因突变体，所述WASP基因突变体包括c.132+1G>A和/或c.1110delA。
[0016]本专利技术还提供了上述技术方案所述的WASP基因突变体作为检测靶点在a1)～a6)任意一种或多种中的应用：
[0017]a1)制备检测湿疹
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血小板减少性紫癜的试剂；a2)制备预防湿疹
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血小板减少性紫癜试剂盒；a3)制备诊断湿疹
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血小板减少性紫癜试剂盒；a4)制备孕前和/或产前遗传病筛查试剂盒；a5)制备孕前和/或产前遗传病诊断试剂盒；a6)制备辅助治疗湿疹
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血小板减少性紫癜试剂盒。
[0018]本专利技术还提供了一种检测上述技术方案WASP基因突变体的试剂，其特征在于，所述试剂包括上述技术方案所述的引物组合。
[0019]优选的，所述试剂还包括dNTP，PCR缓冲液，镁离子和Tap聚合酶中的一种或多种。
[0020]本专利技术还提供了上述技术方案所述的试剂在制备b1)～b5)中任意一种或多种试剂盒中的应用：
[0021]b1)预防湿疹
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血小板减少性紫癜试剂盒；b2)诊断湿疹
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血小板减少性紫癜试剂盒；b3)孕前和/或产前遗传病筛查试剂盒；b4)孕前和/或产前遗传病诊断试剂盒；b5)辅助治疗湿疹
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血小板减少性紫癜试剂盒。
[0022]本专利技术还提供了一种诊断湿疹
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血小板减少性紫癜的试剂盒，包括上述技术方案所述的试剂。
[0023]本专利技术通过扩增引物能够扩增野生型WASP基因和湿疹
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测湿疹
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血小板减少性紫癜的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括扩增引物和测序引物；所述扩增引物包括扩增引物1和/或扩增引物2；所述扩增引物1包括上游引物WASP
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1F和下游引物WASP
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1R；所述WASP
‑
1F包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；所述WASP
‑
1R包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；所述扩增引物2包括上游引物WASP
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2F和下游引物WASP
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2R；所述WASP
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2F包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；所述WASP
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2R包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述测序引物包括测序引物1和/或测序引物2；所述测序引物1包括上游引物WASP
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Seq1F和下游引物WASP
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Seq1R；所述WASP
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Seq1F包括如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；所述WASP
‑
Seq1R包括如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；所述测序引物2包括上游引物WASP
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Seq2F和下游引物WASP
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Seq2R；所述WASP
‑
Seq2F包括如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列；所述WASP
‑
Seq2R包括如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。3.权利要求1或2所述的引物组合...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，邓亚兰，吴伟娟，王维，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：